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1、第六章 细胞内膜系统与蛋白质分选与原核细胞物不同的是真核细胞具有复杂的由内膜构成的功能区隔。细胞内膜系统指在结 构，功能或发生上相关的细胞内膜形成的细胞结构，包括核被膜、内质网、髙尔基体及苴形成的 溶酶体和分泌泡等，以及其它细胞器如线粒体，质体和过氧化物酶体等膜包用的细胞器（膜性细 胞器）。内膜系统形成了一种胞内网络结构，英功能主要在于两个方而：其一是扩大膜的总而积， 为酶提供附着的支架，如脂肪代谢、氧化磷酸化相关的酶都结合在细胞膜上。其二是将细胞内部 区分为不同的功能区域，保证各种生化反应所需的独特的环境。本章主要介绍内质网、髙尔基体、溶酚体、过氧化物酶体的功能和蛋白质分选，关于线粒 体、叶
2、绿体和细胞核的功能与蛋白质分选将分別在第七章（线粒体与叶绿体）和第十二章（细胞 核与染色体）中讲解。第一节内质网由KR. Porter、A. Claude和EF. Fullam等人于1945年发现，他们在观察培养的小鼠成纤 维细胞时，发现细胞质内部具有网状结构，建议叫做内质网endoplasmic reticulum, ER,后来发 现内质网不仅仅存在于细胞的“内质”部，通常还有质膜和核膜相连，并且与高尔基体关系密切， 并且常伴有许多线粒体。一、形态与组成内质网膜约占细胞总膜而积的一半，是貞核细胞中最多的膜。内质网是内膜构成的封闭的 网状管道系统。具有髙度的多型性。可分为粗而型内质网（roug
3、h endoplasmic reticulum, RER. 图 6-20）和光面型内质网（smooth endoplasmic reticulum, SER,图 6-21）两类。RER 呈扁平囊 状，排列整齐，膜围成的空间称为ER腔（lumen）,膜外有核糖体附着。SER呈分支管状或小 泡状，无核糖体附着。肌肉细胞中的肌质网是一种特化的SER,称为肌质网，可贮存Ca2+,引 起肌肉收缩。细胞不含纯粹的RER或SER,它们分别是ER连续结构的一部分。ER主要功能是合成蛋白质和脂类，分泌性蛋白和跨膜蛋白都是HER中合成的。ER合成 的脂类除满足自身需要外，还提供给髙尔基体、溶酶体、内体、质膜、线粒
4、体、叶绿体等膜性细 胞结构。ER膜中含大约60%的蛋白和40%的脂类，脂类主要成分为磷脂，磷脂酰胆碱含量较髙，鞘 磷脂含量较少，没有或很少含胆固醇°ER约有30多种膜结合蛋白，另有30多种位于内质网腔,这些蛋白的分布具有异质性，如：葡糖6磷酸酶，普遍存在于内质网，被认为是标志酶，核糖 体结合糖蛋白(ribophorin)只分布在RER, P450酶系只分布在SER。2沖图6-20 RER的形态图 6-21 SER 的形态 引自 二、RER的功能(一) 蛋白质合成蛋白质都是在核糖体上合成的，并且起始于细胞质基质，但是有些蛋白质在合成开始不久 后便转在内质网上合成，这些蛋白质主要有：向细
5、胞外分泌的蛋白、如抗体、激素：跨膜蛋 白，并且决定膜蛋白在膜中的排列方式：需要与苴它细胞组合严格分开的酶，如溶酶体的各种 水解酶：需要进行修饰的蛋白，如糖蛋白。C. Milstein (1972)发现从计髓瘤细胞提取的免疫球蛋白分子N端要比分泌到细胞外的N 端多出一段。G. Blobel和D. Sabatini等根据进一步的实验，提岀了信号假说(Signal hypothesis), 认为蛋白质上的信号肽，指导蛋白质转至内质网上合成。Blobel因此项发现获1999年诺贝尔生 理医学奖。蛋白质转入内质网合成至少涉及5种成分： 信号肽(signal peptide),是引导新合成肽链转移到内质网
6、上的一段多肽，位于新合成肽 链的N端，一般1630个氨基酸残基，含有6-15个带正电荷的非极性氨基酸，由于信号肽又是 引导肽链进入内质网腔的一段序列，又称开始转移序列(start transfer sequence) o 信号识别颗粒(signal recognition particle, SRP),由6种结构不同的多肽组成，结合一 个7SRNA,分子M 325KD,属于一种核糖核蛋fi(ribonucleoprotcin)0 SRP与信号序列结合，导 致蛋白质合成暂停。 SRP受体(SPR receptor),是膜的整合蛋白，为异二聚体蛋白，存在于内质网上，可 与SRP特异结合。 停止转移
7、序列(stop transfer sequence)，肽链上的一段特殊序列，与内质网膜的亲合力 很高，能阻止肽链继续进入内质网腔，使其成为跨膜蛋白质。 转位因子(translocator),由3-4个Scc61蛋白复合体构成的一个类似炸面圈的结构，每 个Sec61蛋白由三条肽链组成。蛋白质转入内质网合成的过程：信号肽与SRP结合肽链延伸终止一SRP与受体结合-SRP脱离信号肽一肽链在内质网上 继续合成，同时信号肽引导新生肽链进入内质网腔一信号肽切除一肽链延伸至终止一翻译体系解 散。这种肽链边合成边向内质网腔转移的方式，称为co-translation (图6-22)。(BIDDING OFSR
