实验二葡萄糖的一般杂质检查.docx

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1、实验二葡萄糖的一般杂质检查实验二葡萄糖的一般杂质检查一、目的要求1. 掌握一般杂质检査的原理、操作方法及限量计算方法。2. 熟悉药物中一般杂质检査的目的和意义。3. 掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属限量检査的根本原理和方法。二、根本原理葡萄糖是用淀粉以无机酸水解或在酶催化下经过水解得稀葡萄糖液，再经脱色、浓缩结晶制得。1. 国内生产方法有以下几种：酸水解法：以无机酸将淀粉水解为葡萄糖。C6HioO5n + 毗 0 罗-a nCsHAOe2双酶水解法：以生物酶为催化剂将淀粉水解为葡萄糖。C6HioO5n + 毗 0 ；恥 A nC6H12O6酸酶水解法：以盐酸为液化剂，糖化酶为催化剂，将

2、淀粉水解为葡萄糖。C6HioO 5n + nH20 讣總化唇 nC6H12O6根据葡萄糖生产工艺特点，应进行氯化物、重金属、碑盐等一般杂质检査，进行蛋白质、可溶性淀粉等特殊杂质检査。2. 各种杂质检査原理如下：氯化物检査法 氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用， 生成氯化银白色 浑浊液， 与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下处理生成的氯化银浑浊相比拟，测定供试品中氯化物的限量。Cl- + Ag -> AgCl I硫酸盐检査法药物中微量硫酸盐与氯化顿在酸性溶液中作用，生成 硫酸顿 微粒而显白色浑浊液，同一定量标准硫酸钾溶液与氯化顿在同样条件 下，用同法 处理生成的浑浊比校，判断药物中

3、含硫酸盐的限量。S04 2-十 Ba2+ - BaS04 |铁盐检査法三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氤酸盐生成红色可溶性 硫氤酸 铁络离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。Fe3+6SCN Fe SCN 6 3- 红色进行葡萄糖的铁盐检査时，需在显色前加硝酸3滴，煮沸5min,使Fe2+氧化为Fe3+。由于硝酸中可能含有亚硝酸，亚硝酸也能与硫氤酸根离子反响生成红色的亚硝酰硫帆化物，影响比色，因此参加显色剂之前加热煮沸有助 于除去氧化氮， 以消除氧化氮生产的亚硝酸干扰。重金属检査法重金属是指在实验条件下，能与 S2-作用生成硫化物而显色 的金属杂质，如，银、铅 . 汞、铜、镉、钮、确、佛、

4、锡、锌、钻、镰 等。在药品 生产过程中遇到铅的时机较多，且铅在体内易积蓄中毒，故检査 时以铅为代表。 硫代乙酰胺 thioacetamide 在弱酸性 pH 约 3. 5溶液中水解 , 产生硫化氢，可与重 金属离子结合生成有色硫化物的均匀沉淀，可与对照标 准液同法处理比拟。本方 法的适宜目视比色范围为 27mL溶液中含铅10? 20Pg,相当于标准铅溶液1? 2mL, 检査中根据规定含重金属的限量确定供试 品的取用量。CH3CSNH2+H20 CH3CONH2+H2SPb2+H2S PbS i + 2H+碑盐检査法 ?中国药典?主要采用古蔡氏Gutzeit法检査碑盐。其 原理是 利用金属锌与酸

5、作用产生新生态的氢，与药物中的微量碑盐作用生成 具挥发性的 碎化氢，遇漠化汞 或氯化汞 试纸，产生黄色至棕色的碎斑，与 定量标准碎溶液 所生成的碎斑比拟，可判定药物中含碑盐的限量。其反响如 下：As03 3- + 3Zn + 9HH AsH3 t + 3Zn2+ + 3H20AsH3 + 2HgBr2 -2HBr + AsH HgBr 2 黄色AsH3 + 3 HgBr2 - 3HBr + As HgBr 3棕色五价碎在酸性溶液中也能被金属锌复原为碎化氢，但生成碎化氢的速度 较三 价碑慢,故在反响液中参加碘化钾及酸性氯化亚锡将五价碑复原为三价 碎，碘化钾 被氧化生成的碘又可被氯化亚锡复原为碘离

