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1、 导读：就爱阅读网友为您分享以下“29.临床试验资料综述的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对92to 的支持!一临床文献与试验总结 1、临床文献总结 采用大量关于四君子汤的临床文献，包括药理作用及其作用机制，临床应用的大量实例资料。为说明四君子护康颗粒的疗效作出的理论依据。 2、临床试验总结 2.1生物药剂学研究 1仪器与材料 11 仪器 HL-2型恒流蠕动泵(上海沪西生化仪器厂)；LCIOAT VP高效液相色谱仪(岛津公司)；SPD10AVP紫外检测器(岛津公司)；XW-80A型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；Sartorius电子天平(北京赛多利斯天平)；水浴摇床(江苏国胜仪器厂)。 12
2、药品和试剂 PNS(自制。Rgl和Rbl的质量分数分别为2620和3204)；四君子护康颗粒醇提物(自制，四君子护康颗粒酮A的质量分数为45)；冰片(广州化学试剂厂)；Rgl和Rbl标准品(中国药品生物制品检定所)；乙腈(色谱纯，山东禹王实业)；肠灌流液(K·R液，自制)；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 13实验动物 SD大鼠，雄性，体重200240 g，中国药科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(苏)20070001。 2方法 21 Rgl和Rbl含量测定方法的建立 211 色谱条件 色谱柱：Shim·pack VPODS色谱柱(46 mm×150
3、 nln，5 Ixm)；流动相：乙腈一0056磷酸水溶液(25：75，用于Rgl；35：65，用于Rbl)；流速：l mL·min；进样量：20 ixL；柱温：28；检测器：SPD一10A VP紫外检测器；检测波长：204 nmo 212标准品储藏液的配制 分别取枯燥至衡重的Rgl和Rbl对照品各lO 1119，精密称定，甲醇溶解，并定容于10 mL容量瓶中，配得质量浓度为1 g·L一的混合标准品储藏液，密闭，备用。 213标准曲线的制备精密吸取Rgl和Rbl混合标准品贮备液适量，用甲醇(或K-R液)稀释成不同质量浓度的系列标准品溶液，按ml211ml项下色谱条件，进样，记
4、录色谱图。以Rgl和Rbl质量浓度(C，mg·L1)对峰面积(A)进行线性回归，求各标准品的标准曲线方程。 214精密度试验取高、中、低3个质量浓度的标准品溶液，于1天内重复进样测定5次，并分别于第l、3、5天各进样测定1次，计算峰面积的RSD，考 察日内及日间精密度。 215 回收率试验精密吸取标准品储藏液适量，用甲醇(或K-R液)稀释成高、中、低3个质量浓度的标准品溶液，进样，记录色谱图。根据标准曲线方程，计算回收率。 22四君子汤中Rgl和Rbl的胃肠道稳定性研究取0365 g·mL。1 盐酸9 mL用蒸馏水稀释至1 L，参加胃蛋白酶使其质量分数为1，即得人工胃液。取
5、KH2PO。68 g，加水500 mL使溶解，用01tool·LNaOH溶液调节pH至68；另取胰酶10 g，加水适量溶解；将两液混合，加水稀释至l 000 mL，即得人工肠液。将适量PNS单方及四君子颗粒剂(PNS、四君子护康颗粒醇提物和冰片按复方四君子护康颗粒方配伍)分别参加人工胃液(必要时另加适量吐温80增溶)或人工肠液中，使PNS质量浓度为200 mg·L，37水浴温孵，于0、10、30、60、120、180分钟分别取样05 mE(人工胃液取样中参加适量pH 68的磷酸盐缓冲液，以终止反响)，冰水浴冷却，高速离心，取上清液进样，测定Rgl和Rbl含量。 23四君子汤
