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1、穿刺液标本细菌学检验标准操作规程1. 目的 规范穿刺液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结 果准确可靠。2. 适用范围穿刺液标本培养。3. 标本3.1 标本类型 胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液 等。3.2 标本采集 采用无菌方法采集体内可疑感染部位 的液体约 2ml ，注入无菌试管，或抽取穿刺液 1-2ml 注入多 功能液体培养瓶， 或抽取穿刺液 2-5ml 注入血培养瓶， 混匀， 立即送检。如怀疑厌氧菌感染，应做床边接种或接种运送培 养基。3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。3.3.2 标本不是无菌留取，容器不符合要求。3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，
2、 不能及时 送检可置于室温，放置时间不超过 2 小时。4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、 3% 触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等4.2 VITEK 鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（ GNI+ ）、革 兰阴性菌药敏卡（GNS ）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰 阳性菌药敏卡（GPS）、真菌鉴定卡（YBC）、药敏纸片、TBA 板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、 CO2 培养箱等。5. 细菌鉴定和药敏质控参见质量管理程序6. 检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。6.1 涂片检查 脓性标本直接涂片。
3、 浆液性标本先离心（ 3000r/min ） 15 分钟， 取沉淀物涂片作革兰染色， 观察有无 细菌，以及细菌的形态。6.2 分离培养6.2.1 一般细菌培养 接种于接种于血琼脂平板、巧克 力琼脂平板和麦康凯（或 EMB 、中国蓝）琼脂平板，置于 5%-10%CO2 环境中， 35° C 培养 18-24 小时，根据菌落及染 色形态特点，作出初步判断。6.2.2 增菌 -分离培养法 将多功能体液培养瓶颠倒混匀 使液体覆盖整个固体面，然后置 35° C 孵育培养箱（固体面 在上，液体在下） 。次日观察固体表面菌苔生长及瓶中液体 是否浑浊。如发现有菌生长，立即涂片镜检、生化鉴定
4、和药敏试验。此法可提高阳性检出率。6.2.3 厌氧菌培养 床边接种或从厌氧菌运送培养基转 种后，立即置于厌氧环境中， 35°C 培养 24-48 小时；挑取 可疑菌落作耐氧试验，确定为厌氧菌。6.2.4 结核分枝杆菌培养： 参见分支杆菌属检验标 准操作规程 。7 结果报告培养 48小时无菌生长，报告“培养 2 日无细菌生长” 。 查见细菌，报告菌名和药敏结果。注意事项标本的采集一定要严格履行无菌操作技术，避免污染。 加入抗凝剂的标本（如胸腹水）采集后要与抗凝剂充分 混匀并及时送检。体液均需做厌氧培养，故运送过程严格厌氧环境。临床意义 各个部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜
5、液等）的细菌学检查对于确定该部位是否有细菌感染具有重 要的诊断价值。正常穿刺液是无菌的，若从病人穿刺液中查 见致病菌或条件致病菌则提示该部位有细菌感染。胸腔感染 的病原菌以结核分枝杆菌多见，其次是金黄色葡萄菌、溶血 性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等，腹腔感染的病原 菌以肠道细菌如大肠埃希菌、溶血性链球菌、粪肠球菌，以 及结核分枝杆菌多见；心包炎和关节炎以金黄色葡萄菌、溶 血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等多见。10.危急值报告涂片发现细菌或培养阳性均需要及时向临床报告结果。参 考 文 献1 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL32:2008医学实验室质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南.20082 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解第二版.上海： 上海科学技术出版社，20073 叶应妩，王毓三，申子瑜主编全国临床检验操作规程第.三版.南京：东南大学出版社，20064 Murray PR. Manual of Clinical Microbilogy.9th ed.Washington: ASM Press, 20075 ISO15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007