8、P TOSffiNALrcrTIM： CAUSES A PAUSE IMTRANS1AT3ONpartklo(SRP>SfiPBOUNDRIBOSOMG CLSCnvtiLVATTACItfSTOSRPRJCSPIORWERMEMBRANESFPDISPLACCD AND RECYCLED图622贵白质转移到内质网上合成的过程表3 些信号肽序列蛋白质信号序列PreproalbuminMet-Lys-Trp-Val-TiirPhe-Leu-Leu-Leu-Leu-Phe-Ile-Ser-Gly-Ser-Ala-Phe-Ser 1 Arg.Pre-IgG light chainMet-Asp
9、-Met-Arg-Ala-Pro-Ala-Gln-Ile-Phe-Gly-Phe-Leu-Leu-Leu-Leu-Phe-Pro-Gly- Thr-Arg-Cys 1 Asp.PrelysozymeMet-Arg-SerLeu-Leu-Ile-Leu-Val-Leu-Cys-Phe-Leu Pro-Leu-Ala-Ala-Leu-Gly I Lys.（二）蛋白质的修饰与加工包括糖基化、疑基化、酰基化、二硫键形成等，其中最主要的是糖基化，几乎所有内质网 上合成的蛋白质最终被糖基化。糖基化的作用是：使蛋白质能够抵抗消化酶的作用：赋予 蛋白质传导信号的功能：某些蛋白只有在糖基化之后才能正确折叠。糖基
10、一般连接在4种氨基酸上，分为2种：0连接的糖基化（CMinkcd glycosylation八 与Scr、Thr和Hyp的OH连接.连接的糖为半 乳糖或N乙酰半乳糖胺，在高尔基体上进行6连接的糖基化。糖胺(图6-23)。内质网上进行的为N-连接的糖基化。糖的供体为核昔糖(nucleotide sugar),如CMP-唾液酸、 GDP-甘露糖、UDP-N-乙酰葡糖胺等。糖分子首先被糖基转移酶转移到膜上的磷酸长醇(dolichol phosphate)分子上，装配成媒糖链。再被寡糖转移酶转到新合成肽链特左序列(Asn-X-Scr或 Asn-X-Thr)的天冬酰胺残基上。图 6-23 N-连接的糖基
11、化 引自 Molecular Biology of the Cell. 4th ed. 2002(三) 新生肽链的折叠、组装和运输COP II介导由内质网输出的膜泡运输，这种膜泡由内质网的排出位点(exit sites)以岀芽的 方式排岀，内质网的排出位点没有结合核糖体，随机分布在内质网上。不同的蛋白质在内质网腔 中停留的时间不同，主要取决于蛋白质完成正确折叠和组装的时间，这一过程是在属于hsp70家 族的ATP酶的作用下完成的，需要消耗能量。有些无法完成正确折叠的蛋白质被输出内质网， 转入溶酶体中降解掉，大约90%的新合成的T细胞受体亚单位和乙酰胆碱受体都被降解掉，而 从未到达靶细胞膜。三、
12、ER的其它功能合成膜脂：大多数膜只是完全在内质网中合成的，例外的情况包括：鞘磷脂是在内质网 上开始合成的，但完成于高尔基体；某些线粒体和叶绿体独有的膜脂是驻留在这些细胞器中的 酶催化合成的。ERA成的膜脂以膜跑运输的方式转运至髙尔基体，溶酶体和质膜上，或借磷脂 转移蛋白(phospholipid transfer protein, PTP)形成水溶性复合物，转至其他膜上。解毒作用：SER中的P450酶系属于单加氧酶(monooxygenase),又称为多功能氧化酶(mixed function oxidase)、疑化酶(hydroxylase),因其还原态的吸收稣在450nm处，故乳 主要分布
13、在 SER中，但也存在于质膜、线粒体、高尔基体、过氧化物酶体、核膜等细胞器的膜中，具有解 毒作用，通常可将脂溶性有毒物质，代谢为水溶性物质，使有毒物质排出体外。有时也会将致癌 物代谢为活性致癌物。P450种类繁多，但都是与其他辅助成分组成一个呼吸链来实现其功能， 呼吸链中的P450还原酶实际就是一种黄素蛋白。P450催化02分子中的一个原子加到底物分子 上使之瓮化，另一个氧原子被NADH或NADPH提供的氢还原生成水，在此氧化过程中无髙能 磷酸化合物生成。街体类激素的合成：在生殖腺和肾上腺的内分泌细胞中，SER、线粒体，可能还有高尔基 体上的一些酶共同参与馅体类激素的合成。调节血糖浓度：使葡糖6-磷酸水解为磷酸和匍萄糖，释放糖至血液中。细胞中的糖元可被 酶转化为匍糖磷酸，再转变为匍糖6-磷酸，但由于膜对磷酸化的糖是高度不通透的，葡糖6- 磷酸只有在去磷酸化以后才能通过质膜，进入血液。形成一些特殊结构：如肌细胞中的SER特化成的肌质网可储存钙离子，作为细胞内信号物 质。支撑作用：内质网是细胞内最丰富的膜，形成了一种网络结构，提供机械支撑作用，并成 为细胞质中酶附着的支架。