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1、实验四 果蔬菜中农药残留测定环境工程 李婷婷 2110921109实验目的1、练习使用农药残留快速检测仪，掌握其操作过程；2、掌握酶抑制法的实验原理。二、实验原理 本实验采用酶抑制法，有机磷或氨基甲酸酯类农药能抑酶活性， 使本可以由酶参与的显色反应而失去颜色， 呈白色。可用比色法定量 抑制程度。抑制率是有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制酶能力的强弱。在一定条件下 ,有机磷和氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶正常功能 有抑制作用 ,其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下 ,酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱 ）水解 ,其水解产 物与显色剂反应。产生黄色物质，用分光光度计在 412nm 处测定吸 光度随时间的
2、变化值， 计算出抑制率。 通过抑制率可以判断出样品中 是否含有高剂量有机磷和氨基甲酸酯类农药的存在。三、实验步骤1 参数设置2 校准测量：选择校准菜单后，取 2.5ml 试剂一移入比色瓶后， 各取 100ul 试剂二和试剂三倒入比色瓶中，盖紧摇匀 , 放入比色槽中 放置10min,按校准键，仪器显示正在预热，仪器发出嘀嘀嘀三声后， 表示校准完毕。3 空白测量：接上步，按空白测量键，仪器显示正在预热，发出 嘀嘀嘀三声后，提示加入试剂四，取出比色瓶加入 100ul 试剂四，盖 好摇匀，放入比色瓶中，按回车继续，仪器显示正在测量，倒计时三 分钟，结束后同样发出嘀嘀嘀三声。并显示吸光度值 A1， A2
3、。4 样品测量4.1 样品制备：选取有代表性的果蔬样品，擦去表面泥土，叶 菜用叶菜取样器取叶片部分，果实蔬菜可切割。然后切成 1cm 左 右的见方碎片，称取 2.0g 样品。4.2 样品中农药的提取：将 6 个样品提取瓶放在支架上，各放 入 2.0g 样品，各加 10.ml 试剂一，用搅拌针使样品全部浸入液 体中，放入提取仪中萃取 6分钟。之后放回支架，取 2.5ml 注入比 色瓶中。4.3 样品测量：选择测量键， 各加 100ul 试剂二和试剂三混合 摇匀。按确认键进行测量，预热结束后。仪器显示正在培养。 10 分钟后结束，发出嘀嘀嘀三声。提示加入试剂四。加入后，按确认 键三分钟后，屏幕显示
4、结果。四、实验结果与分析1 抑制率公式：E (%)二(A2-A1)-(A4-A3) /(A2-A1) X 100%E ：抑制率A1:空白测量3分钟前的吸光度值A2 :空白测量3分钟后的吸光度值A3 :样品测量3分钟前的吸光度值A4:样品测量3分钟后的吸光度值2 结果判定: 当被测样品的抑制率在 50%以上时，表示被测样品 中有高剂量有机磷和氨基甲酸酯类农药存在， 样品为阳性结果， 阳性 结果的样品需要检测两次以上。 对阳性结果的样品， 可用其他方法进 一步确定农药品种的含量，并报有关部门处理。实验所测样品为豆角， 经实验测得: A 1 =-0.029，A2=0.6 1 7，A2-A仁0.646
5、>0.300，所以空白有效。 A3=0.329, A4=1.117<1.8，所 以此样品检测有效。抑制率为 4.1%，小于 50%，所以样品检测一次 即可。五、问题与讨论本次实验中应注意的问题有以下几点:1、试剂二用量:若 A2-A1 小于 0.300，此空白无效，需要重新 检测，若多次测定后，仍小于 0.300，则需要增加试剂二的用量，直 到大于为止。2、吸光度确认:在样品测量结束后。若 A4 大于 1.80，则此样 品检测无效， 需重新检测， 多次测量后仍大于 1.80，为果蔬色素干扰， 需要对被测样品进行整株提取，不要剪碎样品。3、注意时间间隔：提示加入试剂四时应该在嘀嘀嘀三声后加入（空白和样品 ）。且做空白和样品时加入试剂四的时间间隔应一致。加 入试剂四后 ,轻轻摇匀后 ,放入比色槽后 ,应立即测量。4 、注意移液器的操作：移液器有两个档 ,吸取时应用第一个档 排除液体时下推至第二个档。