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1、简述PCR基本原理?PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性：模板DNA经加热至93 C左右一定时间后， 使模板DNA 双链或经PCR扩增形成的双链 DNA解离，使之成为单链， 以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板 DNA与引 物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后， 温度降至 55 C左右，弓I物与模板 DNA单链的互补序列配对结合； 引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作 用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与 半保留复制原理，
2、合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的 半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需24分钟，23小时就能将待扩目的基 因扩增放大几百万倍。二. 简述荧光定量 PCR基本原理？Ct值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时 所经历的循环数。?荧光域值(threshold )：是指PCR反应的前15个循 环的荧光信号，荧光域值的缺省设置是 3-15个循环的荧光 信号的标准偏差的10倍，即：threshold? Ct值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系1丨，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵 坐标代Ct值（如图2所示）。因此，只要获得未知样品 的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。三.简述PFGE优势用途？1对细菌DNA进行酶切后的脉冲场电泳分析，在分子水 平揭示细菌的指纹图谱。2.可对不同年代和不同地区的菌株建立PFGE图谱数据库，对某种病原菌的流行趋势进行分析和预测。3.不同实验室和国家不同菌毒株的比较分析，通过软件实现数据化和网络连接，用于传染源或污染源的追踪，快 速控制疫情。