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1、学习资料第十一章 荧光分析法、选择题B 、磷光1荧光分析法是通过测定 ( ) 而达到对物质的定性或定量分析。C、发射光A、激发光D、散射光2下面 ()分析方法不属于分子发射光谱法。A、紫外一可见分光光度法C、磷光分析法B 、荧光分析法D、化学发光分析法仅供学习与参考3荧光发射光谱含有 ()个发射带。D 、不一定A、 1B、 2C、 34下列关于荧光光谱的叙述错误的是()A、荧光光谱的形状与激发光的波长无关B、荧光光谱与激发光谱一般是对称镜像C、荧光光谱属于分子的受激发射光谱D、荧光激发射光谱与紫外吸收光谱重合5下列叙述错误的是()A、荧光光谱的最长波长和激发光谱的最长波长相对应B、荧光光谱的最
2、短波长和激发光谱的最长波长相对应C、荧光光谱的形状与激发光波长无关D、荧光波长大于激发光波长6激发态分子经过振动弛豫回到第一电子激发态的最低振动能级后，经系间窜越转移至激 发三重态， 再经振动弛豫降至三重态的最低振动能级， 然后发出光辐射跃迁至基态的各个振 动能级，这种光辐射称为 ()。A、分子荧光B、分子磷光C、瑞利散射光D、拉曼散射光7关于振动弛豫，下列叙述中错误的是( )。A、振动弛豫只能在同一电子能级内进行B 、振动弛豫属于无辐射跃迁C、通过振动弛豫可使处于不同电子激发态的分子均返回到第一电子激发态的最低振动 能级D、振动弛豫是产生 Stokes位移的原因之一 8荧光寿命指的是 ()。
3、A、从激发光开始照射到发射荧光的时间B、受激分子从第一电子激发态的最低振动能级返回到基态所需的时间C、从除去激发光光源至分子的荧光熄灭所需的时间D、 除去激发光源后，分子的荧光强度降低到激发时最大荧光强度的1/e所需的时间9关于荧光效率，下面叙述不正确的是()A、 具有长共轭的n ；跃迁的物质具有较大的荧光效率B、分子的刚性和共平面性越大，荧光效率越大C、顺式异构体的荧光效率大于反式异构体D、共轭体系上的取代基不同，对荧光效率的影响不同10采用下列 ()措施可使物质的荧光效率提高。A、适当降低溶液浓度B、降低溶剂极性C、加入重氮化合物D、剧烈搅拌11下列化合物中，哪种物质的荧光效率最大()A、
4、苯B、联苯C、萘D、蒽12萘在下列 ()溶剂中的荧光强度最强。A、 1一氯丙烷B、 1一溴丙烷C、 1一碘丙烷D、 1， 2一二氯丙烷13苯胺在 ()条件下荧光强度最强。A、 pH=1 B、 pH=3 C、 pH=10D、 pH=1314荧光素钠的乙醇溶液在 ()条件下荧光强度最强。A、OCB、-10CC、-20CD、-30C15一般要在与入射光垂直的方向上观测荧光强度，这是由于( )。A、只有在与入射光垂直的方向上才有荧光B、荧光是向各个方向发射的，可减小透射光的影响C、荧光强度比透射光强度大D、荧光发射波长比透射光波长长16.荧光法测定硫酸奎宁时，当激发光波长为320nm时，Raman光波
5、长为360nm;当激发光波长为350nm时，Raman光波长为400nm。若最大发射波长为 448nm，则进行荧光测定时应选 择 ( )。A、V320m，电m=400nmB、入=320nm , ex入=360nm emC、入=350nm,入=448nmD、入=320nm ,入=448nmexemexem17.荧光分光光度计常用的光源是()。A、空心阴极灯B 、氙灯C、氘灯D 、硅碳棒18. 用波长为320nm的入射光激发硫酸奎宁的稀硫酸溶液时，将产生320nm的()。A、荧光B、磷光C、Rayleigh光D、Raman光19. 激发光波长和强度固定后，荧光强度与荧光波长的关系曲线称为()A、吸
6、收曲线B、激发光谱C、荧光光谱D、工作曲线20. 采用激光作为荧光光度计的光源，其优点是()A、可以有效消除散射光对荧光测定的干扰B、可以提高荧光法的选择性C、可以提高荧光法的灵敏度D、可以避免荧光熄灭现象的产生二、填空1 .荧光光谱的特征是 、 和 。2. 激发态分子经过 回到第一电子激发态的最低振动能级后， 以 发射光量子跃迁回到基态的任一振动能级，这时所发射的光量子称为荧光。3. 荧光物质的 和是鉴定物质的依据，也是定量测定时最灵敏的条件。4. 荧光物质的激发光谱可能含有 吸收带，但其发射光谱却只含有 吸收带。5. 能够发射荧光的物质应具备的两个条件是：物质分子有强的 和 。 、 具有较
