丙泊酚对匹鲁卡品诱发大鼠癫痫持续状态的抑制作用及相关机制研究.docx

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1、丙泊酚对匹鲁卡品诱发大鼠癫痫持续状态的抑制作用及相关机制研究第一局部: 丙泊酚对匹鲁卡品诱发大鼠癫痫持续状态的治疗作用目的建立可 逆性胆碱酯酶抑制剂匹鲁卡品诱发大鼠癫痫持续状态 Status Epilepticus,SE 模型,观察不同剂量静脉麻醉药丙泊酚在癫痫发作后30 min给药对大鼠SE的影响。方法在大鼠上建立氯化锂3mmol/kg-匹鲁卡品30mg/kg诱发SE模型， 以行为学、脑电图 electroencephalogram,EEG 上典型癫痫波的变化、动物 24h存活数及皮层和海马的病理变化为观察指标，评价比较不同剂量mg/kg丙 泊酚 12.5、25、50、75及 100 , 安

2、定 10、东莨菪碱 10及 MK-8012 对SE的抑制作用。结果1.氯化锂3mmol/kg-匹鲁卡品30mg/kg可诱发SE,给予匹鲁卡品 后 15min, 动物开始出现行动缓慢、呆滞 , 面部抽搐、点头样运动、尾巴僵直并翘 尾,20-25min后开始出现四肢强直性抽搐，最后开展成为以持续性全身性强直发 作为特征的SE,在EEGk可观察到SE所特有的、持续的高幅高频惊厥波。2.行 为学及EEG吉果显示,丙泊酚50100 mg/kg对SE具确切治疗效果,并可显著 降低SE动物死亡数PV 0.05 。3.SE 出现后 30min i.p.东莨菪碱10mg/kg、MK-801 2mg/kg及安定1

3、0mg/kg,除东莨菪碱外,MK-801及安定对SE亦有较为明显抑制作用,其抗惊 效果与丙泊酚中、高剂量组相当。4.HE染色结果显示,SE反复发作24h后皮层和 海马CA1区细胞数明显减少，有的细胞肿胀破裂，轮廓模糊界限不清，排列紊乱， 而海马其它各区变化不甚明显。丙泊酚组、DZP组和MK-801组细胞数较SE组明显增多PV 0.05 。结论1. 氯化锂3mmol/kg-匹鲁卡品30mg/kg可诱发典型的SE状态,SE发作后24h 皮层和海马可见明显的细胞损伤。2.丙泊酚对氯化锂-匹鲁卡品诱发的SE具有确切的治疗效果，可明显改善EEG变化，增加出现SE动物24 h存活数，改善皮层和海马细胞的损

4、伤程度，提示 丙泊酚在SE治疗上具潜在应用价值。第二局部：丙泊酚对致死剂量NMD肿毒小 鼠的保护作用目的：建立N-甲基-D-天冬氨酸N-methyl-D-aspartate,NMDA 致 死模型,观察丙泊酚对致死剂量NMD肿毒小鼠的保护作用。方法：给予致死剂量NMD前10min,腹腔注射不同剂量mg/kg丙泊酚12.5、25、50、75及100,NMDAS体拮抗剂MK-801 2 mg/kg 及等容积脂肪乳丙泊酚溶剂，以中毒动物存活率为评价指标，观察上述药物对致死剂量NMD肿毒小 鼠的保护作用。结果：腹腔注射NMDA 175mg/kc可导致小鼠全身惊厥发作及快速 死亡；丙泊酚12.5,25,5

5、0,75 及100mg/kg可剂量依赖性抑制 NMD啟死效应， 显著降低中毒小鼠死亡率；其作用类似于NMDA!体拮抗剂MK801存活率100%; 而脂肪乳对致死剂量NMD冲毒小鼠无保护作用。结论：丙泊酚12.5100 mg/kg可剂量依赖性的对抗NMD诱发的致死效应;丙泊酚可能存在对NMDAe体的直接或间接拮抗作用。第三局部：丙泊酚对匹 鲁卡品诱发SE大鼠皮层和海马NMD受体亚型表达的影响目的在大鼠上建立可逆 性胆碱酯酶抑制剂匹鲁卡品诱发 SE模型,观察丙泊酚对SE大鼠皮层和海马NMDA 受体亚型2A,2B表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为6组,分别为空白对照组BLK组、SE组SE组、丙泊

6、酚50mg/kg组PPF组、安定10mg/kg组DZP组、东莨菪碱10mg/kg 组SCOPS及MK-801 2mg/kg组MK-801组。除BLK组外，其他各组大鼠均给予氯化锂3mmol/kg及匹鲁卡品30mg/kg,建立匹鲁卡品诱发SE模型。待SE出现后30min,各治疗组动物分别腹腔注射丙泊酚等治疗药物及等容量 生理盐水BLK组和SE组。24h后,将存活动物分两批处理,每组取3只大鼠进 行心脏灌注后取大脑行免疫组化分析 ; 剩余大鼠每组取 4只断头取脑 , 快速剥 离皮层和海马进行蛋白免疫印迹 Western Blot 分析。采用免疫组化和 Western Blot法观察丙泊酚对SE大鼠

