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1、医学细胞生物学设计型实验设计报告班级10级k-7班 评分 实验项目: 细胞核的分离与鉴定 实验原理:1、细胞内各种结构的比重和大小不同,在同一离心场内其沉降速度也不同。所以,用差速离心法可将细胞内各种细胞器及组分分级分离出来。差速离心法也是用来研究亚细胞成分的化学组成,理化特性及其功能的主要手段。2、分离细胞核最常用的方法是将组织制成匀浆,在特定的条件下进行离心分离,然后分析鉴定。3、匀浆是指在低温条件下,将组织放入匀浆器,加入等渗匀浆介质进行研磨,破碎细胞,使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。 实验步骤:1、处死:断头处死小白鼠,手提尾部使其学业尽量流出。2、取材:迅速开腹取肝,在盛有生理
2、盐水的小烧杯中反复洗涤,称取湿重约为1g的肝组织放在烧杯中。3、匀浆:加油8ml预冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L绿化高永夜于烧杯中,尽量剪碎肝组织,将剪碎的刚组织倒入玻璃匀浆器,是匀浆器下端侵入盛有冰块的器皿(如冰盘)。左手握持匀浆器,右手将匀浆捣杆垂直插入管中匀浆,直至看不到明显的组织块。4、过滤: 用8层纱布(先用少量生理盐水或蔗糖液润湿纱布)过滤匀浆液于离心管中。5、离心:在天平上平衡每对离心管,2500r/min离心15min,取上清液于另一离心管中。 6、涂片:取上清液制一张涂片(涂片1)。将原离心管中剩余上清液吹打成沉淀成悬液,另制一张涂片(涂片2),自然干燥 。7
3、 、染色:分别在涂片1和2上低价甲苯胺蓝染液 ,染色5到7分钟(即滴染)。8、洗涤:冲去染液,晾干。9、镜检:结合实验结果的描述,镜下观察分析。注意事项:1.操作规范,防止试剂污染。2.细胞悬液的涂片制作要轻柔。3.使用离心机要注意平衡,转速从低到高。预期结果:低倍镜下找到标本,再换高倍镜,可见肝细胞核已游离出来,被染成蓝紫色,圆形,中央有2到4个甚至更多个深蓝色的核仁。实验用品:材料:小白鼠肝脏。试剂:生理盐水、0.25mol/L蔗糖0.003mol/L氯化钙溶液、1%甲苯胺兰染液。仪器设备:显微镜、普通离心机、天平、离心管、滴管、玻璃漏斗、量筒、25ml烧杯、解剖剪、镊子、冲洗瓶、纱布、伯乐匀浆器、载玻片、盖玻片、染色盘架。设计组名单: 姓 名 学 号姜 俊1020150738 曾 祥 兵1020150739冯 国 周1020150744黄 丹 阳1020150750杜 徉 睿1020150751 教师: 日期: