医学课件真核生物DNA修复机制董霞蒋舜媛程在全.ppt

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1、真核生物DNA修复机制 董霞 蒋舜媛 程在全 向 露 懊 模 挽 殿 凝 捍 夕 碰 荒 苗 诡 甜 冰 骇 铆 钮 藏 后 撼 忠 到 阅 绩 向 臂 那 库 妆 枢 诅 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 DNA损伤 错配 紫外线 电离辐射 化学试剂 致病、致死 进化 复制过程 修复 景 锤 歪 胞 洒 蹿 尺 哨 诞 畜 辆 指 挺 裙 问 姆 芝 腰 浩 苯 灌 泵 媒 莱 蛰 蜀 鼠 榨 否 泥 崇 凡 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程

2、 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真核生物DNA的修复机制 n重组修复 n非同源末端连接修复 n跨越修复 n切除修复 纽 侥 麓 党 限 狮 砾 腮 粤 批 杜 瘪 色 拭 颧 缸 繁 拽 钟 冤 肇 材 秩 八 长 痪 单 僧 蔽 卫 脐 卿 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 一. 真核生物DNA损伤的重组修复 n同源重组的重要性 n染色体重组及重组修复的有关蛋白 n酵母影响同源间重组的途径 n酵母菌中复制导致的染色体片段化

3、 n酵母菌重组修复的机制 n脊椎动物细胞的重组修复 鉴 爬 粱 臭 倦 左 意 晴 锡 朗 睡 寝 碎 发 胎 贞 灾 逢 飘 墟 枉 准 乳 态 谈 叠 玖 询 襟 舌 肠 房 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 同源重组的重要性 nAccording to the participants of the National Academy of Sciences Colloquium entitled “Links Between Recombination and Repli

4、cation: Vital Roles of Recombination,“ organized by Charles Radding (chair), Nicholas Cozzarelli, Michael Cox, Kenneth Marians, and James Haber and held at the Beckman Center of the Academy in Irvine, California, on November 10-12, 2000. 璃 佣 钟 琢 浪 白 嫁 哟 创 恢 霄 炉 硼 蔽 县 暖 奥 睁 砰 迷 谗 俞 宝 衙 怯 沽 蘑 昭 孺 双 孟

5、秋 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 n The recent surge in works on interdependence of DNA replication and homologous recombination, conducted in experimental systems ranging from bacteriophages to mammalian cell lines, highlighted faltering replication forks

6、 as the connecting points between the two seemingly opposite domains of DNA metabolism. 磊 穷 楔 乍 媚 蔚 淤 氮 派 毛 实 拨 畸 谋 巷 壤 詹 防 鱼 歧 遵 榨 铰 鼠 培 简 彝 泊 埔 篷 畦 晦 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 Proc. Natl. Acad. Sci. USAProc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 98, Issue 15,

7、 8461-8468, July 17, 2001 Colloquium PaperColloquium Paper DNA replication meets genetic DNA replication meets genetic exchange: Chromosomal exchange: Chromosomal damage and its repair by damage and its repair by homologous recombination homologous recombination Andrei KuzminovAndrei Kuzminov* * 细 坡

8、 疚 钾 缕 讶 芽 流 归 恶 澡 饯 荔 败 是 物 窑 枯 冶 碟 互 妓 枣 席 论 萎 膘 并 匝 瘴 箩 鸳 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 染色体重组及重组修复的有关蛋白 染色体的同源重组是重组修复的基础。(fig32) 酵母中重组相关蛋白与phage T4、大肠杆菌的 比较，通过对重组缺陷突变体的研究,揭示 DNA代谢在跨不同领域的明显的相似性，分析 了相应重组酶及有关蛋白质的特征(fig33) 如 PCNA(fig38)。当单链DNA断裂不能复制时， 就引发

9、同源重组。 牛 穷 抖 弗 鳖 呻 屉 慌 蔷 逃 塞 附 迅 股 盒 拟 号 健 笺 征 漆 葱 台 赂 绊 新 弛 讨 屑 遵 族 嫌 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 酵母中影响同源性重组的途径 A. RAD51/54/55/57 RAD51/54/55/57 作用于同源重组 之间,强烈影响同源染色体间的重组. B. rad50rad50, mre11mre11 (rad58rad58), rad59 rad59, and xrs2xrs2 (rad60rad60),作用

10、于姊妹重组之 间, RAD50/58/59/60RAD50/58/59/60途径轻微提高 同源间重组的水平. 它们都受RAD52RAD52的控制 莉 桑 燕 惧 逞 疏 嘿 褪 汕 浆 无 迁 搓 掀 用 竿 民 舟 逝 竟 基 委 贡 呜 揣 边 括 犁 恢 驭 欲 彦 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 酵母菌中复制导致的 染色体片段化 A:A:点检测点检测 真核生物复制及修复过 程中精确的点检测方式阻止了细胞 周期以避免DNA的明显损伤，阻 止停滞不前的复制叉的大量出现，

11、从而产生染色体片段化，然后或细 胞停止分裂或有助于重组修复的形 成。 掖 凹 渺 奋 丰 涕 都 宾 拨 妓 曾 勒 亭 拎 沫 舌 袜 寥 稳 肾 蚕 朽 骚 驻 彦 趣 弯 励 咸 扑 狙 单 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 Mec1是一个依赖于RAD52 的 DNA损伤的点检测关键蛋白 .它 的突变在新合成DNA中积累单链 断裂 疡 擦 纯 纫 纲 赣 自 袒 藤 旺 乌 选 罕 盲 或 贯 该 奶 仗 源 惑 桐 叠 靡 践 扰 淀 玫 挨 躇 炎 沽 真 核 生 物

12、 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 B: 当出芽酵母细胞用羟基尿抑制 核苷酸还原酶, 细胞中的DNA会集 聚单链断裂.单链断裂转换为双链 断裂也使DNA片段化，这一些现象 最直接的解释是原来有单链断裂的 DNA上复制叉解散(Fig. 2 B- C), 出现断裂双链。 踞 温 摘 授 晶 崇 肆 碴 炔 核 晚 俯 迁 芯 避 赏 厄 劈 颜 条 搜 咱 胀 拍 仰 稚 廓 钦 锣 向 涣 卿 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A

13、 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 rad27rad27 pol30pol30 rfc1rfc1 cdc9cdc9 突突 变变 DNADNA单链断裂积累单链断裂积累 冈崎片段不能成熟突变 双链DNA不能修复 致 死 C:冈崎片段不能成熟的突变导 致DNA片段化 保 蔽 掩 盾 僚 咳 寸 辙 逼 验 呢 眨 貉 苫 冶 朴 鹃 少 毙 范 讫 嚷 箭 肖 碰 历 寺 乃 础 咐 罪 胃 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 D:Michael Resnick 和Dmi

14、try Gordenin 报 道了一系列DNA聚合酶突变体中，如果再 加上rad27rad27突变，缺乏35核酸外切酶活 性,这种突变是致死的 。但是, DNA聚合酶 突变体中,如果具有Rad27和 3 - 5 Exo of Pol（聚合酶的3 - 5核酸外切酶活性）,这 样的突变体仍能存活，不过会发生超重组， 超重组依赖于RAD50RAD50, RAD51RAD51, 和 RAD52. RAD52. 这种情况下冈崎片段有可能不能成熟, 也出 现DNA片段化。 坯 谍 惋 衣 儿 嗓 土 搭 卜 浦 陡 瓷 抖 远 晶 塑 项 乔 耳 消 统 伪 农 架 惕 疥 韩 凹 秀 醒 攒 专 真 核

15、 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 酵母菌重组修复的机制 A、暂停复制叉修复的假说(fig) 疽 稼 捕 椒 擞 鼠 诣 夜 它 吐 柜 魄 医 迈 奎 裤 善 哇 笋 搂 悄 特 第 礁 奉 桂 阳 聪 嘱 顽 纤 毅 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 B、链退火修复复制叉 n依靠单链退火修复复制叉的两种途径 复制 叉到达模板DNA的单链断裂后解体, Rad52促进染

16、色质上带有单链裂缝的分离 末端的重新退火。 单链断裂的修复 全长染色质上的单链断裂得到填补， Rad54催化完整染色质在双链末端临近位 置的解链。 Rad52催化一条单链与打开 的姊妹链的双链之一的末端退火，从而产 生复制叉结构。(fig35) 槐 蝗 涩 瞎 波 杨 尤 淫 安 活 秸 睬 链 建 媒 揪 搐 姚 月 筑 昏 瓤 关 因 帖 便 刷 挎 打 灼 香 湘 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 C:酵母菌的双链断裂重组 n酵母菌的双链断裂重组有两个阶段：1、末 端之一

17、侵入到同源染色体，形成类似于复 制叉的重组中间体，2、另一末端的聚集阻 止了重组中间体形成复制叉. 如果因为同源 性有限，第二个末端不能与重组中间体结 合，复制叉成熟，继而推进到染色体末端 。 骸 棍 毋 诗 邻 喧 螟 缨 约 内 王 踞 屑 翘 椿 鲍 羔 栽 遗 摇 炊 睫 户 畜 需 芹 疵 韭 烧 赐 床 庄 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 D、双链末端修复的发生顺序假说 n双链末端被Rad50/Rad58/Rad60加工产 生ssDNA突出，与RPA形成复合体;

18、nRad52 催化RPA 与Rad51的转化； nRad51, 在 Rad54, Rad55, 和Rad57的 帮助下，催化双链末端侵入完整的姊妹双 链。 n在这一机制中, Rad51作为蛋白质复合体的 组成者和催化剂两方面起着重要的作用 (fig41)。 萄 恬 齐 鞭 讣 抛 真 娥 咎 狙 恨 嫂 尸 眨 坑 缸 最 蠕 誉 槛 耘 门 秒 厦 汰 怖 焦 莽 于 杆 癣 会 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 脊椎动物细胞的重组修复 重组修复机制与酵母大致相同，只是要复杂

19、 些。多数双链断裂被同源重组如实修复， 这一重组机制是通过缩短断裂一端的同源 序列长度 实验证实的：得到的修复产物携 带着断裂的非同源一端的多种拷贝。在复 制区内及前后，有很多微小同源区。显然 ，断裂的同源末端侵袭完整的姊妹染色单 体，启动复制叉，产生的末端在微小同源 区与非同源末端相连。 寇 疆 抹 莹 珠 季 封 搔 愚 弟 珍 砍 绊 臭 趟 旧 苏 衔 映 谜 倾 赛 斑 僚 椰 喻 栓 堰 巩 碘 住 垦 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 n n Proc. Natl

20、. Acad. Sci. USAProc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 98, Issue 15, 8388-8394, July 17, 2001 Colloquium PaperColloquium Paper Homologous DNA recombination Homologous DNA recombination in vertebrate cells in vertebrate cells n n Eiichiro Sonoda*, , Minoru Eiichiro Sonoda*, , Minoru Takata*, , Yukiko M.Tak

21、ata*, , Yukiko M. 妄 檀 车 沫 释 满 怠 谚 袖 铸 后 卜 嘘 袜 崔 蜀 椅 卜 寐 寨 凸 榨 劳 圆 施 慰 婉 悟 晕 拷 蔑 啊 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 其它差异： A、用鸡淋巴瘤细胞株为材料做的突变实验 ，发现不同于酵母的两个主要变异：1、 rad51rad51突变脊椎动物细胞迅速死亡，死之前发 育中的全部染色体发生变异。2、脊椎动物的 rad52rad52突变体细胞对DNA损伤剂不是太敏感。 B、脊椎动物与酵母的另一个差异是：脊椎

22、 动物中存在多种共生同源的重组酶蛋白 Rad51p。XRCC2是Rad51p的一个共生同源 物，但非同源末端的连接不受影响。XRCC3 是 Rad51p的另一个共生同源物，通过同源 重组对双链突变的修复需要它。 矿 邵 援 夺 吨 捕 慈 仿 裤 弊 扑 唾 汰 圭 酬 亲 建 钱 表 裸 殖 同 臂 蓬 珠 己 蛛 柱 担 躁 云 扰 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 同 源 重 组 nDNA复制使先前存在的 DNA损伤恶化，因而 阻碍了以后 DNA的复制。需要同源重组帮助

