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1、HPLC异常问题原因及解决办法办法（一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列 表中参考相应的解决方法。A、没有压力显示，没有流动相流动原因解决方法1、电源问题1、接通电源，开机2、保险丝被烧坏2、更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败3、a采取恰当的设定b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断4、更换柱塞杆5、泵头内有空气5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足6、a、补充流动相b、更换入口滤头7、单向阀损坏7、更换单向阀&漏液&拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示原因解决方法1、仪表损坏1、更换仪表2、压力传感器损坏2
2、、更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1流速设定过高1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞2、a在允许情况下反冲色谱柱b、更换筛板C、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结3、a、使用恰当的流动相晶沉淀b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀6、柱温过低6、提高温度7、控制器失常7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞&清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞9、清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低原因解决方法1流速设定过低1、调整流速2、系统漏液2、确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高4、降低温度5、控制器失常5、维
3、修或更换控制器E、压力不断上升原因解决方法1见列表C1、见列表CF、压力降为零原因解决方法1见列表A、B1、见列表A、BG、压力不断下降，但不回零原因解决方法1见列表D1、见列表DH、压力波动原因解决方法1泵中有气体1、a溶剂脱气b、从泵中除去气体2、单向阀损坏2、更换单向阀3、泵密封损坏3、更换泵密封4、脱气不充分4、a溶剂脱气b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）5、系统漏液5、确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动HPLC日常维护办法之二：漏液漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意 的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。
4、如果通过稍 微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密圭寸表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。A、接头处漏液原因解决方法1接头松动1、拧紧2、接头磨损2、更换3、接头过紧3、a拧松，再重新拧紧b、更换4、接头被污染4、a拆下清洗b、更换5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件B、 泵漏液原因解决方法1单向阀松动1、a拧紧单向阀（不必拧的过紧）b、更换单向阀2、接头松动2、拧紧接头（不必拧的过紧）3、混合器密封损坏3、a更换混合器密封b、更换混合器4、泵密封损坏4、维修或更换泵密封件5、压力传感器损坏5、维修或更换压力传感器6、脉冲阻尼器损坏6、更换脉冲阻尼器7
5、、比例阀损坏7、a检查隔膜，如果漏液立即更换b、检查手糸接头，损坏的立即更换8、放空阀的损坏& a拧紧放空阀b、更换放空阀C、进样阀漏液原因解决方法1转子密封损坏1、重新安装或更换进样阀2、定量环阻塞2、更换定量环3、进样口密封松动3、调整4、进样针头尺寸不合适4、使用恰当的进样针5、废液管中产生虹吸5、保持废液管咼于废液液面6、废液管阻塞6、更换或疏通废液管D、色谱柱漏液原因解决方法1尾端接头松动1、拧紧接头2、卡套内有填料2、拆下、清洗卡套、重新安装3、筛板厚度不合适3、使用合适的筛板（参考下表）筛板选择指导物质粒径筛板孔径3-4u0.5u5-20u2uE、检测器漏液原因解决方法1
6、流通池垫片损坏1、a、避免过大的背景压力（压力降）b、更换垫片2、流通池窗破碎2、更换窗口3、手紧接头漏液3、拧紧或更换4、废液管阻塞4、更换废液管5、流通池阻塞5、重新安装或更换HPLC日常维护办法之三：谱图的各种问题液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。 其中有一些问题可以通过改变设 备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的 正确选择是得到好的色谱图的关键。A、峰拖尾原因解决方法1筛板阻塞1、a、反冲色谱柱b、更换进口筛板C、更换色谱柱2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误4、
7、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生5、a、加入离子对试剂或碱性挥发反应性修饰剂图b、更改色谱柱B、峰前延原因解决方法1柱温低1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载3、降低样品含量4、色谱柱损坏4、见 A1、A2C、峰分叉原因解决方法1、保护柱或分析柱污染图1、取下保护柱再进行分析。如果 必要更换保护柱。如果分析柱阻 塞，拆下来清洗。如果问题仍然 存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如 果问题仍然存在，入口可能被阻 塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂。如果可能采取
8、 流动相作为样品溶剂。D、峰变形原因解决方法1样品过载1、减少样品载量E、早出的峰变形原因解决方法1样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解决方法1柱外效应1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池G、K '增加时，脱尾更严重原因解决方法1二级保留效应，反相模式1、a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）C、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式2、a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）C、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法3、
