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1、(1) LIFECODES Single Antigen (LSA), Class I and Class II（2）设计等位基因水平重组I类和II类特异性抗原，用于确定特异HLA抗体。7、LMX、LSA试剂组成是什么?试剂盒组成-Positive Control Serum（阳性对照血清）-Negative Control Serum（阴性对照血清）（洗液）-Wash Buffer lx-Anti-IgG PE lOx（偶联PE二抗）（包被抗原检测珠）-Anitgen Containing Bead Set8、如果要LIFECODES HLA抗体检测试剂开展实验，都需要什么设备才能开展?需要
2、辅助试剂和耗材是什么？试剂盒：微珠、WB、阴阳性对照血清、二抗9、使用LMX、LSA检测HLA抗体，需要多长时间？10、 LIFECODES SSO Typing Kit是什么试剂?做什么使用?LIFECODES Rapid SSO Typing kits （中低分辨率分型试剂有高分辨分型试剂）LIFECODES SSO产品应用1 .用于器官（肾、胰腺、心脏、肺等）移植前HLA I类和II类基因分型检测2 .疾病关联分析3 .群体遗传研究分析4 .药物过敏研究11、 LIFECODES SSO Typing Kit 试剂规格是什么？SA-PE -Phycoerythrin Conjugated
3、 Streptavidin (SA-PE), Img/ml(LIFECODES CatPCR反应0.2 ml 8 联管(LIFECODES Cat. No. 888640, Costar® Cat. No. 65 管杂交板 0.2 ml 96 孔板(LIFECODES Cat. No. 888630, Costar® Cat. No. 650912、LIFECODES SSO Typing Kit这个试剂盒检测流程是什么?检测需要多长时间?(1)扩增：只需将DNA和Taq酶加入master mix杂交：不需洗板Luminex收集数据Match IT!DNA数据分析检测报告(
4、2)13、HLA基因分型有几种方法？这几种方法有什么区别？(包括检测时间、所需要设备、 操作流程、结果分辨率等等)一、OLERUP SSP Typing kits低分辨率分型试剂有高分辨分型试剂检测时间：操作简便，扩增时间1.5小时，适用少量样本快速分型所需要设备：ABI9600/9700.朗基、伯乐等试剂盒组成：96孔扩增板（引物包被于管底）、Mas terMix,封板膜、读板纸操作流程：DNA提取一PCR扩增一扩增产物电泳一数据分析一检测报告SSP高分特点优点1 .快速，操作简便。2 .有时可以分辨其它基因分型方法甚至是SBT方法出现模棱两可结果。缺点高分辨SSP试剂因孔多出错机率更多，并
5、且同组等位基因间差异有时仅差一条带型， 在任何操作环节出问题均会导致结果不准确，因此要求扩增反应条件更严格、更精 确产品应用：1.移植诊断（HLA配型，临床多用于初筛。）2 . HLA及移植免疫相关疾病或特殊疾病研究3 .特定区域HLA多态性分布研究本产品配备功能强大SCORE软件，为实验人员提供可靠分型结果结果分辨率：低分辨率分型试剂有高分辨分型试剂二、LIFECODES Rapid SSO Typing kits样本要求：1 .血液样本：非肝素抗凝血，放化疗前后7天内不得采血，白细胞数1*109个/L。2 . DNA要求：浓度：30-100ng/ul纯度:0D260/280=l. 6-2.