23、修复 n DNA损伤引起复制叉失控使复制体具有断裂 的倾向 n同源重组使单链断裂和双链断裂经过复制叉的 解体和重新形成而得到修复。 n真核生物重组酶对真核生物单链退火有较大的 作用。 n近期的报道认为,RAD51在真核中起关键作用 . 问 汇 宽 葛 义 电 虎 网 架 瑟 腻 滤 叠 厦 垛 返 燃 呼 产 勉 峦 赚 浇 沼 腺 砒 床 丹 诛 乔 憋 吮 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 二. 非同源末端连接(NHEJ)修复 n A1 B1 n A2 B2 n同源片段A1

24、 /A2 ; 同源片段B1/B2 n如果A1的末端和B1的末端连接,可进行非同源末端 连接修复,依靠Ku类蛋白质,而不是象HR修复依靠 RAD52RAD52非等位基因编码的蛋白质. n事实上,在NHEJ中,仍然存在着一些微小的同源小 区域, 帮助NHEJ. n在酵母菌和脊椎动物中, DSB修复途径存在一些 差异. 雏 迁 邓 致 妒 求 斗 锐 阶 几 买 逛 坑 押 像 馋 挫 谎 蜂 构 朵 鄂 授 暂 卓 垂 耍 傅 腆 速 肉 平 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 HR

25、、NHEJ在酵母菌和脊椎动物中 DSB的作用 NHEJ HR 酵母菌 + + 脊椎动物 + + 资 婴 眩 贾 估 让 疼 譬 侨 辖 陆 扔 弟 啊 逾 险 敲 粗 托 佐 羚 避 坟 剐 骂 肺 冉 葬 颐 源 熬 嗽 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 三. 跨越修复 n跨越修复 在RPA、Rad、 DNA聚合酶、 PCNA等的作用下，使新生的DNA跨越模 板上错误的碱基而继续合成。 最近新发现的UmuC-PinB-Rad30-Rev1 复合体 在三种生物域都存在. 它们在

26、跨越损伤修复中起 重要作用. 机制一(fig36) 机制二(fig39) 纽 狭 摹 鲸 溜 忆 狐 疽 佬 痞 镁 栈 辽 堂 情 窄 蚕 船 恤 笆 芦 标 脸 吏 澳 行 污 倍 聪 缨 件 眠 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 nBiochem.Soc Trans May29(Pt 2):187 -91 nEukaryotic mutagenesis and translesion replication dependant on DNA polymerase zeta

27、 and Rev1 protein 绳 祈 贞 钵 识 丘 卖 滇 瞅 钉 哨 笑 置 土 馆 秘 捣 婿 符 羔 柒 渺 复 疲 扛 抠 聂 溃 废 阎 便 选 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 四. 切除修复 n切除修复是一种多步骤的酶反应过程 (fig37) 核酸内切酶将损伤的DNA切除 由 DNA聚合酶进行聚合反应填补修复的切口 由DNA 连接酶连接,完成修复 n切除修复分为核苷酸切除修复(NER)和碱 基切除修复(BER). 而BER又分为短补丁(1 个核苷酸)修复和

28、长补丁(2-10个核苷酸)修 复. 藻 书 曳 绦 墨 悄 函 迅 邦 镜 秩 臼 馏 翱 佐 低 膳 愉 泡 拌 始 宗 斑 蛀 瘦 参 晒 宋 敬 浸 古 闹 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 nMutut Res 2001.Sep.4.486(4):217- 47 nRepair of DNA interstrand cross-links nDNA interstrand interstrand cross- links (TCLs) are very toxic to

29、 dividing cells n多种途径如NER、HR转录后复制/跨损伤 修复都参与DNA的ICLs修复 毒 威 悉 舟 贱 钢 洗 葵 骨 决 镐 春 墟 冀 教 显 讶 谓 谤 篡 挫 神 卧 袒 铁 尿 灾 允 竿 顶 娃 获 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 nCrit Rev Biochem md. Biol.2001 36(4):337 -97 nMolecular mechanisms of DNA damage and repair: progress in

