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1、藏药裸茎金腰黄酮类化合物抗肿瘤作用及对免疫细胞活性影响的实验研究目的：研究藏药裸茎金腰中提取的局部黄酮类化合物的抗肿瘤活性及对免疫 细胞活性的影响，为该类化合物的临床应用提供实验依据。方法： (1)应用 MTT 比色法检测DTFG寸白血病细胞K562和胃癌细胞SGC-7901增殖的影响，TTF对 白血病耐药细胞K562/ADM和胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。(2) 检测TTF体外诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。采用荧光显微镜观察细胞 形态变化、透射电镜观察细胞的超微结构变化，采用流式细胞仪检测TTF对胃癌 细胞SGC-7901细胞周期分布的影响，采用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡形成的 D
2、NA片 段。(3) 建立豚鼠I型超敏反响模型，采集血液，收集腹腔液，应用淋巴细胞分层液法别离淋巴细胞，Percoll不连续密度梯度法别离EOS (4) MTT比色法 测定DTFG和TTF对豚鼠淋巴细胞和EOS舌性的影响。结果：1 不同浓度的DTFG作用于白血病细胞K562和胃癌细胞SGC-7901后，在96h内没有表现出明显抑制作用(P>0.05 )。2 不同浓度的TTF作用于 白血病耐药细胞K562/ADM后，从72h开始表现出不同程度的抑制作用， 随时间 延长，TTF对细胞增殖的抑制作用逐渐增强，抑制率最高达 52.82 %。药物作用不同时间 24h、48h、72h、96h 的 IC
3、<sub>50</sub>分别为 300.31mg/L、 170.28mg/L、65.69mg/L、19.81mg/L。3.不同浓度的TTF作用于胃癌细胞 SGC-7901后，在48h后细胞生长均受到不同程度的抑制。在72h内，浓度大于4mg/L的TTF,随时间延长，OD值逐渐下降，与对照 组相比，差异具有统计学意义(Pv0.01 )，同时抑制率逐渐增加，最高可达80.36 %。各组之间两两比较，OD值差异具有统计学意义PV 0.05 药物作用不同时间 24h、48h、72h、96h 的 IC<sub>50</sub>分别为 142.17mg/L
4、、29.23mg/L、8.33mg/L、9.75mg/L。4.浓度为 8mg/L 的 TTF作用于胃癌细胞SGC-7901 48h后，可在荧光显微镜和透射电镜下观察到凋亡细胞的特征；不同 浓度的TTF作用于胃癌细胞SGC-7901 48h后，流式细胞仪检测细胞周期，结果显示细胞分裂过程主要受阻于 G<sub>0</sub>/ G<sub>1</sub>期，出现明显的 凋亡峰，凋亡率最高可达 40.4%，与未接受药物处理的对照组相比差异具有统 计学意义Pv0.01 ; DNA凝胶电泳结果出现DNA弟状条带。5. DTFG乍用于豚鼠血液淋巴细胞，在
5、72h时OD值与对照组相比下降Pv0.05 ;作用于腹腔液淋巴细胞，从48h开始，OD值与对照组相比下降Pv0.05 。DTFG乍用于豚鼠血液和腹腔液EOS不同时间测得OD值与对照组相比，差异无 统计学意义P> 0.05 。6. 不同浓度TTF作用于豚鼠血液淋巴细胞，测得OD值与对照组相比，差异 无统计学意义P>0.05 。4mg/L TTF作用于豚鼠腹腔液淋巴细胞，测得 OD值 与对照组相比下降，差异具有统计学意义 Pv0.05。TTF与豚鼠血液、腹腔液EOS乍用后24h、72h时测得OD值与对照组相比上 升 Pv0.01 ，不同时间段PI均大于1。结论：1. DTFG寸白血病细胞K562和 胃癌细胞SGC-7901的增殖无抑制作用。2. DTFG在体外对豚鼠淋巴细胞活性具有抑制作用。3. TTF对白血病耐药细胞K562/ADM的增殖具有一定抑制作用，对胃癌细胞 SGC-7901的增殖具有较强 抑制作用。4. TTF可诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡。5. TTF在体外可促进豚鼠EOS 活性。