6、中R91和Rbl的肠道膜渗透性研究 231 Rgl和Rbl在KR液中的稳定性考察用KR液配制200 mg·L。1 PNS溶液，移取适量置于具塞离心管中，密封，放人37水浴中孵育150分钟，分别取孵育前后的PNS溶液进样，测定Rgl和Rbl的含量。 232硅胶管及肠壁的物理吸附考察 配制200mg·L。1 PNS的K-R溶液，水浴加热至37。剪取清洗后的大鼠小肠段约12 cm，用玻璃棒将黏膜层翻出，将肠段与硅胶管分别置于200 mg·L。1PNS的KR溶液中，37水浴孵育3小时，分别取孵育前后的PNS溶液进样，测定Rgl和Rbl的含量。 233供试液的配制 分别将P
7、NS与冰片、PNS与四君子护康颗粒醇提物、PNS与冰片及四君子护康颗粒醇提物按复方四君子护康颗粒 方比例配伍。称取PNS及上述各配方适量，置于不同容量瓶中，加人适量KR液，超声使溶解完全，继续用K·R液定容至刻度，使PNS质量浓度为200 mg·L，即分别得单方、PNS+冰片二联方、PNS+四君子护康颗粒二联方、四君子颗粒剂供试液。 234大鼠在体单向灌流实验实验前将大鼠禁食12小时以上，自由饮水，腹腔注射02 g·mL叫乌拉坦溶液(12 g·kg以)麻醉，背部固定，保持37体温，延腹中线翻开腹腔3 cm，距幽门1 cm处，取10 CITI的肠段，肠段两
8、端切口后插管并结扎，用预热至37的生理盐水以25 mL·rainml速度将肠内容物冲洗干净，注入空气将生理盐水排空，安装装置。取预热37的供试液50 mL以02 mL·rain。1的速度灌流30分钟，收集流出液并开始计时，每隔20分钟分段收集流出液，精确量取流出液体积和供试液减少的体积数，并将收集的流出液进样，测定Rgl和Rbl的含量。实验共收集5次流出液，实验结束后，用空气排空管道，测量小肠的面积。 235数据分析处理Rgl和Rbl的肠道膜表观渗透系数(P)按以下公式计算：P=Q×In(Ci×QiCii×Qii)A其中：Qi诂和Qii分别为肠
9、道进、出I=1灌流液的体积(mL)，Cii和C分别为肠道进、出口灌流液Rgl和Rbl的浓度(mg·L叫)，Q为灌流速度(mL·s。1)，A为小肠吸收面积(enl2)。根据Grubbs法对每个动物获得的5个P。值进行偶然误差值的取舍，取舍后必须保证至少有3个P。值无显著误差，最终的Pl。值为这几个相近值的平均值。 24 PNS中Rgl和Rbl的脂溶性研究按ml233ml项下方法，取适量PNS及其不同配方，置于不同容量瓶中，参加正辛醇饱和的水溶液溶解，使PNS浓度为200 mg·L一，即分别得单方、PNS+冰片二联方、PNS+四君子护康颗粒二联方、四君子颗粒剂供试液。
10、精密移取供试液2 mL，置于离心管中，参加2 mL水饱和的正辛醇，涡旋3分钟，于37水浴环境中振荡24小时，使分配平衡，取出，静置，待两相分层后，别离水相和油相，将水相于3 000 r·min一离心10分钟。分别取供试液和分配平衡后的水相进样，测定其中Rgl和Rbl的含量C和Cw。按以下公式计算Rgl、Rbl油水分配系数(P)：P=(CCw)cw其中C为分配平衡前水相药物含量，Cw为分配平衡后水相药物含量。 25数据统计分析 数据用面±s表示，差异性比拟采用两样本均数t检验。 3结果 31 Rgl和Rbl的含量测定方法考察 甲醇溶液中Rgl和Rbl的标准曲线方程分别为A=8 9504C一2 58668(r=0999 8。n=6)和A=6 03314C+1 14503(r=0999 9，I=6)，线性范围分别为208936 mg·L叫和290 nag·L；日内(n=5)及日间(n=3)RSD均小于3，精密度良好；平均回收率大于99(n=3)。KR液中Rgl和Rbl的标准曲线方程分别为A=9190.66C-4238.11(r=0.9999n=6)A=6 25291C+58655(r=0999 7，n=6)，线性范围分别为104936mgL和190 mgL；日内(n=5)及日间(n=3)RSD均小于5，精密度良好；平均回收率大于98