6、 0?检测时间：?所需要设备：PCR仪器(非下列PCR不建议使用)SA-PE , PCR反应管杂交板操作流程：扩增：只需将DNA和Taq酶加入master mix杂交：不需洗板Luminex收集数据Match IT!DNA数据分析检测报告?结果分辨率：中低分辨率分型试剂有高分辨分型试剂产品特点：1多聚酶链反应序列特异性寡聚核甘酸探针(PCR-sequence-specific oligonucleotide probes, PCR-SSOP)2独特探针设计最大程度上减少模棱两可结果产生。3试剂盒中Master Mix包含/ Primer, dNTPs和PCR Buffer,简化了操作步骤，减
7、少了实验耗材。省略了离心和洗涤步骤，减少加样错误产生机会；分析软件可以自动 导入。4 Luminex输出原始数据。该产品系列分辨率比传统SSO有显著提高，并有中国CWD 标识功能，在CWD过滤条件下，可以达到30%以上高分辨率结果三、GENDX SBT Typing kits1. SBT Typing kits （一代测序）高分辨率分型试剂，存在等位基因模棱两可情况。样本要求1 .血液样本：非肝素抗凝血，放化疗前后7天内不得采血，白细胞数21*109个/L。2 . DNA要求：浓度：15-30ng/ul纯度:0D260/280=l. 6-2. 0SBT全称是Sequencing Based T
8、yping,通过PCR扩增目基因片段，再进行核酸序列测 定，从而判断HLA等位基因方法。检测时间：整个检测流程需要4-5个工作日所需要设备：操作流程：DNA提取一 PCR扩增一扩增产物酶切纯化一测序反应一一测序产物纯化上 机一数据分析，检测报告结果分辨率：产品特点：产品特点1 .各相关外显子均在单孔内PCR扩增。2 .组特异性引物，可解决模棱两可等位基因。3 .可确定新等位基因、罕见型等位基因等。4 .涵盖当前WHO已公布HLA I类、II类全部等位基因。5 .操作简单，通量高。6 .扩增测序引物均是干粉，方便保存及运输产品应用1.可用于中华骨髓库高分辨分型2,可用于临床移植高分辨分型3 .适
9、用于HLA科研项目及研究遗传变异4 .可用于及移植免疫相关疾病或特殊疾病研究HLA-B*27, HLA-B*57:01, HLA-B*58:012. NGS Typing kits (二代测序)高分辨率分型试剂，全基因测序，近100%高分。检测时间：实验操作时间：1-2小时所需要设备：操作流程：扩增目标基因一目标基因片断降解一末端连接Adaptor一二次单克隆扩增一 序列分析一数据分析结果分辨率：产品特点：所谓下一代测序方法，(Next-Generation Sequencing )是相对于一代 测序Sanger法而言，包括大量基于不同技术方法.尽管从模板文库制备、片段扩 增到测序，这些方法所
10、采用技术及生物化学相当多样，但是都采用了大规模矩阵 结构微阵列分析技术一一阵列上DNA样本可以被同时并行分析.此外，测序是利 用DNA聚合酶或连接酶以及引物对模板进行一系列延伸，通过显微设备观察并记录连续测序循环中光学信号实现。在一般性描述中，下一代测序技术几个关键特点是显而易见：第一，通过有序或者无 序阵列配置可以实现大规模并行化，以提供高程度信息密度.理论上，只有光衍 射极限会限制并行化提高（即用来检测独立光学事件半波长）.这极大地提高了总 测序数据产出通量；第二，不采用电泳，设备易于微型化.相对于第1代测序技 术，样本和试剂消耗量得以降低.检测通量大，384tests/次，可广泛应用于骨
11、髓库Sanger 法lOOObp低焦磷酸测序400bp较高边合成边测序2*250bp同J方法测序长度 通测序平台量一代测序 3130/3130XL、3500、 3730/3730XL二代测序 Roche 454Illumina Hiseq/Miseq14、HLA抗体检测试剂有几种？这几种试剂之间区别和联系是什么？15.为什么要进行KIR检测？ KIR检测方法？使用试剂？操作流程？检测时间？（1）移植物中造血干细胞中NK细胞表面上KIR抑制性受体及患者病理性白细胞抗 原结合，并发生错配话，造血干细胞分化出来NK细胞可以辅助杀伤患者体内白细胞。（1） KIR基因检测目主要是看供者细胞对于患者肿瘤细
12、胞杀伤作用，从而 从另一方面确定更优供者选择。所使用试剂来自于immucor公司。（2） KIR检测方法一：LIFECODES KIR SSO Typing Kit二：Olerup SSP KIR Genotyping（3）使用试剂一：LIFECODES KIR SSO Typing Kit规格：20 Test /盒（实际可以做40test）试剂盒成分:KI Master Mix（K1扩增反应体系）- K2 Master Mix（K2扩增反应体系）一 Probe Mix（杂交反应珠）- Dilution Solution (稀释液)非试剂盒提供:- SA-PE R-Phycoerythrin