7、发作24h后皮层和海马NMD受体2A、2B亚型表达的影响。结果1.SE反复发作后24h,与BLK组相比,SE 组大鼠皮层和海马NMDAe体2A、2B亚型阳性细胞数显著增加Pv 0.05 ;2.与SE组相比，丙泊酚50mg/kg给药组动物皮层和海马 NMD受体2B亚型表达 显著降低 Pv0.05。免疫组化结果发现，在海马区NR2B亚型表达显著降低，阳性细胞数显著减少Pv 0.05;而NMD受体2A亚型在各区表达均无明显变化。3.MK-801 2mg/kg 可显著降低皮层和海马NMD受体2A、2B亚型的表达，与SE组相比有显著统计学 差异Pv 0.05 ，但安定10mg/kg和东莨菪碱10mg/k

8、g对NMD受体2A 和2B亚型无明显影响。结论1.SE出现后24h,皮层和海马NMD受体2A和2B亚型表达显著上调。2.丙泊酚可显著抑制皮层和海马 NMD受体2B亚型表达,但对NMD受体2A亚型 表达无明显影响，其作用与特异性NMDAe体拮抗剂MK-801类似，但与GABAS体 冲动剂安定及抗胆碱药东莨菪碱存在显著差异 ;3. 丙泊酚对拟胆碱药匹鲁卡品诱 发SE的抑制作用可能与其下调NMDAE体2B亚型的表达有关。第四局部：丙泊酚对匹鲁卡品诱发SE大鼠大脑皮层和海马GABA_A 受体a ₁亚型表达的影响目

9、的建立可逆性胆碱酯酶抑制剂匹鲁卡品 诱发大鼠SE模型,观察丙泊酚对匹鲁卡品诱发 SE大鼠皮层和海马GABA受体a ₁亚型表达的影响。方法50只SD大鼠随机分为5组,包括空白对照 组BLK组、SE组SE组、东莨菪碱10mg/kg组SCOP&、丙泊酚50mg/kg 组PPF组及安定10mg/kg组DZP组。除BLK组外,其他各组动物均腹腔注射氯化锂3mmol/kg-匹鲁卡品30mg/kg,建立匹鲁卡品诱发SE模型。待SE出现后30min,分别给予丙泊酚50mg/kg、东莨菪碱10mg/kg及安定10mg/kg等不同治疗药物，空白对照组和模型 组

10、给予等量的生理盐水。24h后,取3只大鼠进行心脏灌注后取皮层和海马行免疫组化分析 ；剩余大鼠 行蛋白免疫印迹分析 WesternBlot 。采用免疫组化和 Western Blot 法观察丙 泊酚对SE大鼠发作24h后皮层和海马 GABA<sub>A</sub受体a ₁亚 型表达的影响。结果1.SE出现后24h,皮层和海马 GABA<sub>A</sub受体a ₁亚型表达均显著降低，与BLK组相比有显著差异PV 0.05 ;2.丙泊酚50mg/kg 可显著上淘气层和海

11、马 GABA<sub>A</sub受体a ₁亚型表达，与SE 组相比有显著差异Pv 0.05;其作用类似于GABAS体冲动剂安定10mg/kg, 而东莨菪碱10mg/kg对GABA<sub>A</sub受体a ₁亚型无明显影 响。结论1.SE出现后24h,GABA<sub>A</sub受体a ₁亚型表达下调。2.丙泊酚可显著上调 GABA<sub>A</sub受体a <sub>

12、;1</sub>亚型表达。第五局部:丙泊酚治疗癫痫持续状态的抗氧化机理研究目的在大鼠上建立可逆性胆碱酯酶抑制剂匹鲁卡品诱发 SE模型,观察丙泊酚对SE大鼠血清、皮层和海马超 氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽GSH和丙二醛MDA水平的影响。方法72只SD大鼠随机分为6组,包括空白对照组BLK组、SE组SE组、 丙泊酚50mg/kg组PPF组、安定10mg/kg组DZP组、东莨菪碱10mg/kg组 SCOP组及MK-801 2mg/kg组MK-801组。待SE出现后30min,分别给予 不同药物及等容积生理盐水。采用分光光度法测定给药后 2h 及 24h 动物血清、海马及皮层内 SOD、

13、GSH 及MDAS。结果1.SE发作后30min给予各实验用药BLK组和SE组给予等容量 的生理盐水，给药后2h,SE组血清、皮层及海马内SOD及 MD冰平显著升高,GSH 含量显著降低，与BLK组相比有显著差异PV 0.01 ;2.与SE动物相比，丙泊酚 给药组动物SOD无明显改变，但GSH可显著升高而MDA含量显著降低Pv 0.01 ; 但安定、东莨菪碱及MK-801给药组动物与SE组动物相比无显著改变。3.给药后24h,血清、皮层及海马内SOD MDAi GSH水平与给药后2h存在 类似变化，与BLK组相比具显著统计学意义Pv 0.01 ;4.给药后24h,与模型组 动物相比，丙泊酚给药组动物血清及皮层、海马内GSH显著增高,MDA显著降低P v 0.01 ,但SOD含量未见显著改变；安定、东莨菪碱和MK-801给药组动物血清 及皮层、海马内SOD GSH及 MDA含量与模型组相比未见显著改变。结论 1.SE 出现后2及24h,SE大鼠血清、皮层和海马SOD舌性显著增加、GSH&著降低、 MDAK著升高。2.在给药后2h及24h,丙泊酚50mg/kg均可显著升高SE大鼠血清、大脑皮 层和海马GSH水平，降低MDA含量,提示丙泊酚对提升SE动物抗氧化应激水平有定促进作用