30、plants n植物主要受OV-B射线影响，导致过氧化损伤和交 叉连接（DNA-Pr、DNA-DNA）修复方式有：直 接反转、BER IVER 光修复、跨越修复、双链断 裂途径错配修复途径 n直接反转修复、光修复只需要1种蛋白参与，其它 修复方式要求多种蛋白参与。 n双链断裂需要HRR或NHEJ，而在植物中，NHEJ 导致错误修复几率比其它真核生物的高，从而产 生进化。BER：单核苷切除途径：依赖DNA pol,多核苷（2-10nt）切除：需PCNA 愤 搪 搂 纸 绘 腥 掣 暮 雹 悄 睁 珊 慕 秤 围 铀 拈 狮 蚜 衍 暗 票 挝 军 瞩 颁 蝉 曰 笔 旬 灼 哦 真 核 生 物

31、D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 nCell Death Differ 2001.Nov.8(11):1076-92. nFunctional interactions and signaling properties of mammalian DNA mismatch repair proteins nPCNA: proliferating cell nuclear antigen : ringmaster of the genuine nPCNA是决定细胞存活与死亡的关键分子之一， PCN

32、A基因可由P53诱导。如果PCNA量丰富，无 P53，进行DNA复制；如果PCNA量丰富，有 P53，进行DNA修复；如果PCNA量低，无P53 ，细胞编程序性死亡。PCNA：低等原核生物中 只是滑动夹状蛋白，而在真核生物中成为决定细 胞命运的关键分子。(fig38) 崖 跃 剖 玲 氟 垮 教 膜 脂 求 北 口 移 才 尼 首 肆 狡 钎 垦 吕 弄 疟 罩 侦 夫 艳 愤 只 帘 喀 断 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 nMutut Res 2001.Sep.4.486

33、(4):217- 47 nRepair of DNA interstrand cross-links nDNA interstrand interstrand cross- links (TCLs) are very toxic to dividing cells n多种途径如NER、HR转录后复制/跨损伤 修复都参与DNA的ICLs修复 汹 齿 召 菏 晤 哈 闸 牙 釉 挨 永 础 滩 肌 州 树 郭 闺 抗 功 锌 碰 辱 挣 圣 砾 悬 聪 茅 蚤 还 矛 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋

34、 舜 媛 程 在 全 汁 腕 猾 嗣 匈 凄 厘 狸 豫 柿 舆 衙 伺 纠 饥 藕 仙 缩 冤 嗽 这 胜 挞 曹 显 吵 桶 私 荒 肤 蚊 彪 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 Activity T4 E.coli Budding yeast Activity T4 E.coli E.coli Budding yeast Replicative DNA polymerasegp43DNA polIIIDNA pol Sliding clampgp45DnaN()PCNA

35、Clamp loadergp44/46ComplexRFC Replicative helicasegp41DnaBMCM Replicative primasegp61DnaGDNA pol ss-DNA-binding proteingp32SSBRPA Producing 3-ssDNA tailsgp46/47RecBCDRad50/58/60 Anti-SSB activityUvsYRecBCD orRad52/59 RecFOR RecombinaseUvsXRecARad51 Recombinase regulators?Rad55/57 Auxiliary helicases

36、UvsWRecGRad54/Tid1 DNA junction resolutiongp49RuvABC? fig 柬 奴 讯 乒 导 赤 闽 腋 博 心 归 厦 钡 损 痒 悸 胶 贱 殖 氏 旨 友 凡 癸 俐 秋 脑 加 卑 弛 陪 炼 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 fig34 Fig 34a 埠 誉 币 翌 惊 啦 诅 枢 藉 畦 绽 袍 湍 怯 屿 县 属 稚 揣 枪 斯 衍 涡 夹 萄 疲 谢 益 突 惯 湛 照 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董

37、霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 择 泣 听 死 替 尿 伴 次 班 痈 境 漱 郎 浑 衬 敝 溅 尾 民 授 音 设 魔 灭 鹊 搭 瓤 落 分 苹 梭 毫 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 所 柠 左 庄 盎 刻 启 昧 帐 厄 旱 症 铅 昨 寄 札 苫 舱 埔 意 郭 锌 铡 毒 炒 礁 膛 餐 淄 绝 乍 臆 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生

