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1、培养基适用性检查报告1. 试验目的：对培养基性能的质量控制，以保证微生物检验的质量。2. 适用范围：适用于细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基和控制菌检查用的培养基的适用 性检查。需检查的培养基包括成品培养基、由脱水培养基和按处方配制的培养基。3. 试验内容：3.1. 计数培养基的适用性检查3.1.1. 菌种：大肠埃希菌 CMCC （B）44102金黄色葡萄球菌 CMCC （B）26003枯草芽孢菌 CMCC （B）63501白色念珠菌 CMCC （F）98001黑曲霉 CMCC（F）980033.1.2. 菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基 或琼脂斜面
2、培养基中， 33培养 24 小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或 改良马丁琼脂斜面培养基中， 26培养 48 小时。上述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数 50 100cfu 的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中， 26培养 7天，加入 4ml含 0.05%（ml/ml ）聚山梨酯 80的 0.9%的无菌氯化钠溶液，将孢子洗 脱。然后，用管口带有薄的无菌棉花吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ ml/ml ）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数 50 100cfu 的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在
3、 2 小时内使用；若保存在 28，可在 24 小时 内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证过的贮存期内使用。3.1.3. 适应性检查3.1.3.1. 细菌计数用培养基适应性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml（ 50100cfu ），分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，混匀，凝 固，置 33培养 48 小时，计数。用被检培养基和对照培养基（若无对照培养基可用其他厂家生产的培养 基）按上述方法进行试验，并记录。试验结果报告见表 1。报检测日期告日 期生 被检培养基名产厂 称家对照培养基名称生产厂 家菌落数：单位肠埃 黄色 草芽球菌 菌
4、被检培养基对照培养基平均菌落数比值菌落形态大小结果判定备注表1 细菌计数用培养基适用性检查检验人： 复核人：3.1.3.1. 霉菌及酵母菌计数用培养基适应性检查取白色念珠菌、黑曲霉各 1ml（50 100cfu ），分别注入无菌平皿中，立即 倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置 26培养 72 小时，计数。用被检培养基和对照培养基（若无对照培养基可用其他厂家生产的培养基）按上述方法进行试验，并记录。3.1.4. 结果判定若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的 70%，（或与其他厂家生产培养基上菌落平均数相互比值不小于70%），且菌落形态大小与对
5、照培养基（或与其他厂家生产培养基）上的菌落一致，判该培养基的适 用性检查符合规定。试验结果报告见表 2表 2 霉菌及酵母菌计数用培养基适用性检查报检测日期告日 期被检培养基名称生产厂 家生 对照培养基名 批 产厂菌落数：单位色念cfu ） 曲霉珠菌被检培养基对照培养基平均菌落数比值菌落形态大小 结果判定 备注检验人： 复核人：3.2. 控制菌（大肠埃希菌）培养基的适用性检查3.2.1. 菌种：大肠埃希菌 CMCC （B）44102 金黄色葡萄球菌 CMCC （B）260033.2.2. 菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上， 33培养 24 小
6、时，用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数为 10100cfu 的菌悬 液。菌液制备后若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 28，可在 24 小时 内使用。3.2.3. 适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。大肠埃希菌培养基的检测项目及所用菌株见表 3。培养性试验表 3 大肠埃希菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查特菌株胆盐乳糖培养基（BL）促生长能力大肠埃希菌抑制能力 金黄色葡萄球菌大肠埃希菌4- 甲基伞形酮葡萄苷 促生长能力 +指示 酸培养基（ MUG）能力曙红亚甲基蓝琼脂培养基（ EMB）或麦康促生长能力
