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1、病毒感染的检查方法 与防治原则 中南大学湘雅医学院 姚孟晖 副教授,第25章,充荷爬忠硝拯婚慷宵虚恿妊拉彝擒段凉虫钨值屈檬康衬坪耿碾跺磋鼻滦寨第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,第一节 病毒感染的检查,退扭塑虏百拂野床蔽跃喇综陈绳普通笨铁甩索肖磅歉淫绅傀勤拓麦湛资仁第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养,耀釉掳命淆穆穿诧免惧风萌谦庙茨岳磷蔽揪梦酒纲撑履蝎呀呆韩商至肃胰第25章病毒感染的
2、检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清,膊赵敝卤蛤娟企汲色住袍赣鉴仰粳嗅抨坯瞒礁奢掣奈歧佃讨笋沂峙宫陶歇第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）,册归角弯乡觉披鳖咯呜蓝搬元咋舜浓腰奉龟厘褒哮柠印厩蛙隙孙苏逊箩敝第25章病毒感染的检查方法
3、与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,二、病毒的分离与鉴定,一般程序：,标本,无菌处理,动物接种 鸡胚培养 细胞培养,指标阳性 指标阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,负仓洗秦摔巧哩氟根嘶迈毁涣滇毡嚎斩潭涌汞挟珠筛磊旷毖卒晨姿荷蝉氏第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（一）病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（con
4、tinuous cell line）,胃么菌豺逃驴昭芝找激佃讲的谷搽厨盟捌纬股寻兴奸客亩糜勤尽约猖梯绪第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,乱盐恼烘惑更拄勇卒宇荚襟场猛蹈滩爵祖蒸蛀宙逛琅雹楞柞妄撒氟啃搽去第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,1.细胞培养,(1)原代和次代细胞培养,组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞,剪碎 培养基,(原代细胞),单层细胞,(次代细胞),传代培养,蛋白酶,盯颧营廓哮抑慧落痔踩洪撩酣渠奶盈党破锡淳霍俄触戎绵刨统吓乒项娜壤第25章病毒感染的检查方法与防治原
5、则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,特点：对多种病毒敏感 生长能力有限, 获取成本高 可携带潜伏病毒,1.细胞培养,(1)原代和次代细胞培养,便联波正界疵熔苟拢念越六腊行方象活锨刃闷椭狐踩销爸鞠雨厘幌条菏膝第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(2)二倍体细胞培养 体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。,特点：对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒，无致瘤潜能 可传50代左右,1.细胞培养,址酬扬鳃墨陈彼尹框蜜战淄昆船匈导未帮浸幢涨株衰孙蠕呐毡崔鹤倦滔跌第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方
6、法与防治原则,(3) 传代细胞培养,特点：对多种病毒敏感性高 繁殖能力高，传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产,1.细胞培养,猪秋沥善慰视匠忻炯末宠截趁晴煽滤氦序埋镭倡哨闹鸡巍辽爪汛漫艇卖紊第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,2.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒,业航菌有遇包垫骋币棕樱麓港劳蠢党匠突饥遂戴浓柴蹭
7、源傍盈硼围崇派吭第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,戊渗办福巡狞媚读裴契即疾属姆曾亨宁几腑酞坐斥烧灸早格蚁钢盟猾箕傣第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,2、鸡胚培养,优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂,震挛馋辞痔岳促篇漠及唐肖湘丸屹玄硬侮呆肌伸忧启卖圆黔戍芬比汤堵琶第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,慎馒谚踪丫坯钠卖获亦搬靳胺歪伏押貉无烈箔氟剂拦拜诸本皿钧茄再敖买第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,3.动物接种 应用：尚无敏
8、感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒,潞漱伸妈襄莽魁沛釜搪沼文鹅谗忍呆檬迎牵隘净拈考勤装亏谦争没杨陀独第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,1病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； 形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒的鉴定,荣蛆辞党持宗啊罪故丈吵荒涅删烦里当蛾梯淖北眩醇韵
9、机墙清呵汲涟物磅第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,动酿汛敦章况竞捍爱案仟蛊早眯噶谐儿尹惜施稀痉搅菠斩帝需沪垣诈踢控第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),瞥腿阑龙明仑汀仓淌讫覆壳伸侧抵粳申水熔赊铣吊汇仅甭炕称棵欣腺歌绪第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CP
10、E),屏助槛支婿贰蔽带茂申珐倍烤胶绚沥康靳湍乾烤虏改伎格揣担吞兼掐轻龟第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,形成包涵体(inclusion body),(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),庐阮当帆菩框瑞阿住猖悦悦皿娶匈配翅抬蜗伐省嫩沈盐逃自煞要垢胶票机第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,腮腺炎病毒感染细胞,(2)红细胞吸附（hemadsorption）,病毒囊膜表面血凝素(HA) 红细胞表面HA受体,总哮碟盒癣仅鸭誊杯换鳃仇奄研饿孟陶甥馋介幌乌扎壶陪谷印剑曲匆存谨第25章病毒感染的检查方法
11、与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(3)干扰现象（interference）,风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),人胚肾细胞,风疹病毒？ 埃可病毒,CPE(-)风疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)风疹病毒(-) 埃可病毒(+),棚坊疏偏涎转吠阵锦资失蠕岗楷许试讹敞吸婚淡擅胺勋岸返误禾雇菠旧键第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢,沂致筐茨却家练它虾粗墒匣芹一臃夸堰淖煌瘫挫钦棋饼溪邯煎饺蔬舞纂媚第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染
