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1、第九章细菌的培养与分离技术本章内容一、基本条件二、细菌的接种与分离技术三、细菌培养的方法四、细菌的生长现象五、细菌L 型的检查基本条件（一）细菌实验室：生物安全柜。（二）无菌实验室（三）基本设备和器具：温箱、 CO2培养箱、厌氧培养设备；显微镜；高压蒸汽灭菌器、干烤箱；接种环和接种针；火焰灯或酒精灯；平皿、试管、吸管等玻璃器皿，以及离心机、天平等。细菌的接种与分离技术平板划线分离法：分散生长，各自形成菌落。连续划线法：杂菌不多。分区划线法：杂菌多。斜面接种法：单个菌落纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。液体接种法：多用于一些液体生化试验管的接种。穿刺接种法：半固体培养基，接种针。倾注平板法：
2、测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数。 将标本适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，再倾入已溶化并冷却至 45左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。涂布接种法：常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。细菌的培养方法第 1 页培养条件：根据临床初步诊断及待检细菌的种类，选用不同环境条件进行培养。细菌的生长现象分离培养基上菌落的生长现象观察菌落的大小、形状、突起、边缘、颜色、表面、透明度等。血琼脂上的溶血： 溶血：菌落周围出现绿色环状，红细胞外形完整无缺。 溶血：菌落周围形成一个完全清晰透明的环，红细胞溶解。 溶血：没有溶血，红细胞无溶解。双环：菌落周围完全溶解的晕圈外有一个
3、部分溶血的第二圆圈。气味液体培养基中的生长现象肉汤培养基的混浊度、沉淀、菌膜，气味和色素等。细菌数量达106 107CFU/ml，培养肉汤才见混浊。血液培养的检查和传代培养：肉眼观察其生长现象，如溶血、产生气体或混浊度等。半固体培养基中细菌的动力有动力的细菌除了在穿刺接种的穿刺线上生长外，在穿刺线的两侧均可见混浊或细菌生长的小菌落。细菌 L 型的检查1. 标本采集： 无杂菌污染的组织或体液标本应加 20%蔗糖无菌溶液保持高渗； 血液标本应接种高渗肉汤增菌培养。2. 分离培养：标本接种到高渗肉汤增菌培养1 7d，然后转种 L 型平板和血平板 37培养 27d。3. 生长现象： 常有油煎蛋样菌落（
4、典型 L 型菌落）、 颗粒型菌落（ G型）和丝状菌落（ F 型）三种类型。平板分区划线的目的A. 使细菌获得充分的营养B. 减少细菌间的相互抑制C. 获得足够的单个菌落D. 利于细菌的大量生长E. 加快细菌的生长速度正确答案 C第 2 页答案解析平板划线分离法：分散生长，各自形成菌落。连续划线法：杂菌不多。分区划线法：杂菌多。在临床细菌学检验中，含菌量较多的标本如粪便，接种方法适宜用A. 平板倾注培养法B. 平板连续划线法C. 平板分区划线法D. 斜面接种法E. 半固体穿刺接种法正确答案 C答案解析对于含菌量较多的标本适宜用平板分区划线法。关于倾注平板法，错误的是A. 可用于尿液、牛乳等标本的
5、计数B. 所用培养基预先灭菌后溶化C. 先取一定量标本加入无菌平皿内，再加入培养基混匀D. 先取一定量标本与培养基混匀后，再倒入无菌平皿内E. 培养基温度以 45左右为宜正确答案D答案解析倾注平板法应先取一定量标本加入无菌平皿内，再加入培养基混匀。不属于细菌形态学观察的是A. 平板分区划线观察单个菌落B. 革兰染色观察细菌染色性C. 鞭毛染色观察细菌的动力D. 光镜观察细菌E. 暗视野显微镜观察细菌动力正确答案A答案解析平板分区划线观察单个菌落属于细菌生长现象，不是细菌形态学。平板划线分离细菌成功的标志是A. 区和区不相连B. 有明显的三区划线C. 培养出单个菌落D. 不能划破培养基E. 不能有污染菌生长正确答案C答案解析平板划线分离细菌成功的标志是培养出单个菌落。观察细菌动力最常使用A. 液体培养基B. 半固体培养基C. 固体平板培养基第 3 页D. 固体斜面培养基E. 厌氧培养基正确答案 B答案解析观察细菌动力最常使用半固体培养基。第 4 页