7、+指示凯琼脂培养基能力大肠埃希菌MacC)胆盐乳糖培养基（液体培养基促生长能力检查）分别接种 1ml（不大于 100cfu ）的大肠埃希菌于 100ml 胆盐乳糖被检培养基和 对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中， 33培养 18 小时，与对照培养基管 （或与其他厂家生产培养基）比较，被检培养基管大肠埃希菌应生长良好。胆盐乳糖培养基（培养基抑制能力检查）接种 3ml（不少于 100cfu ）的金黄色葡萄球菌于 100ml 胆盐乳糖被检培养基和 对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中， 33培养 24 小时，金黄色葡萄球菌 不得生长。4- 甲基伞形酮葡萄苷酸培养基（液体培养基促生长能力、指示能
8、力检查）分别接种 0.2ml （不大于 100cfu ）的大肠埃希菌至 5mlMUG被检培养基和对照 培养基（或与其他厂家生产培养基）的试管内， 33培养，于 5 小时、 24 小时在 366nm紫外光下观察，被检培养基应与对照培养基管（或与其他厂家生产培养基） 大肠埃希菌生长情况一致，并呈现荧光。观察后，分别沿被检培养基与对照培养基 （或与其他厂家生产培养基）的管壁加入数滴靛基质试液，液面均应呈玫瑰红色。曙红亚甲蓝琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）取大肠埃希菌各 0.1ml （含菌数 50100cfu ）分别涂布于曙红亚甲蓝琼脂被检 培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）
9、平板上， 33培养 18 小时，被 检培养基上大肠埃希菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培 养基（或与其他厂家生产培养基）一致。在曙红亚甲蓝琼脂培养基上，大肠埃希菌的菌落特征：紫黑色、浅紫色、蓝紫 色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表 面光滑，湿润，常有金属光泽。麦康凯琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）取大肠埃希菌各 0.1ml （含菌数 50100cfu ）分别涂布于麦康凯琼脂被检培养 基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上， 33培养 18 小时，被检培 养基上大肠埃希菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应
10、与对照培养基 （或与其他厂家生产培养基）一致。在麦康凯琼脂培养基上，大肠埃希菌的菌落特征：鲜桃红色或微红色，菌落中 心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。表4 大肠埃希菌检查用培养基适用性检查检测日 期报告日期培养基促生长胆盐乳糖培养基特性名称能力试验菌培养温培养株度时间被检培批号生长养基厂家对照培养基厂家结果判定备注批号情况生长情况培养基胆盐乳糖培养基名称特性抑制能力试验菌株培养温度培养时间被检培养基厂家生长批号情况对照培养基厂家批号生长情况结果判备注生长情况5 小时 24 小时观察 观察靛基质指示培养基促生长能力、指示MUG特性名称能力试验菌培养温培养株度时间被检培养基厂批号
11、家对照培养基厂批号家被检培养基厂家对照培 养基厂 家结果判定养基备注名称能力试验菌培养温培养株度时间被检培养基厂批号家对照培养基厂批号促生长能曙红亚甲蓝琼脂培养基 特性 力、指示家菌落大 菌落形 生长情况小态被检培养基厂家对照培养基厂家结果判定备注促生长能 力、指示 能力麦康凯琼脂培养基名称特性试验菌培养温培养株度时间被检培批号养基厂对照培养基厂家批号生长情况菌落大 菌落形小态被检培养基厂家对照培养基厂家结果判定备注检验人： 复核人：3.3.1. 菌种：乙型副伤寒沙门菌 CMCC（B）50094金黄色葡萄球菌 CMCC（B）260033.3.2. 菌液制备接种乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌的
12、新鲜培养物至营养肉汤培养基中或 营养琼脂培养基上， 33培养 24 小时，用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数 为 10100cfu 的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在 2 小时内使用；若保存在 28，可在 24 小时内使用。3.3.3. 适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力 的检查。沙门菌培养基的检测项目及所用菌株见表 5。表5 沙门菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查培养基营养肉汤培养基四硫磺酸钠亮绿培养基抑制能力特性试验菌株促生长能力乙型副伤寒沙门菌促生长能力乙型副伤寒沙门菌金黄色葡萄球菌胆盐硫乳琼脂培养基或沙门、
13、志贺菌 属琼脂培养基曙红亚甲基蓝琼脂培养基或麦康凯琼促生长能力 +指示能力 乙型副伤寒沙门菌脂培养基三糖铁琼脂培养基指示能力乙型副伤寒沙门菌营养肉汤培养基（液体培养基促生长能力检查）分别接种 1ml（不大于 100cfu ）的乙型副伤寒沙门菌于 200ml 营养肉汤被检培 养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中， 33培养 18 小时，与对照培 养基管（或与其他厂家生产培养基）比较，被检培养基管沙门菌应生长良好。四硫磺酸钠亮绿培养基（液体培养基促生长能力检查）分别接种 1ml（不大于 100cfu ）的乙型副伤寒沙门菌于 10ml 四硫磺酸钠亮绿 被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产
