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1、实验五 磺胺嘧啶非静脉给药后的药时曲线及药动学参数实验学时： 6实验类型：（综合）实验要求：（必修）一、实验目的了解磺胺嘧啶非血管内一次给药后血药浓度随时间变化的规律。二、实验内容（1）制作磺胺嘧啶钠浓度标准曲线；（2）兔静脉注射磺胺嘧啶钠溶液， 定时采血测血药浓度， 绘制血药浓度 时间曲线；三、实验原理、方法和手段已知磺胺嘧啶等磺胺类药物在酸性环境下其苯环上的氨基 （NH2 ）将被离子化而生成 铵类化合物（ NH3+ ）。后者与亚硝酸钠反应可发生重氮化反应进而生成重氮盐（NN+ ）。该化合物在碱性条件下可与麝香草酚生成橙黄色化合物。在525nm 波长下比色，于不同时间点采集其静其光密度与磺胺
2、嘧啶的浓度成正比。具体反应过程为：并以血药浓度对相应时根据上述原理， 在给受试家兔一次给予一定剂量的磺胺嘧啶后， 脉血样， 采用比色法对各样品中磺胺嘧啶的血药浓度进行定量分析， 间作图，从而获得磺胺嘧啶的静脉给药后的药时曲。四、实验组织运行要求采用集中授课形式。五、实验条件动物 3kg 左右家兔一只药品 20磺胺嘧啶（ sulfadiazine，SD）、7.5三氯醋酸、 0.1 SD 标准液、 0.5亚硝 酸钠、 0.5麝香草酚（用 20NaOH 配制）、 1000u/mL 肝素生理盐水、 3戊 巴比妥钠、蒸馏水。器材 721 分光光度计、离心机、磅秤、手术器械、动脉夹、尼龙插管（或玻璃插管、
3、 硅胶管）、兔手术台、注射器（ 5mL ）及针头、移液器（ 0.01 1mL ）、吸头、试 管、离心管、试管架、玻璃记号笔、药棉、纱布、计算机。六、实验步骤（1）麻醉：全麻或局麻均可。取兔一只（实验前禁食12 小时不禁水） ，记录体重和性别，耳缘静脉注射 3戊巴比妥钠 0.81.0 mL/kg 麻醉，仰位固定于兔手术台上。2）手术：颈部手术区剪毛，切皮约 6cm 左右，钝性分离皮下组织和肌肉，气管插管，分 离出颈总动脉约 23 cm 左右，在其下穿两根细线，结扎远心端，保留近心端。3）耳缘静脉注射 1000u/mL 肝素 1 mL/kg 。4）插管：用动脉夹夹住动脉近心端，再于两线中间的一段动
4、脉上剪一“V”型切口，插入尼龙管，用线结扎牢固，以备取血用。5）取血：打开动脉夹放取空白血样0.4mL ，分别放入 1 号管（空白管）和 2号管（标准管）各 0.2mL 摇匀静置。而后腹腔注射 20SD 1.5mL/kg ，分别于注射后 5、15、30、 45、75 、120、180 、240、300 分钟时由动脉取血 0.2mL 加到含有 7.5三氯醋酸 2.7mL 的试管中摇匀。标准管加入 0.1SD 标准液 0.1mL ，其余各管加蒸馏水 0.1mL 摇匀。6）显色：将上述各管离心 5 分钟（ 1500-2000 转/分），取上清液 1.5mL ，加 0.5亚硝酸 钠 0.5mL ，摇匀
5、后，再加入 0.5 麝香草酚 1mL 后溶液为橙色。7）测定：于分光光度计在 525nm 波长下测定各样品管的光密度值。表 1 磺胺类药物血药浓度测定的步骤试管空白管时间（min）07.5 三氯醋酸 （mL）2.7血液（ mL）0.2蒸馏水（mL）0.10.5 亚硝酸钠 （mL）0.50.5 麝香草酚 （mL）1光密度0浓度 g/mL标准管标准液02.70.20.1充分摇0.5116.7给药后12.70.20.1匀后离0.51心 5 分，充分32.70.20.1取上清0.5摇匀152.70.20.1液 1.50.51152.70.20.10.51mL302.70.20.10.51452.70.
6、20.10.51602.70.20.10.51902.70.20.10.511202.70.20.10.51（8）计算血中药物浓度：根据同一种溶液浓度与光密度成正比的原理，可用空白血标准管浓度及其光密度值求算出样品管的磺胺药物浓度。公式如下：样品管光密度 （OD ）标准管光密度 （OD'）样品管浓度 （g/ mL）标准管浓度 （ g/ mL）样品管浓度 （ g/ ml）样品管光密度 （OD）×标准管浓度标准管光密度 （OD'）血药浓度 （g/ mL）= 样品管浓度 ×稀释倍数（ 30）【结果与处理】 将所得数据填入表 1 中，并用计算机软件绘制药物的药时曲线。七、实验报告实验报告内容应包括： 【实验目的】 、【实验原理】 、【器材】、【药品与试剂】 、【动物】、【实 验方法】、【结果】及【讨论】等部分。讨论】要对实验中遇到的问题进行描述并【结果】要对所得实验数据进行统计分析； 分析原因。