弧菌显色培养基.docx

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1、弧菌显色培养基弧菌显色培养基(ChromogenicVibrioAgar)用途:用于水产品及食物中毒样品中弧菌特别是副溶血性弧菌的分离和鉴定。(GB/T4789.7-2008,SN0173-2010 和 SN1022-2010)原理:蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;蔗糖为可 发酵的糖类;抑菌剂抑制大部分非弧菌细菌,氯化钠可维持均衡的渗 透压;琼脂是培养基的凝固剂;混合色素与副溶血性弧菌、霍乱弧菌 和创伤弧菌所对应的酶发生特异性反应,水解底物,释放出显色基团, 在淡黄色平板上产生品红色菌落(副溶血性弧菌)和绿-蓝绿色的菌落 (霍乱弧菌和创伤弧菌)。配方(每升):蛋白胨18.8g酵

2、母膏粉5g蔗糖20g氯化钠10g抑菌剂1.5g琼脂13g混合色素3g最终 pH9.0 ±0.2使用方法1、取瓶内干粉71.3克,用1000ml蒸馏水或纯水溶解,可按比 例扩增或缩小。搅拌加热煮沸至完全溶解,不需高压灭菌,冷至约50 C,倾注灭菌平皿。2、以无菌操作取检样25g (mL),加入3%氯化钠碱性蛋白胨 水225mL,用旋转刀片式均质器以8000r/min 均质1min ,或拍击 式均质器拍击2min ,或用Pulsifier脉冲式样品处理器均质30秒, 制备成1:10的均匀稀释液。如无均质器,则将样品放入无菌乳钵中 磨碎,然后放在500mL的灭菌容器内,加225mL3%氯化

3、钠碱性蛋 白胨水,并充分振荡。3、增菌:将上述1:10稀释液于36 ±1 C培养818h。4、分离在增菌液中用接种环取一环,于弧菌显色平板上划线分离,于36 ±C 培养 18 24h。5、通过验证试验进一步确认假定性副溶血性弧菌和其他弧菌, 如氧化酶、革兰氏染色、生化鉴定等。质量控制:本品倾注平皿后呈淡黄色,小时生长情况如下表:量(cfu/平板)生长情况菌落色泽300良好好红色F列菌株接种后 36 ±1 C培养18-24质控菌株接种副溶血性弧菌ATCC17802霍乱弧菌VBO非01溶藻弧菌ATCC3378730-30 -300良好良 品 绿-蓝绿色无色 大肠埃希氏菌ATCC259225000不长注:最后的鉴定须做补充试验。外观:脱水培养基:浅黄色具流动性粉未。制备好平板:淡黄色的胶。储存条件和保质期:脱水培养基:10-30 C,保质期二年。制备好平板:2-8 C,最多保存两周。参考文献:1.GB/T4789.7-2008中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验2.SN0173-2010 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口 食品中副溶血性弧菌检验3.SN1022-2010 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口 食品中霍乱弧菌检验5

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