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1、中华人民共和国国家标准GB 1886.2992018食品安全国家标准食品添加剂冰结构蛋白2018-06-21 发布2018-12-21 实施GB 1886.2992018食品安全国家标准食品添加剂冰结构蛋白1范围本标准主要适用丁以大豆为原料，经酵母(Sdccharomyces cerevisiae)发酵培养，再经分离、浓缩、精 制得到的食品添加剂冰结构蛋白。2技术要求2. 1感官要求感官要求应符合表I的规定。表1感官要求项U麦求检验方法色泽浅棕色将适量试样置于清洁、干燥的烧杯中，在自然光线下，观察其色泽和 状态状态液体注：测定各指标和试样应于4 °C下解冻约20 h,并搅拌均匀。2.
2、2理化指标理化指标应符合表2的规定。表2理化指标项冃指标检验方法冰结构蛋白< ISP)含ft/Cg/L)>5附录A中A. 3灰分,3/ %M2GB 5009. 4pH2. 53. 5附录A中A. 4铅(Pb)/(mg/L)<2.0GB 5009. 75 或 GB 5009. 12注：测定各指标前，试样应于4 °C下解冻约20 h,并搅拌均匀。2.3微生物指标微生物指标应符合表3的规定。表3微生物指标项目指标检验方法菌落总数/(CFU/mL)<3 000GB 4789. 2大肠菌群/(CFU/mL)<10GB 4789. 3霉菌和酵母菌/( CFU/mL)
3、<100GB 4789. 15沙门氏菌/25 mL不得检出GB 4789.4单核细胞增生李斯特氏m/25 mL不得检岀GB 4789. 30蜡样芽抱杆菌/(CFU/mL)<100GB 4789. 14注：测定各指标前试样应于4 °C下解冻约20 h并搅拌均匀。3储存条件产品应在一18 °C以下储存。6附录 A检验方法A. 1 一般规定本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规足的三级水。试验中 所川标准溶液、杂质测定川标准溶液、制剂和制品在未注明具他要求时，均按GI3/T 601.GB/T 602和 GB/T 603的规定制备。试
4、验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2鉴别试验A.2. 1液相色谱法在冰结构蛋A（ISP）含量测定试验屮，试样溶液色谱图的主峰保留时间应和标准溶液色谱图的主 峰保留吋间相一致，参见附录B中图B.EA. 2. 2质谱法分别配制10 mg/L的试样溶液和标准溶液在附录C参考质谱条件下进行测定，两者的分子量应 一致，参见附录B中图B. 2。A.3冰结构蛋白（ISP）含量的测定A.3. 1试剂和材料A. 3. 1. 1乙月青:色谱纯。A.3. 1.2三氟乙酸：纯度$98%。A.3. 1.3冰结构蛋白对照品：纯度k 10 %。A. 3. 2仪器和设备A.3.2. 1髙效液相色谱仪:带二
5、极管阵列检测益。A. 3.2.2 微量进样益：100.（）叫A. 3.2. 30.45 ym 水相滤膜。A.3.3参考色谱条件A. 3. 3. 1色谱柱：C18反相色谱柱（04.6 mmX15 cm）,填料直径3. 5卩m；或其他等效的色谱柱。A.3.3.2 检测波长：214 nm0A. 3. 3. 3 柱温：室温。A. 3. 3. 4 流速：1.0 mL/minoA. 3. 3.5 进样量：20.0 mLoA. 3. 3. 6流动相A：0.05%三氟乙酸水溶液（体积分数）；流动相B：0.05%三氟乙酸乙睛溶液（体积分 数）。A. 3. 3. 7流动相梯度洗脱参数见表A. 10表A. 1流动相
6、梯度洗脱程序表时间/ min流动相A/%流动相B/%0.00100.00.03.00100.00.05.007&022.015.0052.04& 01& 004&052.019.000.0100.022. 000.0100.023. 00100.00.026. 00100.00.0A.3.4分析步骤A.3.4. 1标准溶液系列的制备称取适量冰结构蛋白对照品溶解于水，分别配制实际浓度为50 mg/L.100 mg/L.150 mg/L. 200 mg/L和250 mg/L的标准溶液系列，用0.45 水相滤膜过滤。A.3.4.2试样溶液的制备移取搅拌均匀试样0.5
7、mLJIJ水定容至25 nl,用0.45卩m水相滤膜过滤。A. 3.4.3 测定在A. 3. 3参考色谱条件下分别对标准溶液系列和试样溶液进行测足，得到冰结构蛋白标准溶液 浓度和响应值（峰高或峰而积）的曲线，在曲线上对应试样溶液色谱图的响应值（峰高或峰而积），得到试 样溶液屮冰结构蛋口的浓度。同吋做空口试验。A.3.5结果计算冰结构蛋白（ISP）含量s，单位为克每升（g/L）,按式（A. 1）计算:Vi X (c c0)1 00() XV2式中：V1 试样溶液的体积，单位为毫升（mL）；c由标准曲线获得的试样溶液中冰结构蛋白的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；5由标准曲线获得的空白溶液中冰结构
8、蛋白的浓度，单位为毫克每TH mg/L）；1 （）00体积换算系数；V2 原始试样的体积，单位为毫升（mL）0试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差 值不大于算术平均值的10%。A. 4 pH取适量搅拌均匀试样，用校正好的pH计在室温下直接测定。附录B冰结构蛋白对照品参考谱图B. 1冰结构蛋白对照品参考液相色谱图冰结构蛋门对照品参考液相色谱图见图B. lo图B. 1冰结构蛋白对照品参考液相色谱图B.2冰结构蛋白对照品参考质谱图冰结构蛋白对照品参考质谱图见图B. 20L 4C*. 02DO40(1 4WIT2 $I igg图B.2冰结构蛋白对照品参考质谱图附录c参考质谱条件C. 1参考质谱条件参考质谱条件如下：a)毛细管电压：3 000 V；b)锥孔电压：30 V；c)提取电压V；d)透镜电压：01 V；c)源温：100 °C；f)脱溶剂温度：300 °C；g)脱溶剂气流速度：350 L/h；h)锥孔气流速度：20 L/h；i)低频分辨率：14.0；j)高频分辨率：14.0；k)电离方式：电喷雾（ESI）；1)离子能量：1.0 eV；m)检测器倍数：650；n)低质量区：加/n为500；o)高质量区:mg为2 000。