7、高的荧光效率三、简答题1哪些因素会影响荧光波长及强度 ?2在什么条件下荧光强度和荧光物质的浓度成正比?3分子结构与荧光的关系。4为什么在室温下溶液很少呈现磷光?在什么条件下才能检测到磷光 ?5为什么荧光分析法的灵敏度高于紫外一可见分光光度法?6哪些物质容易发生电子由单线激发态到三线激发态的体系间跨越？ 7荧光和磷光在产生机制上有何不同？ 8如何测定激发光谱和荧光光谱？四、计算题1用荧光法测定复方炔诺酮片中炔雌醇的含量时，取本品20 片 （每片含炔诺酮应为0. 540. 66mg，含炔雌醇应为 31. 538. 5卩g）研细溶于无水乙醇中，稀释至250mL ,过滤，取滤液5mL ,稀释至IOmL
8、，在激发波长285nm和发射波长307nm处测定荧光强度。 如炔雌醇对照品的乙醇溶液（1. 4g/mL）在同样测定条件下荧光计读数为65，则合格片的荧光计读数应在什么范围 ?2. 用荧光分析法测定食品中维生素B2的含量：称取2. 00g食品，用IOmL氯仿萃取（萃取率100%）,取上清液2. 00mL，再用氯仿稀释为IOmL。维生素B2氯仿标准溶液浓 度为0. 100卩/mL。测得空白溶液、标准溶液和样品溶液的荧光强度分别为：Fo=1. 5,Fs=69 . 5, Fx=61 . 5，求该食品中维生素 B2的含量。（卩/g）参考答案一、 选择题I. C 2. A 3. A 4. D 5. A 6
9、. B 7. C 8. D 9. C 10. AII. D 12. D 13. C 14. D 15. B 16. D 17. B 18. C 19. C 20. C二、填空题1 .荧光发射波长总是大于激发光波长，荧光光谱形状与激发光波长无关，荧光光谱与激发 光谱成镜像关系2. 振动弛豫，辐射形式3. 最大激发波长，最大发射波长4. 几个，一个5. 紫外一可见吸收，一定的荧光效率，长共轭分子、刚性平面结构分子三、简答题1 .影响荧光波长及强度的因素有温度、溶剂、酸度、荧光熄灭剂、散射光。2.在低浓度时荧光强度和荧光物质的浓度成正比。3 .分子结构与荧光有如下关系：长共轭分子具有沢tjT跃迁的较
10、强紫外吸收，沢电子共轭程度越大， 荧光强度越大， 而荧光波长也长移。 刚性平面结构分子具有较高的荧光效率， 在同样的长共轭分子中， 分子的刚性和共平面越大， 荧光效率越大， 并且荧光波长产生长移。 共轭体系上的取代基对荧光光谱和荧光强度也有很大影响。4.由于荧光物质分子与溶剂分子间相互碰撞等因素的影响，处于激发三重态的分子常常通过无辐射过程失活回到基态，因此在室温下很少呈现磷光，只有通过冷冻或固定化而减少外转换才能检测到磷光。5 荧光分析法中与浓度相关的参数是荧光物质发射的荧光强度，测量的方式是在入射光的 直角方向，即在黑暗背景下检测所发射光的强度信号，因此可采用增强入射光强度或增大检测信号的
11、放大倍数来提高灵敏度。在分光光度法中与浓度相关的参数是吸光度，而吸光度 A=lglo/I,如果增大入射光强度，相应也增大了透射光强度，所以其比值不会变化，如果增大 检测器的放大倍数，检测到的入射光强度和透射光强度也同时增大，同样不能提高其比值， 也就不能达到提高灵敏度的目的。所以，荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高。6. 7 &略四、计算题1.解 测定液中炔雌醇的浓度范围在31.5 g 20 5mL 38.5 g 20 5mL 250mL 10mL 250mL 10mL 即1.261.54 卩/gmL之间为合格。1 . 4卩/mL的对照品溶液的荧光计读数为65FxFscx，得合格片的荧光计读数应在Cs58. 571. 5之间。2解Fs-Fo=KCs，Fx-F0 = K Cx将 Fo=1 . 5, Fs=69 . 5, Fx=61 . 5, Cs=0. 100 卩/mL 代入方程中解得Cx=0 . 088 口？ mL食品中维生素B2的含量=Cxx10.02.0010.02.00卩 g/g=22卩g/g