13、Conjugated Streptavidin (SA-PE) Img/mL- PCR反应管0.2 mL 8联管-杂交板0. 2 mL 96孔板必须设备：LuminexPCR仪器(非下列PCR不建议使用)名称GenAmp® PCR System 9700VeritiTM 96-Well Thermal CyclerEppendorf Mastercycler® NexusBio-Red C1000 Touch"' Thermal Cycler /sec)Langen MG96+Langen1'5 A100环境要求模式(速率)9600 mode (3
14、. 5/sec)9700 MAX mode (3. 9/sec)SAFE mode, MAX ramp (3. 0/sec)双48孔快速模块MAX mode (4. 0标准模式(2. 0 3. 0/sec)标准模式(5.0/sec)1、要求必须区分前区和后区，前区用于制备扩增反应体系，后区用于扩增产物实（扩增反应体系）（每孔预装反应引物）Bio-Red C1000 Touch1'1 Thermal Cycler /sec)模式(速率)9600 mode (3. 5/sec)9700 MAX mode (3. 9/sec)SAFE mode, MAX ramp (3. 0/sec)双48
15、孔快速模块MAX mode (4. 0Langen MG96+标准模式(2.0 3.0/sec)验区。2、后区、PCR反应室以及Luminex仪器室室内温度要求恒定，2226之间，不可 过高不可过低。3、要求前区有通风橱向室外排风，或者有可保持及外界通风效果良好窗户等。4、实验室要整洁、独立，不可及其它血液以及核酸实验有明显交叉。二：Olerup SSP KIR GenotypingOlerup KIR分型试剂 规格：12 Test /盒 试剂盒成分：Master MixPCR反应板 封板膜-说明书 Worksheet 非试剂盒提供：Taq酶。 必须设备：电泳系统+凝胶成像PCR仪器(不局限于
16、以下系列) 名称GenAmp® PCR System 9700VeritiTM 96-Well Thermal Cycler Eppendorf Mastercycler® NexusLangenIM A100标准模式(5.0/sec)环境要求：要求区分前区和后区，前区用于制备扩增反应体系，后区用于扩增产 物电泳检验。(3/4)操作流程：-：LIFECODES KIR SSO Typing Kit检测步骤：步骤一：扩增 只需将DNA和Taq酶加入master mix W 2. 5h步骤二：杂交 不需洗板W 20min步骤三：Luminex收集数据忆30s /孔二： Oler
17、up SSP KIR Genotyping检测步骤：步骤一：扩增 只需将DNA和Taq酶加入master mix W 1. 5hW 20min步骤二：电泳步骤三：软件或读板纸分析结果16、STR是检测什么?微嵌合是检测什么？(1)微卫星DNA又称短串联重复序列(STR)、简单重复序列(SSR),指DNA基因组 中小于10个核甘酸简单重复序列检测移植后嵌合率，主要是看移植后供者细胞在受者体内生长情况，从而判断移 植成功及否，为一个连续不定期检测过程。STR应用：品种鉴定，系谱分析，法医罪犯身份识别及亲子鉴定，群体间遗传距离 分析进化和遗传多样性研究等。(2)嵌合体：指受体在接受异体移植物后，其体
18、内存在供体细胞，而移植物内存 在着受体细胞，这种供、受体细胞相互存在现象称为嵌合现象微嵌合状态：当供/受体细胞比例VI%时，则被称为微嵌合体。为公司H主研发项目，主要用于微移植后，移植状态检测，检测两种细胞(供者和患者细胞)比例，确定移植状态。(DNA纯度1.7-1. 9 DNA浓度50ng/ul,大于100更优)样本要求：1.第一次检测需要受者移植前、移植后以及供者样本，以后检测仅需送受 者移植后样本即可。2 .样本信息处请明确标明姓.名、年龄、受者移植前、受者移植后、供者及移植时间等 信息，切忌弄错样本。3 .本实验室来样检测样本仅限于DNA、抗凝骨髓血或外周血。17、MICA抗体检测试剂是什么？操作流程是什么？18、什么是DSA?我公司如何检测和评估DSA?结合公司检测项目解释清楚。(1) LIFECODES Donor Specific Antibody (DSA)用于筛查患者体内是否具有针对供者HLA抗原特异性抗体，是移植前、移植后一 种监测方法。19、所有检测项目，从接收样本到出具报告，所需要时间是多久？ 20、所有检测项目，要求能够独立完成结果报告解读。