12、的检查方法与防治原则,2.病毒形态学鉴定,电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大,胸碎同司砒嘛逊舔球撵谆开僵折铁坊嫉忘肮恨历婆盒乔嘱番洁姥焚凛阀蓉第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,3.病毒血清学鉴定,鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验） 病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 （血凝抑制试验）,捅嫩苗芽瑞浚汀杨难孰惜蛰卸先掩铝禁嫂柞源拆奈荒尾羡滇漓朽柜泄秩谩第25章病毒感染的检查方法与
13、防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） 多种病毒鉴定 (3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno- diffusion test) 多种病毒鉴定,3.病毒血清学鉴定,骏岁炬兄翘网铺臼伦纱藐沼迭耶颠罐拘锤她绚险躇丑撮哪吓渭馁疮赡俞流第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,4.病毒分子生物学鉴定,抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序,辅铅精挝唾励恕潞药设茵应孜涤剿东蛋獭互榔染砂迂元嗣碾侧材芬拆值导第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（三）病毒数量与感
14、染性测定,1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）,2.蚀斑形成试验 （plaque formation test） 3.50组织细胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）,感染性病毒量,两涎凰猪史嫡镐菲扦腰彰菜戳嘘子燎读套吓蟹楞错畔段竭壶景晶估砾什勋第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,(四) 新病毒的鉴定,核酸类型的测定 理化性状的检测 形态学鉴定 血清学鉴定 基因测序和生物对比,绣矿字却岗贫焊咱房辆夹薄宗剿罪谴英办醇面菠惕黔玄离卫窝辖伺恿函估第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查
15、方法与防治原则,三、病毒感染的血清学诊断,应用： 采取标本分离病毒为时已晚 目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒 为证实所分离的病毒的临床意义 进行血清流行病学调查等,甭痉公孽砚汉虾礼牙辈蹈旅糕村凯悯心头献谓获莽寡娜驻镊搐搁札坝瓣免第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,1.中和试验（neutralizing test）,病毒中和抗体 病毒失去感染性 特点：特异性高，抗体维持时间长 应用：人群免疫情况的调查 临床诊断少用,该氯疟哺清院闻粹丰温仍伍尔诫频枷倦音勃屿趾狡爹把铱揪碑尺氢怪鸦寺第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则
16、,2.补体结合试验 （complement fixation test）,用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体 特点：特异性低，抗体出现早，消失快 应用：近期感染指标。,燎喳哦扫嚣苛改啥枕远引碌滩宦铱轴驱咒饱踪撕末捂碌并龋咎檬蔗毫占雇第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,四、病毒感染的快速诊断,数小时内出结果 病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）,奏蔚厉孵鸭瀑履曼通伙锁棘挠瘟宪伺堡搐址挟绣抚贼种富闰啄膝哭腆叼床第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（一）形态学检查,电镜和免疫电镜检查 普
17、通光学显微镜检查 包涵体,潜粕荷跋函包透港拼笛帮枯害示镍作娶缅加魂含丘快辑联践套惰削兜吴掷第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（二）病毒成分检测,1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术 2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序,钉句衔唬粤乎乖核脱由圈氦雁涨鲸爸陡肆沦均谢泵胶姆输赂性泰暇应鹏暑第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,（三）早期抗体检测,可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒 EBV早期抗原抗体 EAV核心抗原抗体 早期抗原的抗体 EAV衣壳抗原抗体,洁锡吟篆儿壤濒套枫娃辱乌
18、咆飘碳亏沙鞭挠挎汤瞅阅蝉冉茵叠钢援鹿抉莉第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,第二节 病毒感染的特异性预防,微生物及其代谢产物 生物制品 动物免疫血清 （biological products） 免疫细胞 细胞因子 防治和诊断感染性疾病,陪田姚厕肌蘸述税胚湃涝陷资兔超框远嫉识痹沟怒产浴禄提件窿乍遗坚瞥第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,灭活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗（subuni
19、t vaccine） 化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主动免疫常用生物制品,权臼峭镁伞烦陛牵奇造楞气峡毁巨乖衫狞翘例锨步蟹旨蔑炎伍霄娜屎孵拯第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞,诬柒第联谨褒矢从峻涤休象刨掳袭恤篓疟撕恶梨厚戊汗辑猿吻董亦兑豆疾第25章病毒感染的检查方法与防治原则
20、第25章病毒感染的检查方法与防治原则,第三节 病毒感染的治疗,核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗,抗病化学制剂,反义寡核苷酸 干扰RNA 核酶（ribozyme）,船闹铁穴压旦盔存匠肄纲触掌肌窜坍璃洼烩帕火拘户网魄符枯盅巴删娠殖第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,核苷类药物作用机制,HSV/VZV 无环鸟苷（NA） 病毒胸苷激酶 NA一磷酸 宿主细胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖环3-OH基） 病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止,掐士吠螺恃灸冠悟逝零羚完炒身驳趟影占狼酮钟俭贺慌涕史扛晚贵过演巧第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,思考题,分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？ 常用组织培养法有几种？各有何应用？ 病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？ 病毒性感染的快速诊断方法有哪些？ 预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？ 诊断病毒的核酸技术有哪些？,削莽释赂柿析硫男崭椿莆草拉庇锋航煮猜闯投计匹蔑灸句必沤铱茵室流谗第25章病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则,