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1、Elisa实验报告实验名称：酶联免疫吸附剂测定实验原理：酶联免疫吸附测定是一种免疫测定技术。测定中，先使抗原吸附在固相载体上，然后加 待测的抗体，再用某种酶标记抗体，形成抗原-抗体-酶标记抗体的“双抗体夹心，此时酶 仍保有活性，同时标记抗体亦有免疫活性。之后再参加酶的底物，在酶的催化下产生反响 并产生有色物，颜色深浅与待测物质的量直接相关。至此，酶的催化放大作用与免疫反响 的特异性相完美结合，提高了测定的准确性与灵敏度。实验材料与试剂：1 聚苯乙烯微量细胞培养板平板,96孔。2 酶联免疫检测仪。3. 辣根过氧化物酶羊抗兔IgG。4. 包被液：0.05 mol/L碳酸缓冲液pH 9.6 :Na2
2、CO3 0.15g,NaHCO3 0.293g,蒸馏水稀释至100 ml。5 稀释液PBS-TweeNaCI 8g,KCI 0.2g,KH2PO4 0.2g,Na2HPO4 12H2O 2.9g,Tween-20, 0.5ml ,蒸馏水加至1000ml。6 洗涤液：同稀释液。7.封闭液：0.5 % 质量分数BSA用 PBS配制。8 邻苯二胺溶液底物:配制：0.1 moI/L 柠檬酸2.1g/100ml, 取 6.1ml ,0.2 mol/L Na2HPO4 - 12H2O 7.163g/100ml, 取 6.4ml, 加蒸馏水12.5ml,取邻苯二胺8mg溶解;临用前加30 % 体积分数H2O
3、2 40卩l9 .终止液：2 mol/L H2SO4。实验步骤：1 .包被抗原：用包被液将抗原作适当稀释,一般为110卩g/孔，每孔加200卩I, 37 C 温育30min。2 洗涤：倒尽板孔中液体，加200卩I洗涤液，反复三次，最后将反响板倒置在吸水纸上， 使孔中洗涤液流尽。3 .加封闭液200卩I，37 C温育30min。4 .洗涤同2。5 .加被检血清： 用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔200卩I。同时作稀释液对照。37 °C温育 30min。6 .洗涤同2。7 .加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG,每孔200卩I, 37 C温育30min。8 .洗涤同2。9 .加底物：邻苯二胺溶
4、液加 200卩I，室温暗处5min。10 .加终止液：每孔50卩I。11 .观察结果：用酶联免疫检测仪记录 OD490nr读数。实验结果数据如下:血清稀释1/4001/8001/16001/32001/64001/128001/256001/51200无1抗无抗原倍数(4)(8)(9)(10)(11)样本号组号1.4081.2401.2111.2281.1140.8100.6980.5190.3740.0941.0981.3570.9430.9961.0190.8950.6820.4150.2010.0671.4941.3541.2401.3341.1180.8590.6670.4720.28
5、10.083组平:均1.3331.3171.1311.1861.0840.8540.6820.4190.2850.175P.S:紫色数据表示异常实验讨论：1无一抗10数据值存在异常。理论上应趋近于零。可能是由于受污染所致实验现象比拟清晰，随浓度由浓到稀，颜色由深黄渐变为浅黄。2线性关系比拟明显。但斜率随浓度减小而有所增大。这可能是在使用取液器时有气泡混入，导致实际浓度低于理论上的浓度3组号(2) (4) (5)中3个样本数据差异较大，可能是因为配血清时混合不够均匀所致。这个实验采用了间接法测定，利用酶的催化放大作用提高了检测的灵敏度。作为一名精 仪系的学生，这给予我的启示就是，在直接测量精度如果遇到瓶颈时，没有适宜的方法提 高精度，那么可以考虑寻找一个“中介，而这个“中介应该具有“在变量产生微小变化 时能放大这种变化，或者用另一种形式表达这种变化的特性，从而测量变得可行。而该 实验中，最终效果就是我们可以直接通过颜色深浅大致看出浓度的不同。这一点很值得思 考。另外由于操作不熟练、不仔细，也带来了一些粗大误差，如无一抗(10)。这是我们实验中应该防止的。