SDS-PAGE所有详细试剂配方.docx

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1、GB8878185555334563BT9125XW创作肴:凤呜大王*SDS-PAGE30%坦”YOU 咬匚二仪一一30% (w/v) Acrylamide【组分浓度】各种组分名称配制不同体枳所需各成分的体积(mL)或质虽(g)30%Acr-Bis(29:1)1000ml100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺)290g29g1%BIS (N»N>-亚甲内烯酰胺)10g3【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,W亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热(37C左右)的去离子水中. 充分搅拌溶赂补加水至终休积为100ml. 0.45pm微孔滤膜过避除菌和朵质储干棕色瓶.4C避光(

2、用铝 箔纸包扎起来)保存。严格核实PH不得超过7.0, W可以发生脱每基反应是光催化或碱催化的。使用期 不得超过两个刀,隔几个须重新配制。如有沉淀.可以过滤。【保存条件】4c避光(用铝箔纸包扎起来)保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收,其作用具有累积性。称址丙烯酰胺利N,N=亚甲丙 烯雄胺时应戴于-套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能含有少址未聚合 材料。1MTris-HCL (pH6.8)(浓缩胶 buffer)【组分浓度】1MTris-HCL名称用二备注Tris12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml(36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离

3、子水定容至100ml后,室温保存【配制方法】称虽121.1 gTris碱溶于800mL的去离子水,充分搅样溶解,加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值(74大约0.7mL. 7.6 大约0.6mL. 8.0 大约0.42mL),将溶液定容至1L,岛温商庄灭菌后.室温保 存。应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大.温度每升高 19,溶液的pH值大约降低0.03个讯位。【保存条件】室温保存。【注意事项】对人体有刺激性,请注意适为防护。创作编号_LGB8878185555334563BT9125XW创作肴:凤呜大王*1 .5MT,sHCL (pH8

4、.8)(分离胶 buffer【组分浓度】1.5MTrisHCL名称用虽备注Tris187g去离子水80ml浓盐酸3ml(36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至10()ml后,室温保存【配制方法】1L称虽181.7gTris就溶于800mL的去离子水,充分搅拌溶解,加浓HCL调节所需要的pH值=8&将 溶液定容至 1L.高温商庄灭菌后,室温保存。(1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris 和 48ml1 mol/LHCL 混合,加水稀释到100ml终体积。过滤后4保存。)【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为T

5、ris溶液的pH值随温度的变化差界很大,温度每升 商 代,溶液的pH值大约降低0.03个单-位。10% I- -烷基硫酸钠SDS浴液10%(w/v)SDS【组分浓度】10%(w/v)SDS名称用虽备注SDS10g去离子水80ml加入去离子水定容至100ml后.室温保存【配制方法】称取2g商纯度的SDSS于100-200ml烧杯中,加入约16ml的去离子水,68C加热溶解.滴加浓盐 酸调节PH至7.2.定容至20ml后-室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害,请注意防护。10%过硫酸狡济液10%(w/v)AP【组分浓度】10%(w/v)过硫酸gg名称用量备注过硫酸钱o.lg去离子水i

6、ml现配现用【配制方法】称取01g过硫酸钱宜于1.5ml离心管.加11 mL去离子水吹打溶解,4C保存【保存条件】4c保存【注意事项】10%过硫酸饮溶液在4c保存时,可使用2周左右,超过期限会失去催化作用%Tris-11 氮酸电泳缓冲液5xTris-Glycine buffer (SDS-PAGE 电泳缓【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质S(g)1000ml500ml0.125M Tris15.1g1.25M glycine(甘氨酸)94.0g0.5%(W/V)SDS5.0g【配制方法】称取15gTris, 94.0g甘氨酸(glycine)5.0gSDS,ffl

7、 800ml蒸tS水或去离子水溶解.充分搅拌溶解.定容至1000ml,室温保存。得0.125mol/L Tris-1.25moi/Ltt氨酸电极缓冲液。临用前 稀释5倍。【保存条件】室温保存两年有效。【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。电泳缓冲液可以回收.回收后可再使用12次,但为了取得最佳的电泳效果,应使用新电泳液。5xSDS- PAGE 加样缓冲液=5xSDS-PAGE Loading Buffer 【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8):10%(W/V)SDS :0.5%(W/V) BPB(澳酚蓝):50%(V/V)廿油:5%(W/V)B 筑基乙醉(2ME)各种

8、组分名称配制不同体枳所需各成分的体积(mL)或质®(g)5ml3mlIMTris-HCL(pH6.8)1.25mlSDS0.5gBPB隈酚蓝)25mg廿油2.5ml(0.5mU份)分装.室温保存,使用前加25pL 2-ME/小份,保存一个J J左右。口 俎基乙醇(2-ME)0.25ml【配制方法】址取 1.25mLIMTris-HCL (pH6.8) , 0.5g SDS, 25mg BPB. 2.5mL 甘油-置于 10mL 塑料 离心管中. 加去离子水溶解后,定容至5mL小份。5mL/份)分装,干室温保存。使用前将25pL的2-ME加入到每小 份中。加入2-ME的Loading

9、Buffer可在室温下保存一个J J左右。【保存条件】, 2(rc保存,至少一年有效。【注意事项】SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少® DTT和筑基乙妙有轻微刺激性气味,必须完全溶解后再使 用。摘自Takara商品目录实验室常规试剂配制方法【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝R250,25%(v/v)异丙帆10%(v/v)冰醋酸各种组分名称配制不同体枳所需备成分的体枳(mL咸质S(g)1000ml400ml备注考马斯亮蓝R-250I.Og0.4g异丙醇250ml100ml搅拌溶解.可用甲醇替代冰醋酸100ml40ml搅拌均匀去离子水650ml260ml搅拌均匀,演纸除去颗粒物.室温保存【组分浓度】10%(v/v)醋酸,5%(v/v)乙醛名称用址备注冰醋酸100ml乙醇50ml去离子水850ml充分混匀后使用创作褊号_LGB8878185555334563BT9125XW创作肴:凤呜大王*

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