6、子。As043- + 2I-+ 2HHAs033- + 12 + H20As043- + Sn2+ 2H4 -AsO33- + Sn4+ H2012 + Sn24-21- + Sn4+溶液中的碘离子，与反响中产生的锌离子能形成配合物，使生成碎化氢 的反 应不断进行。41- + Zn2+ - ZnI42-氯化亚锡与碘化钾存在，可抑制锤化氢的生成，因佛化氢也能与澳化汞 试纸 作用生成铸斑，在实验条件下 100pg佛存在不会干扰测定。氯化亚锡又 可与锌作 用，在锌粒外表形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连 续地发生。枯燥失重测定法 枯燥失重是指药物在规定条件下经枯燥后所减失的 重量， 根据所

7、减失的重量和取样量计算供试品枯燥失重的百分率。枯燥失重 检査法主要 控制药物中的水分，也包括其他挥发性物质如乙醇等。炽灼残渣检査法炽灼残渣系指有机药物经加热炭化后再被硫酸破 坏，于高 温700-C? 8009炽灼，有机物质被破坏分解为挥发性物质逸出， 残留的非挥发性 无机杂质 多为金属的氧化物或盐类 成为硫酸盐，称为炽灼 残渣。如炽灼残渣需 留作重金属检査，那么控制炽灼温度在 5009? 600QCo三、仪器与试剂电热恒温枯燥箱，普通电炉，水浴锅， 50mL 比色管，量筒， 50mL 烧杯 ; 葡 萄糖， 硝酸银， 氯化钠，盐酸，硫酸钾，氯化顿，硫氤酸钱，硝酸，硫酸 铁钱， 硫代乙酰胺， 硝酸

8、铅， 醋酸盐缓冲液，甘油，氢氧化钠。四. 实验方法1. 酸度取本品2? 0g,加水20mL溶解后，加酚醮指示液取酚 St加乙醇lOOmL使 溶解点卩得。3滴与氢氧化钠滴定液 0.02mol/L0.20mL,应显粉红色。2. 溶液的澄清度与颜色取本品5.0g,加热水溶解后，放冷，用水稀释至 10mL,溶液应澄清无色；如显 浑浊，与 1 号浊度标准液比拟，不得更浓；如显色，与对照液取比色 用氯化钻 液3? 0mL、比色用辂酸钾液3.0mL与比色用硫酸铜液6.0mL,加水稀释成50mL l.OmL 加水稀释至 10mL 比拟，不得更深。浊度标准贮备液的制备 称取于1059枯燥至恒重的硫酸耕l.OOg

9、,置lOOmL 量瓶中，加水适量使溶解，必要时可在 409的水浴中温热溶解，并用 水稀释至刻 度，摇匀，放置4? 6h ；取此溶液与等容量的 10谄洛托品溶液混 合，摇匀，于 25C避光静置24h,即得。本液置冷处避光保存，可在两个月 内使用，用前摇匀。浊度标准原液的制备 取浊度标准贮备液15.0mL,置lOOOmL量瓶中,加水 稀释至刻度， 摇匀，取适量， 置 lcm 吸收池中， 照紫外?可见分光光度法 , 在 550nm 的波长处测定，其吸光度应在 0.12? 0? 15范围内。本液应在 48h 内 使用，用前 摇匀。浊度标准液的制备 1 号 取浊度标准原液 5.0mL 加水 95.0mL

10、 ,摇 匀， 即得。3? 乙醇溶液的澄清度取本品l.Og,加90%乙醇30mL,置水浴上加热回流约lOmin,溶液应澄/no4. 氯化物取本品0.60g,加水溶解使成25mL 如溶液呈碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试纸显中性反响 ，再加稀硝酸取 105mL 硝酸加水稀释至 lOOOmL, 即得。 10mL, 溶液如不澄淸，应滤过；置 50mL 纳氏比色管中，加水使成约 40mL, 摇匀，即得 供试液。 另取标 准氯化钠溶液 10ug/ml 6.0mL 置 50mL 纳氏比 色管中，加稀硝酸 10mL, 用水稀释使成约 40mL, 摇匀，即得对照液。向供 试液与对照液中分别 加硝酸银试液0.1mol/