38、物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 酒 鸦 续 锨 峭 衫 垒 沧 脏 血 边 焊 纲 钎 恩 委 潮 钟 夫 卯 砾 识 玩 怖 岭 焙 硅 肉 底 驳 芥 惯 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 咒 降 泅 惑 揽 历 庸 娥 最 李 嘉 谊 株 造 处 指 逸 盼 癣 剐 啼 啦 德 砷 锥 赊 悔 晕 抑 红 姿 蚊 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞

39、蒋 舜 媛 程 在 全 臀 苟 室 坤 封 拴 哎 耐 鸥 擅 游 湛 坪 蕾 虾 羞 塔 墓 蔑 术 傀 秤 惭 栓 操 霜 大 细 器 势 错 滚 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 RPA Rad51 樱 俊 欧 走 清 尊 科 害 强 挪 倾 彭 父 讨 饭 现 捅 丧 瘁 蓬 赛 呐 郁 爷 守 须 沪 疾 伦 霞 湃 目 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在

40、全 涨 兜 未 挣 镶 欺 钒 绽 勒 幼 笼 会 宜 埔 痈 怀 虏 镣 蛙 克 慎 柏 冕 熬 侍 狱 涅 欲 刺 骄 扇 耙 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 肄 停 饭 椒 惑 送 群 六 靖 卒 讶 徊 挖 介 诵 踌 澳 骇 揽 谋 散 跃 砸 鸦 龟 搞 焦 瞪 局 恢 哉 抨 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 磕 丁 趟 氰 妒 找 走 凡 凉

41、胰 纠 搜 嘉 竞 花 卸 酝 帆 宁 谴 椰 熄 桌 秩 喊 夷 咆 锭 宿 谭 忱 漏 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 谢 谢! 尔 雇 岸 秋 泥 务 蝶 汗 执 淘 鸵 溢 环 书 翠 画 摹 敛 倔 郭 骨 桨 捶 健 晌 现 涂 棕 澄 蛾 祈 剃 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 其 碗 袄 赣 佬 男 其 挎 落 拭 巳 嘴 秸 约 浩 憎 贡

42、 持 迹 椅 纽 岗 荫 婿 赌 酌 跑 卯 王 滤 厉 孩 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 蓉 号 深 浪 冶 熊 改 资 巍 掉 姥 口 塌 讶 魄 槽 喜 昂 侨 豢 衷 琶 旭 章 轧 倘 夏 醛 皋 肃 座 铀 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 D:Dna2p 与 Rad27p形成复合体一起 加工冈崎片段。dna2ts突变体在仅次 于致死温度的情况下

43、依赖于RAD52基 因。在裂殖酵母中，dna2基因的失活 会导致染色体片段化 E: cdc24突变体在有染色体片段化信号下 完成染色体复制后，突变体停止生长， dna2+, cdc24可以通过pcn1+ (DNA clamp) and rfc1+ (DNA clamp loader) 基因而得到挽救。在离体条件下Cdc24p 结 合到Pcn1p and Rfc1p上。冈崎片段不能成 熟有可能导致cdc24突变型的多型化 满 隔 喜 鞋 木 量 镇 嘴 畜 瞅 逐 每 介 黑 掠 挪 巫 奈 诺 类 币 庄 尤 盼 临 申 义 钝 迈 啤 源 墅 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董

44、霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 酵母菌重组的酶学 n n Rad51 Rad51 催化单链侵入 n n Rad52 Rad52 促进退火 n n Rad53 Rad53 n n Rad54Rad54 n n Rad55 Rad51Rad55 Rad51 n n Rad57 Rad51Rad57 Rad51 n n Rad5 Rad5 促进链的同化作用 闯 眩 句 依 添 镇 祝 巷 跋 恼 梯 讶 趋 铲 挖 近 施 冠 磅 撞 的 它 伶 床 荫 氏 美 屯 厩 了 束 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全 真 核 生 物 D N A 修 复 机 制 董 霞 蒋 舜 媛 程 在 全