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1、实验八 绒毛细胞染色体标本的制备与观察 实验目的 1. 初步掌握绒毛细胞染色体标本的制备与观察。2. 了解人类染色体的形态和计数分析方法。 实验原理 人类细胞染色体标本制备常用的材料为外周血淋巴细胞、培养的体细胞和骨髓细胞等。而 绒毛组织细胞具有活跃的增殖力， 取材后不需经过体外培养的无菌处理， 此时用有丝分裂阻断剂 秋水仙素处理细胞，可使正在分裂的细胞停止在中期，再经低渗、 固定等处理， 便可得到较多可 供分析的中期染色体。绒毛细胞是在受精卵分裂胚胎发育过程中形成的，其遗传物质与胎儿相同。在孕4555天绒毛细胞具有较高的分裂活性，可用其自然分裂细胞制备染色体标本，具有早期、快速、简便和准确的
2、优点。适用于临床的细胞遗传学的产前诊断研究等。 实验用品 1. 材料：绒毛组织。5ml 离心管、吸管、试管0.075mol/l kcl 溶液、无2. 器材：显微镜、离心机、恒温水浴箱、眼科镊子、眼科剪子、 架、玻璃笔、载玻片、吸水纸。3. 试剂：培养皿、rpmi-1640 培养液、秋水仙素（2卩g /ml ）、菌生理盐水、柠檬酸钠、60%冰乙酸、甲醇：冰乙酸（3 : 1）固定液、giemsa染液、磷酸缓冲液ph6.8 ) 实验内容与方法 1. 秋水仙素处理：选取分芽多、末端粗钝的绒毛枝 23枝剪下、用生理盐水漂洗、再将绒毛枝放入含有终浓度2卩g/ml秋水仙素的5ml rpmi-1640培养液或
3、hanks液的离心管中、37 C温育处理约 30 分钟。2. 吸去培养液，加入 37C预热的1%柠檬酸钠和0.075mol/l kcl （1 : 1）低渗液4ml 37 C 下处理 1015分钟。3. 加入 1ml 固定液混匀后吸去上清液。4. 加入 3ml 固定液固定 30 分钟，（甲醇:冰乙酸 3: 1）。5. 吸去上清液，加 60%冰乙酸 1ml 解离 1.52分钟再加入 3ml 甲醇，处理 2分钟，吸出 绒毛枝。6. 以 800r/min 离心 5 分钟，弃上清液。7. 加 5 滴固定液，混匀制成细胞悬液，冰湿片滴片、干燥。8. giemsa 染色68分钟。9. 镜下观察25个分裂相并进行染色体计数及性别鉴定。 注意事项 1. 绒毛组织取出后应立即放入固定液中。1）2. 观察标本时，应选择成株的绒毛丝或分散的合体细胞进行检查。3. 可记数细胞应是胞浆、 胞核着色清晰， 如标本胞浆不透明或胞核肿胀， 可能是由于：酒精浓度不够，脱水不彻底；（2）酸化、碱化不当；（ 3）细胞本身已退变。4. 胞核染色不正常，而呈蓝色或黑色，则是染色时间过长。5. 如果胞浆着色不鲜艳，可能是染液配制不合适。 实验报告与思考题 绘图绘制染色体核型图。思考题1. 总结人类染色体形态结构特点。2. 实验结果如何，有何不足？分析原因。图 8-1 人绒毛细胞染色体