11、L1.0mL,用水稀释使成50mL,摇匀，暗处放置5min,同置 黑色背景上，从比色管上方向下观察，如发生浑浊 , 样品管不得比对照管更浓 0.01%。稀硝酸： 取 105mL 硝酸加水稀释至 lOOOmL, 即得。标准氯化钠溶液的制备： 称取氯化钠0.165g,置1000mL量瓶中，加水 适量使 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量贮备液10mL,置lOOmL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每 lmL 相当于 10pg硝酸银试液 . 硝酸银试液 可取用硝酸银滴定液 0.5. 硫酸盐取本品2? 0g ,加水溶解使成约40ml 溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中 性； 溶液如不澄清，

12、滤过，置 50ml 纳氏比色管中，加 稀盐酸取 234mL 盐 酸加水 稀释至1 OOOmL,即得。2ml,摇匀，即得供试品溶液。另取标准硫酸 钾溶液每 lml相当于100埋的SO?- 2.0ml,置50ml纳氏比色管中，加水 使成约40ml,加稀 盐酸 2ml, 摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液 中，分别参加 25%氯化锲 溶液5ml,用稀释使成50ml,充分摇匀。放置IOmin,同置黑色背景上，从比色管上 方向下观察，比拟，供试液如发生浑浊，与对 照液比拟不得更浓。0.010%o标准硫酸钾 溶液的制备：称取硫酸钾0.181g,置1000mL量瓶中，加水 适量使 溶解并稀释至刻度，摇

13、匀，即得每 lmL 相当于 100呕的 SO425% 氯化锁溶液6? 亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品l.Og,加水IOmL溶解后，加碘试液 0.05mol/Ll滴，应即显黄色。7.枯燥失重取本品约l.Og,然后在105C枯燥至恒重，减失重量不得过 9.5%。&炽灼残渣取本品 1.0? 2.0g 置已炽灼至恒重的瓷划竭中，精密称定，缓缓炽灼至完 全 炭化，放冷，加硫酸 0.5? ImL 润湿，低温加热至硫酸蒸气除尽， 在 700-C? 80 TC 炽灼使完全灰化，移置枯燥器内，放冷，精密称定后，再在700°C? 8009 炽灼至恒重，所得炽灼残渣不得超过 0.1%。9? 蛋白质取本

14、品l.Og,加水10mL溶解后，加磺基水杨酸溶液 1->5 3mL,不 得发生 沉淀。10. 铁盐取本品 2.0g ,于 50ml 烧杯中，加水 20ml 溶解后，加硝酸 3滴，缓缓煮 沸 5min, 放冷，移入 50ml 比色管中，用水洗涤烧杯，洗液并入比色管中， 加水稀释使成 45ml,加硫氤酸钱溶液30-1003ml,摇匀。如显色，与标 准铁溶液每lml相当 于 lOugFe, 2. 0ml 用同一方法制成的对照液比拟， 不得更深 0.010%。标准铁溶液的制备： 称取硫酸铁钱FeNH4 SO42? 12H2O 0.863g,置 lOOOmL 量瓶中，加水溶解后，加硫酸 2? 5m

15、L, 用水稀释至刻度，摇匀，作为 贮 备液。临用前，精密量取贮备液 lOmL, 置 lOOmL * 瓶中，加水稀释至刻度， 摇匀， 即得每 ImL 相当于 10皑的 Fe11. 重金属取本品4.0g置于25mL纳氏比色管中，力口 23mL水溶解后，加醋酸盐缓 冲液 pH3.5 2mL,加硫代乙酰胺试液2mL,放置2min后，与标准铅溶液 10pg/mLPb2+ 2mL 用同一方法制成的对照液同置白纸上自上向下比拟， 不得 更 深百万分之五。醋酸盐缓冲液pH=3? 5:取醋酸镀25g,加水25mL溶解后，加7mol/L盐 酸溶 液 38mL, 用 2inoVL 盐酸溶液或 5moVL 氨溶液准确

16、调节 pH 至 3.5 电位法指示 , 用水稀释至 lOOmL, 即得。硫代乙酰胺试液配制: 取硫代乙酰胺牝，加水使溶解成 lOOmL, 置于冰 箱中 保存。临用前取混合液由氢氧化钠液 lmol/L 15mL, 水 5.0mL 及甘油 20mL 组成5.0mL,加上述硫代乙酰胺溶液l.OmL,置水浴上加热20s,冷却， 立即使用。标准铅溶液的制备： 称取硝酸铅0.160g,置lOOOmL量瓶中，加硝酸5mL与 水 50mL 溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL,置100mL量瓶中，加水稀释至刻度， 摇匀， 即得每 ImL 相当于 10聘的 Pb 。配制与贮存

17、的玻璃容器均不得含铅。12. 碎盐取本品2.0g,置检碎瓶中，加水5inL溶解后，加稀硫酸5mL与漠化钾.漠试 液取漠30g,与漠化钾30g,加水使溶解成100mL 0.5mL,置水浴上 加热约20min, 使保持稍过量的漠存在，必要时，再补加漠化钾漠试液适量 , 并随时补充蒸发的水 分，放冷，加盐酸 5mL 与水适量使成 28mL, 加碘化钾 试液 5mL 及酸性氯化亚锡 试液取氯化亚锡1.5g,加水IOniL与少量的盐酸使 溶解，即得。本液应临用新配5 滴，在室温放置lOmin后，加锌粒2g,迅速将瓶塞塞紧瓶塞上己安放好装有醋 酸铅棉及漠化汞试纸的导气管，保持反响 温度在 259? 40?

18、 C 视反响快慢而 定，但不应超过 40? C ,反响 45min 后， 取出漠化汞试纸，将生成的碑斑与标准 碎溶液一定量制成的标准碎斑比拟， 颜色不得更深 0.0001 % ,标准碑溶液的制备：称取三氧化二碑 0.132g,置lOOOmL量瓶中，加20%氢 氧化钠溶液5mL溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸 10mL,用水稀释至刻 度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL,置lOOOmL量瓶中，加稀硫酸10mL,用水稀 释至刻度，摇匀，即得每 lmL 相当于 1 聘的 As。标准碎斑的制备 : 精密吸取标准碑溶液 2mL 置另一检碑瓶中 , 加盐酸 5mL 与 水21mL,自

19、“再加碘化钾试液5mL及起，依法操作即可。五、操作考前须知1. 纳氏比色管的选择与洗涤比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在选用比色管时，必须注意使样品与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻度均匀，如有差异，不得大于 2nim 。纳氏比色管用后应立即冲洗， 比色管洗涤时 防止用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁划出条痕影响比色或比 浊。2. 平行操作原那么进行比色、比浊、碑盐检查时，样品液与对照液的实验条件应尽可能一致， 严格按照操作步骤平行操作，按规定顺序参加试剂。比色、比浊前可利 用手腕转 动 360 。的旋摇使比色管内试剂充分混匀。比色方法一般是将两管同 置于白

20、色背 景上，从侧面观察； 比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上 , 自上而下地观察。3. 实验中应准确选用量具，杂质检査中允许的误差为 ±10%, 量筒的绝 对误 差为 lmL, 刻度吸管的绝对误差为 0.01? O.lmL, 在实验中，应根据样 品. 标准液的 取用量正确选用量器。 例如，取标准液 2mL 应选择刻度吸管或 移液管吸取标准液。 取样品2g,允许的误差为0.2g,可选用称量精度为 O.lg的普通天平。4. 进行铁盐检査时，采用硝酸将 FK十氧化为Fe3+,标准液应与样品液同 法 操作。样品液加硝酸煮沸时，应注意防止暴沸，必要时补充适量水。5. 碑盐检査时采用湿法破坏

21、葡萄糖，在酸性溶液中用漠进行有机破坏使碑游离。有机破坏可在检碎瓶中进行， 20min 内要保持过量的漠存在，随时补 充消 耗的漠化钾漠试液和水分，使溶液呈黄色 , 20inin 后必须将多余的漠除尽 , 使溶液 五色，否那么漠将氧化碘化钾生成 12,干扰检査。加碑粒前安装好醋酸铅棉花和漠化汞试纸， 醋酸铅棉花的填塞松紧度应 适宜， 漠化汞试纸应盖住检碎管孔，并盖紧盖子，勿漏气。加碑粒后必须立 即塞紧检碎 管，在规定温度下反响山。碎盐检査中所用锌粒应无碎，并能通过 20 目筛。如所用锌粒较大时，用 量 可酌量增加或应适当延长反响时间。6. 酸碱度检査用水必须是新煮沸放冷的水， 应用刻度吸管量取酸碱滴定 液。7. 重金属检査中， 应根据杂质限量计算公式， 计算出标准铅溶液的取用 量。六、思考题1.比色、比浊操作中应注意什么原那么？2? 是否所有药物都要对各种一般杂质进行检査?3. 为什么一般检查方法要遵循平行操作原那么 ?