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1、第二章 食用菌制种技术,关于制种的几个概念 第一节 制种场地、设备、用具及消毒药品 第二节 本章重点,4.5学时,有关概念,菌种：由人工方法培育出来的纯双核菌丝体。 母种：由孢子或者组织分离而得到的最初菌种。 原种：将母种扩大到新培养基上培育出来的菌丝体。 栽培种：由原种再扩大接种一次培养而得。直接应用于生产。 消毒和灭菌。,栽培种,第一节 制种场地、设备等,一、制种场地 二、常用设备 三、制种用具 四、消毒药品,一、制种场地,闲散房屋均可用。新建时选择场地要注意：交通方便，水电齐全，周围环境要卫生。 建造可参照 “”字型房，以方便生产。包括：配料室、灭菌室、冷却室、接种室、菌种培养室、销售室
2、以及库房等。,二、常用设备,（一）拌料和装料设备 （二）灭菌设备 （三）接种设备 （四）培养设备,（一）拌料和装料设备,拌料设备：可人工拌料，也可用拌料机，有桶式和开放式两种。 装料设备：人工装料或用装瓶装袋两用机。关键是料的松紧度，可3-5人合作，约1000袋/h。,（二）灭菌设备,根据灭菌压力：高压灭菌设备和常压灭菌设备。 高压灭菌特点：温度高，灭菌速度快，灭菌彻底，但每次灭菌量小，投资较大。 高压灭菌设备：手提式高压灭菌锅。立式高压灭菌锅。卧式高压灭菌锅。,常压灭菌特点：容量大(0.5-1吨料/次)，投资小，但时间长，灭菌效果较差。 常压灭菌设备：常压灭菌灶、灭菌室或灭菌包（可利用节能型
3、多功能蒸汽炉或普通锅炉）。,（三）接种设备,洁净工作台：适合接母种和少量原种。 接种箱：成本低，容量较大，适合各级菌种。 接种帐：适于接栽培袋，但效果稍差。 接种室：与接种帐类似。 电炉和蒸汽接种：简易，成功率80%以上。,（四）培养设备,培养室：要清洁卫生，有调温设备。可用于原种、栽培种培养，要做一些培养架，便于菌种检查和提高空间利用率。 电热恒温培养箱：温度可调，容积小。,三、制种用具,、酒精灯； 、托盘天平； 、地泵； 、水桶、盆、铝锅； 、镊子； 、接种钩和接种铲； 、试管、菌种瓶和菌种袋； 、漏斗； 、电炉或煤炉； 另外，还需温度计、湿度计、量筒和量杯、磨口瓶、塑料绳、报纸以及pH试
4、纸等。,四、消毒药品,1. 75%酒精 2. 40%甲醛高锰酸钾 3. 汽雾消毒剂 4. 高锰酸钾（0.1%-0.2%） 5. 5%石炭酸(苯酚) 6. 1%-2%来苏儿 7. 2%-5%漂白粉 8. 硫磺 各种药品最好轮换使用，以防产生抗药性。,第二节 三级菌种制作技术,一、母种制作技术 （一）母种培养基制备 （二）组织分离法 （三）母种的扩大 二、原种制作技术 （一）原种培养基的制备 （二）原种的制作 三、栽培种制作技术 （一）栽培种培养基制备 （二）栽培种的制作 四、菌种污染的原因及防止措施,一、母种制作技术,培养基的概念 常用的母种培养基配方 母种培养基的制作,（一）母种培养基的制备,
5、1.培养基的概念,培养基是按照食用菌生长繁殖所需要的各种营养，用人工方法配制而成的营养基质。,2. 母种培养基配方(g/1000ml),除配方1，其它均需加入KH2PO43克，MgSO41.5克，VB12片。,3.母种培养基的制作,PDA培养基的制作过程： 煮土豆，取滤液。开锅后，文火煮30min，适当搅拌，使营养充分溶出。 补足水，加药品溶化。琼脂溶解较慢并易溢锅，烧开后减小火力并搅拌1min左右。,分装试管。常用试管为18mm180mm，每管约装培养基8-10ml。加棉塞后3个一把绑好。 高压灭菌。在1.1-1.2kg/cm2压力下灭菌30-40min。灭菌程序：放入物品，拧紧锅盖加热，当
6、压力达到0.5kg/cm2时，排出冷空气，关闭放气阀。压力上去后记时，维持所需时间。,摆斜面。灭完菌后，锅体自然冷凉，压力降到0.5kg/cm2以下时，缓慢放气，气排尽后取出试管，趁热摆斜面，40以下即可凝固。,母种培养基制作流程,（二）菌种组织分离法,组织分离的概念、种类和特点 组织分离的方法,1.组织分离的概念、种类和特点,概念：是指在双核菌丝的组织上切取一块组织，使其在培养基上萌发而获得纯双核菌丝体的方法。称作原始母种。 种类：据切取组织的来源，分为子实体组织分离、菌核、菌索组织分离和基内菌丝组织分离。 特点：简单易行；为无性繁殖。,2.平菇子实体组织分离方法,培养基制备。 种菇选择：是
