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1、DEAE-52纤维素的处理关于DEAE52纤维素的处理只有简单的几步，如下：1先将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中，一段时间大约3小时左右，我偏爱这个时间，去除杂质，最好抽干一下；2再用0.5mol/l的HCI溶液浸泡2小时，用去离子水洗净至PH中性，并抽干；3将抽干的纤维素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小时，用去离子水洗至中性，抽干。即可用了对于用过的纤维素，可以重复利用多次， 但需要经过再生处理后才可以使用。再生处理可先用高浓度 NaCl (1 2 mol/L)过柱冲洗柱床，以除去DEAE 52阴离子交换纤维所吸附的成份。然后，再用 0.5 mol/L的HCI和NaOH处理，处理方法
2、与预处理完全相同。DEAE 纤维素的处理及装柱(1) 处理本实验采用的是 DEAE 纤维素DE 52是弱酸型阴离子交换剂， 具体处理方法为：先将DE52 阴离子交换剂 干粉浸泡于蒸馏水中，去除杂质；再在0.5N的HCL溶液中浸泡1 2h,再用无 离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上，并将其在抽滤漏斗中抽干；将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1 2h,再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。(2) 装柱将层析柱清洗干净垂直固定到 层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通， 即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢 沉降再层析柱底部，凝胶沉积直到
3、离层析柱上端1.5 2cm处，停止装柱。层析柱上端进液口连接恒流泵，下出口连接蛋白质监测仪，待层析柱的平衡。(3) 平衡在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液(洗脱液)置换出来，使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。其方法是：利 用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min ,当下出口流出液的 PH值与平衡缓冲液的 PH值一致时，层析柱达到了平衡。在本实验中，用 0.002M Tris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001M EDTA)，预先将 DE-52柱进 行平衡。DEAL纤
4、维素的活化称取IgDEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸馏水浸泡过夜，观察溶胀后DEAE的体积。根据所需层析柱的柱床体积计算所需DEAE的用量，称取所需 DEAE用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。抽干，改用0.5ml/LNaOH 溶液浸泡1h以上，抽干(可用布氏 漏斗),用无离子水漂洗，使pH至8左右(用pH试纸检查)。再改用0.5ml/LHCI溶液浸泡1h以上，去酸溶液，用无离子水洗至pH6左右。本实验中在用前应以 0.0175mol/L , pH6.7磷酸盐缓冲液，浸泡平衡后使用。DEAE纤维素的再生用过的离子交换剂可以反复使用，使其恢复原状的方法俗称再生”。再生并非每次用酸、碱反复处理，通常只要转型”处理即可。所谓转型就是使交换剂带上所希望的某种离子，如希望阳离子交换剂带上NH+4则可用NH40H浸泡，如希望阴离子交换剂带上CI 则用 NaCI溶液处理。本实验 中DEAE 纤维素在酸碱处理后，用0.0175mol/L ，pH6.7磷酸盐缓冲溶液浸泡即可转型，以HP04取代DEAE中的0H 。一般由于 DEAE 纤维素使用后因带有大量杂蛋白，所以再生时，先用0.5ml/L NaOH浸洗，用去离子水洗至pH8左右，再转型，即可再使用。