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1、免疫色谱法与发光免疫分析法测量血清降钙素原【摘要】 目的 目前临床上常用的检测血清降钙素原（ Procalcitonin PCT）的方法：半定量免疫色谱法（ PCT-Q）和定量发光免疫分析法（ PCT-L）， 我们的实验目的是比较这两种方法的一致性，更好地为临床诊断、治疗服务。 方法 73 份人血清标本，分别采用 PCT-Q和 PCT-L两种方法检测 PCT含量。 PCT-Q检测结果将样本浓度分为四个级别，即：< 0.5 ng/ml 、0.5 <2 ng/ml 、 2<10 ng/ml 和10 ng/ml 。一致性用 Cohen's统计获得。结果 65.8 %样本 P
2、CT-Q与 PCT-L的检测结果在同一级别， 27.4 %样本检测结果上或 下相差一个级别，一致性检验 k=0.506 ，符合尚好。结论 虽然利用 PCT-Q检测 血清 PCT浓度快速并简单易行，但 PCT-Q与 PCT-L的检测结果并不总是一致 的，对于有疑问或要求监测治疗的病例， PCT-L仍是首选的检测方法。【关键词】 降钙素原；半定量；免疫色谱法；发光免疫分析法Comparison of serum procalcitonin test between immunochromatograph and immunoluminometry【 Abstract 】 Objective The
3、 coherence comparison of serum procalcitonin (PCT) between two methods: the semi -quantitative solid phase immunoassay( PCT-Q)and the quantitative luminometric assay ( PCT-L). Methods Seventy three samples were analyzed with PCT-Q. Results obtained were categorized into 4 concentration ranges :<
4、0.5ng/ml 、 0.5 < 2ng/ml 、 2< 10 ng/ml 和 10ng/ml. In parallel, serum procalcitonin concentrations were measured with PCT-Q as a standard . The data of PCT-Q and PCT- L were analysied with Cohen 's k as a measure of concordance.Results 65.8% of samples were consistently categorized according
5、 to the results of PCT-Q and PCT-L . 27.4% of samples were categorized within the next higher or lower concentrations categ ory in the methods . Cohen's kvalue is 0.506.Conclusion PCT-Q was a quick and easy handle methods for serum PCT measurement. However the results of PCT-Q were not always id
6、entical comparison to the PCT-L. So PCT-L was a good choice for questionable cases and the monitoring of treatment.【Key words 】 procalcitonin(PCT);immunochromatographic test;immunoluminometric assay降钙素原( Procalcitonin PCT )作为一种新的严重细菌感染早期诊断 指标，在国外已广泛应用于 ICU，并取得了良好效果。 PCT是一个具有创新意义 的诊断指标，具有三大突出优点，一是可用于
7、疾病的早期诊断：严重全身性细 菌感染 23hPCT浓度开始升高， 2448h 达到峰值。二是用于疾病的鉴别诊 断， PCT 是一种新的高敏感性和特异性细菌感染与非细菌感染鉴别诊断的指标 1， 2。三是它可用于感染病情的监测： PCT浓度与细菌感染严重程度呈正 相关关系，随着感染的控制和病情的缓解， PCT浓度下降。目前临床常用检测 PCT含量的方法有半定量免疫色谱法（ Semiquantitative immunochromatographic test PCT-Q ）和定量发光免疫分析法（ Quantitative immunoluminometric assay PCT-L ）。我们研究的
8、目的是了解两种方法的符合 程度和一致性，更好地为临床诊断和治疗服务。1 材料与方法1.1 试剂与仪器 PCT-Q、PCT-L检测试剂盒（德国 BRAHM公S 司）， Lumat LB-9507 PCT分析仪（德国 BRAHM公S司制造）， TS-100脱色摇床（北京 市新技术应用研究所）。1.2 标本来源及处理 本院门诊或病房患者，抽取静脉血 2ml ，离心 10min（3000转/min），收集血清备用。样品在 4h内检测，否则 - 20冰箱保 存。1.3 实验方法 血清标本 73 份，每份样品分别采用 PCT-Q和 PCT-L 两种 方法进行检测。1.3.1 PCT-Q 检测 利用一个标记
9、有胶体金的抗 catacalcin 单克隆小鼠 抗体（示踪剂）和多克隆绵羊抗降钙素抗体（固相）做检测。病人的样品（血 清） 200l 加到检测孔后，示踪元素就结合到样品中的 PCT，形成标记的抗原 抗体复合物。这个复合物在检测系统中借助毛细作用移动通过含有检测带的区 域，在此过程中，标记的抗原抗体复合物就结合到固相的抗PCT的抗体上，形成一个夹心式的复合物。当 PCT浓度 0.5ng/ml ，这个复合物呈淡红色条带， 条带的颜色强度直接与样品中 PCT的浓度成正比。没有结合 PCT的示踪剂扩散 到对照条带区，在那里被固定，能产生非常强烈的红色条带，这个检测系统的 功能是通过这条对照带来测定的。
10、 30min 后与参考卡片上提供的 PCT浓度比色 卡进行对比，报告样本的浓度级别 （ <0.5 ng/ml 、 0.5 <2 ng/ml 、2< 10ng/ml 、 10 ng/ml） 。1.3.2 PCT-L 检测 利用免疫化学发光检测人血清中 PCT浓度的定量分 析方法。 20l 血清标本（或不同浓度标准液、对照液）加到检测管内，吸取 250l 示踪剂至检测管（以上步骤在 15min 内完成），混匀，确保液相均匀。 粘性箔遮盖管口，避光，放置在脱色摇床（ 300转/min ）上室温（ 18 25）孵育 70min。两种抗原特异性的单克隆抗体与 PCT（抗原）的两个不同的
11、 结合位点（降钙素和降钙蛋白）结合，一种抗体是经化学发光标记（示踪 剂），另一种固定在管腔内壁（包被管系统）。孵育期间，两种抗体与样本中 的 PCT反应形成“夹心复合体”，结果化学发光标记的抗体被结合到管腔内 壁，一旦反应结束，多余的示踪剂被清除。用 PCT分析仪对残留在管壁上的示 踪剂发出的光进行定量分析，标本中化学发光强度直接与PCT浓度成正比。用标准液建立标准曲线后，患者血清中未知 PCT浓度可通过标准曲线计算后读取 数值。整个检测过程需 2h 左右，检测灵敏度 0.1ng/ml 。1.3.3 以 PCT-L 为标准 PCT-Q与 PCT-L的检测结果落在同一级别或相 差上下一个级别为相
12、互符合，否则为不符合。 PCT浓度< 0.5 ng/ml 为阴性结 果。1.4 统计学分析 采用 SPSS 12.0 统计软件进行 Cohen's k 统计， k= 0.4 0.6 为符合尚好 3。2 结果73 份样本 PCT-Q检验结果： 27 份样本< 0.5ng/ml ，12 份0.5 < 2ng/ml ，l8 份 2< 10 ng/m，26份10ng/ml。其中 48份（ 65.8 %）样本与 PCT-L的检测结果级别一致， 20份（27.4 %）样本 PCT-L与PCT-Q的检测结果 上或下相差一个级别， 68份（ 93.2%）样本符合， 5 份（6.2%）样本不符合。假 阳性结果 11 例（15.1%），假阴性结果 1 例（ 1.4%）。见表 1。一致性检验 k=0.506 ，符合尚好。表 1 PCT-Q、PCT-L检测结果比较