7、指用来进行组织分离的子实体。要选择适宜出菇期出菇早、出菇整齐、形态正常、无病虫害、产量高的栽培袋，从上选择肥大、肉厚、6成熟的幼嫩子实体，切去多余菌柄。 接种场地消毒。,种菇处理：表面消毒。 接种过程：双手表面消毒，把种菇带入接种箱，点燃酒精灯，种菇表面消毒后从中间纵向撕开，用无菌小镊子夹取菌柄、菌盖交界处的菌肉，迅速放入培养基上，塞上棉塞。特殊种类：灵芝、金针菇、鸡腿菇等。,培养。适宜条件下，2-3天组织块上即萌发出菌丝，8-10天可长满。期间要检查，从中选留无污染、菌丝洁白浓密、长速正常的菌种。 基内菌丝组织分离以及菌核和菌索的组织分离过程类似，只是所取部位不同。 原始母种还可转接扩繁3-
8、4次，以增加母种量。 长满后暂时不用的母种要置于2-5下冷藏。,（三）母种的扩大,培养基的制备（同前） 接种场地的消毒灭菌（同前） 母种的扩大 培养,3.母种的扩大,要严格无菌操作。母种试管表面消毒，然后靠近灯焰用接种钩将母种横切成若干份，再用接种铲将横切的母种分成2-3份，取一份带12mm厚的培养基放入新的培养基斜面上。,4.培 养,在适宜条件下培养。2-3天后，检查菌丝的生长及杂菌污染情况，若在接种块或培养基表面上出现独立的小菌落或奶油状小点，即为污染，应立即淘汰。,二、原种制作技术,（一）原种培养基的制备 （二）原种的制作,（一）原种培养基的制备1.常用原种培养基配方(%),麦粒预处理：
9、冷水浸泡12小时后水煮，开锅后文火20min左右，麦粒煮透，胀而不破，用水冷却后沥干表面水分，拌入石膏即可。,2.原种培养基制备,选定配方。分别称取各物质。 加水拌料。含水量约60%65%，料水比约1:1.31.5。关键是拌匀，用量少的水溶性物质要先溶于水，再拌入料中。,装瓶。常用容器为750ml罐头瓶或菌种瓶，每瓶装干料2.53两。料要装匀，松紧适度，装至瓶肩下1cm处，料面压平。 打洞封口。擦净瓶口，中央打直径2cm的孔至瓶底。用两层报纸和一层聚丙烯膜封口。打洞可增加料底透气性。,灭菌：高压灭菌或常压灭菌。 常压灭菌：视灭菌量，需810h以上。注意：一是培养料量要适中，物品排列合理，保证蒸
10、汽流通。二是大火猛烧，防止压力忽高忽低。三是灭菌后闷46h再出锅。 高压灭菌：1.41.5kg/cm2压力下灭1.52h，压力不稳或压力低时要延时。高压灭菌应注意：,灭菌锅内冷空气必须排尽。否则会产生假蒸汽压。 培养基必须排放有序，蒸汽畅通。 灭菌完毕应缓慢减压。自然降温或缓慢排气，防止液体突然沸腾弄脏瓶塞，或瓶、袋胀破。 棉塞防湿。灭菌时棉塞不能接触锅壁，并盖报纸或防水纸，防止冷凝水打湿棉塞。,（二）原种的制作,场地消毒：将料瓶和用具放入接种箱熏0.52h。 接种：母种表面消毒后带入接种箱，点燃酒精灯，再次对试管外壁消毒。在灯焰范围内，用接种钩将母种分成46份，取一份放入料面中部，封口。两人
11、合作既好又快。 培养：在适宜条件下培养。定期检查。菌丝长满后，再继续培养35天。,三、栽培种制作技术,（一）栽培种培养基的制备 培养基配方：与原种培养基可以相同。 菌种袋规格：选用聚丙烯或高密度聚乙烯塑料袋。1732cm，一端开口，每袋装干料6两。1740cm，两端开口，每袋装干料1斤。,拌料装袋，注意： 料松紧度适宜；袋壁光滑。 料面要平，中间打孔，以利通气。 绳要绑紧，尽量排除袋内空气，防止涨袋。 灭菌：与原种相同。,（二）栽培种的制作,场地消毒：同前。 接种方法：双手表面消毒后进入接种箱；原种表面消毒，放于三角架或空瓶上，瓶口表面消毒、火焰灭菌；用镊子把菌种扒成1-2cm小块，均匀接于料
12、面，绑口。,接种时注意： 接种过程应在酒精灯旁进行。 每瓶原种接栽培种1015袋(两头接种)或50瓶左右。 接种用具使用前表面消毒，火焰灭菌。 接完种后，据接种量确定封口松紧度。 培养：同原种。,四、菌种污染原因及防止措施,（一）常见杂菌种类：细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。,（二）污染原因及防止措施,培养基灭菌不彻底。表现为瓶壁和袋壁上出现杂菌菌落。原因：灭菌压力或时间不足，或者高压灭菌时锅内空气没有排尽。 措施：锅内空气排尽；保证灭菌压力和时间。,菌种带杂菌。表现为菌种块周围首先污染。 措施：选用纯正菌种。 接种操作中污染。污染点常分散在培养基表面。原因：接种时无菌操作不严格。 措施：接种场所及工具消毒、灭菌要彻底，接种操作在灯焰形成的无菌区进行，并要敏捷迅速。,培养室环境污染。培养室环境不卫生，或通风不良、潮湿等导致棉塞等封口材料受潮而污染。 措施：选择清洁、高燥的场地作菌种培养室。 破口污染。灭菌操作或运输中不小心，使容器破裂或出现微孔而污染。 措施：灭菌操作或运输中要轻拿轻放，所用器具不能带毛刺。,结 束,本章重点,菌种的本质，三级菌种的概念。 三级菌种的制作方法以及制作过程中应注意的问题。 常用的消毒、灭菌方法。,结 束,