9、二级保留效应，离子对3、加入三乙胺（或碱性样品）H、酸性或碱性化合物的峰拖尾原因解决方法1缓冲不合适1、a使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、额外的峰原因解决方法1、样品中有其他组份1、正常2、前一次进样的洗脱峰2、a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰3、a检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂C、减少进样体积J、保留时间波动原因解决方法1温控不当1、调好柱温2、流动相组分变化2、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化原因解决方法1流速变化1、重新设定流速2、泵中有气
10、泡2、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当3、a更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、基线漂移原因解决方法1柱温波动。（即使是很小的温 度变化都会引起基线的波动。通 常影响示差检测器、电导检测器、 较低灵敏度的紫外检测器或其它 光电类检测器。）1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。（流动相条件2、使用HPLC级的溶剂，高纯度变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）的盐和添加剂。流动相在使用前 进行脱气，使用中使用氦气。3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗 流通池。如有需要，可以用1N的 硝酸。（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。（高压造成
11、4、取出阻塞物或更换管子。参考流通池窗口破裂，产生噪音基线）检测器手册更换流通池窗。5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。为避免这个 问题可定期检查流动相组成及流 速。6、柱平衡慢，特别是流动相发生6、用中等强度的溶剂进行冲洗，变化时更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质7、检查流动相的组成。使用高品溶剂配成质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（咼K'&使用保护柱，如有必要，在进值）以馒头峰样被洗脱出，从而样之间或在分析过程中，定期用表现出个逐步升咼的基线。强溶剂冲洗柱子。9、使用循环溶剂，但
12、检测器未调9、重新设定基线。当检测器动力整。学范围发生变化时，使用新的流动相。10、检测器没有设定在最大吸收10、将波长调整至最大吸收波长波长处。处M、基线噪音（规则的）原因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空 气1、流动相脱气。冲洗系统以除去 检测器或泵中的空气。2、漏液图2、见第三部分。检查管路接头是 否松动，泵是否漏液，是否有盐 析出和不正常的噪音。如有必要， 更换泵密圭寸。3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过咼，检测器 未加热）4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪， 检查干扰是否来自于外部，加
13、以 更正。6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器N、基线噪音（不规则的）原因解决方法1、漏液图1、见第三部分。检查接头是否松 动，泵是否漏液，是否有盐析出 和不正常的噪音。如有必要，更 换密封。检查流通池是否漏液。2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、检查流动相的组成。3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子元件的问题4、断开检测器和记录仪的电源， 检杳并更正。5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污 染物也会产生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、检测器灯能量
14、不足&更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常10、维修或更换混合器，在流动 相不走梯度时，建议不使用泵的 混合装置0、宽峰原因解决方法1流动相组成变化1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低2、调节流速3、漏液（特别是在柱子和检测器3、见section 3。检杳接头是否松之间）动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密圭寸。4、检测器设定不正确4、调整设定5、柱外效应影响5、a柱子过载a、小体积进样（例如：10ul而不b、检测器对反应时间或池体积响是 100ul）以 1: 10 或 1: 100应过大的比例稀释样品C、柱子
15、与检测器之间的管路太长b、减少响应时间或使用更小的流或管路内径太大通池d、记录仪响应时间太长c、使用内径为0.007-0.01的短管图路d、减少响应时间6、缓冲液浓度太低6、增加浓度7、保护柱污染或失效7、更换保护柱8、色谱柱污染或失效，塔板数较&更换同样类型的色谱柱。如果低新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。9、柱入口塌陷9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果11、柱温过低11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75 C12、检测器时间常数太大12、使用较小的时间常数P、分离度降低原因解决方
16、法1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）1、重新配置流动相2、保护柱或分析柱阻塞图2、去掉保护柱进行分析。如果必 要则更换保护柱。如果分析柱阻 塞，可进行反冲。如果问题仍然 存在色谱柱可能被强保留的污染 物损坏，建议使用恰当的再生程 序。如果问题仍然存在，进口可 能阻塞了，更换入口处的筛板或 更换色谱柱。Q、所有的峰面积都太小原因解决方法1检测器衰减设定过高1、减少衰减的设定2、检测器时间常数设定太大2、设定较小的时间常数3、进样量太少3、增大进样量4、记录仪连接不当4、使用正确的连接R、所有的峰面积都太大原因解决方法1检测器衰减设定过低1、米取较大的衰减2、进样过多2、减少进样量3、记录仪
17、连接不正确3、正确连接记录仪HPLC日常维护办法之四：你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天 花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否 存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液 之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到A、 溶剂的气味原因解决方法1、漏液1、见 section 32、溅出2、a检查废液瓶是否已满b、找到溅出的部位并清洗干净B、热气味原因解决方法1、仪器过热1、a、检杳并调节通风设施b、检查并调节温度设定C、关掉仪器，查找维修手册C、读数不正常原因解决方法1、压力不正常1、见 section 22、柱温箱问题2、a、检查并调节设定b、参照用户手册3、检测器灯失效3、更换灯D、灯警告原因解决方法1、压力超出极限值1、a、检杳是否阻塞b、检查并调节极限值的设定2、其它警示灯2、见用户手册E、警告音原因解决方法1、溶剂泄漏/溅出1、找到并解决2、其它警告音2、见用户手册F、刺耳的短音或长音原因解决方法1、轴承失效1、见用户手册2、润滑不够2、进行恰当的润滑3、机械故障3、见用户手册