14、培养基）中， 33培养 18 小时，与 对照培养基管（或与其他厂家生产培养基）比较，被检培养基管乙型副伤寒沙门菌 应生长良好。四硫磺酸钠亮绿培养基（培养基抑制能力检查）接种 3ml（不少于 100cfu ）的金黄色葡萄球菌于 100ml 胆盐乳糖培养基被检培 养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）中， 33培养 24 小时，金黄色葡 萄球菌不得生长。胆盐硫乳琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）取乙型副伤寒沙门菌各 0.1ml （含菌数 50100cfu ）分别涂布于胆盐硫乳琼脂 被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上， 33培养 18 小 时，被检培养基上乙型副
15、伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况 等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。在胆盐硫乳琼脂培养基上，乙型副伤寒沙门菌的菌落特征：无色至浅橙色，半 透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色。沙门、志贺琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）取乙型副伤寒沙门菌各 0.1ml （含菌数 50100cfu ）分别涂布于沙门、志贺琼 脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上， 33培养 18 小 时，被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况 等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。在沙门、志贺琼脂培养基上，乙型副伤寒沙门菌
16、的菌落特征：无色至淡红色， 半透明或不透明，菌落中心有时带黑褐色。曙红亚甲蓝琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）取乙型副伤寒沙门菌各 0.1ml （含菌数 50100cfu ）分别涂布于曙红亚甲蓝琼 脂被检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上， 33培养 18 小 时，被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况 等应与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。在曙红亚甲蓝琼脂培养基上，乙型副伤寒沙门的菌落特征：无色至浅橙色，透 明或半透明，光滑湿润的圆形菌落。麦康凯琼脂培养基（固体培养基促生长能力、指示能力检查）取乙型副伤寒沙门菌各 0.1m
17、l （含菌数 50100cfu）分别涂布于麦康凯琼脂被 检培养基和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）平板上， 33培养 18 小时， 被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应 与对照培养基（或与其他厂家生产培养基）一致。半透明，菌落中心有时为暗色三糖铁琼脂培养基（固体培养基指示能力检查）取乙型副伤寒沙门菌各 0.1ml （不大于 100cfu ）分别涂布于三糖铁被检培养基 和对照培养基（或与其他厂家生产培养基）高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种， 33培养 18 小时，被检培养基上乙型副伤寒沙门菌生长的菌落大小、形态特征、 指示剂反应情况等应与对照培养基（或与其
18、他厂家生产培养基）一致。在三糖铁琼脂培养基斜面见红色、底层见黄色；或斜面黄色、底层黑色。表6 乙型副伤寒沙门菌检查用培养基适用性检查检测日报告日期期促生长培养基特性营养肉汤培养基名称能力试验菌培养温培养株度时间被检培 养基厂 家批号生长情况批号生长情况对照培 养基厂 家结果判定对照培养基厂家备注培养基促生长四硫磺酸钠亮绿培养基特性名称能力试验菌培养温培养株度时间被检培 养基厂 家批号生长情况生长批号情况结果判定备注名称试验菌 株培养温 度培养时间被检培 养基厂 家批号生长情况对照培 养基厂 家批号生长情况结果判定备注培养基胆盐硫乳琼脂培养基名称特性促生长能 力、指示 能力试验菌培养温培养株度时
19、间被检培批号养基厂家对照培养基厂 批号菌落形态家菌落大 生长情况小被检培养基厂家对照培养基厂家结果判定备注培养基 沙门、志贺菌属琼脂培 特性 名称 养基促生长能力、指示能力试验菌培养温 培养株度 时间被检培养基厂批号家对照培养基厂批号家菌落大 菌落形生长情况小态被检培 养基厂 家对照培 养基厂 家结果判定备注培养基名称曙红亚甲蓝琼脂培养基促生长能特性力、指示能力试验菌培养温培养株度时间被检培养基厂批号家对照培养基厂批号家生长情况菌落大 小菌落形 态被检培 养基厂 家对照培养基厂结果判定备注培养基名称麦康凯琼脂培养基促生长能特性力、指示能力试验菌培养温培养株度时间被检培养基厂批号家对照培养基厂批号家生长情况菌落大 小菌落形 态被检培养基厂 家对照培 养基厂 家结果判 定备注培养基指示能三糖铁琼脂培养基特性名称力试验菌培养温培养株度时间被检培养基厂批号家对照培养基厂批号家生长情况菌落形 指示剂反应被检培 养基厂 家对照培 养基厂 家结果判定备注检验人： 复核人：