《04-02-021茚三酮比色法测定氨基酸态氮的操作步骤(精).doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《04-02-021茚三酮比色法测定氨基酸态氮的操作步骤(精).doc（1页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、天津现代职业技术学院 -1 - 一、茚三酮比色法测定氨基酸态氮的操作步骤 1、 试剂 a） 茚三酮试剂：称取 1.2g 茚三酮，加 l5mL 正丙醇，摇动使其溶解。然后 加入30mL 正丁醇，60mL 乙二醇，混匀。再加入 9mLpH4.5 的乙酸缓冲液，仔 细混匀。保存于棕色瓶中，置于冷凉处。试剂适用期限为 10 do b） 4mol/L pH4.5 乙酸缓冲液：称取 27.2g 乙酸钠（NaAc 3H2O）于烧杯中， 加 80mL 水溶解。在电炉上加热至沸，冷至室温后，用冰乙酸调至 pH 4.5,然后 用煮沸冷却水稀释至 l00mL o c） 氨基酸标准液：准确称取在 8090 C下烘至恒
2、重的亮氨酸 46.8mg 或a 丙氨酸 31.8mg,加 10%异丙醇溶解，并定容至 100mL，混匀。使用时，取此溶 液 5mL，用水稀释至 50mL。即成 5g氮/mL 标准溶液。 d） 10g/L 抗坏血酸溶液（制备液仅用一天）。 2、 测定步骤 标准曲线的绘制：取 7 支具塞试管，分别加入氨基酸标准液 0，0.2，0.4， 0.8, 1.2, 1.6, 2.0mL,各管均加水至 2mL，再加 3mL 茚三酮试剂，0.1mL 10g/L 抗坏血酸溶液，混匀。置沸水浴中加热 15min。取出后在间歇摇动下冷却 15min。 加热时形成的红色茚满酮在冷却和摇动时被空气中氧氧化而褪色， 而茚三
3、酮与氨 基酸形成的蓝紫色化合物变得更加鲜明。以 60%乙醇补充溶液体积至 5mL,摇 匀。于 580nm 波长下测定吸光度。以氨基氮量（卩？为横坐标，吸光度为纵坐 标制绘标准曲线。 样品处理：准确称取新鲜样品 0.5g（或干样品 0.1g）置研钵中，加 5mL10%乙 酸溶液研磨至匀浆，然后用水转移到容量瓶中，并定容至 100mL。摇匀后过滤。 样品测定：吸取 2mL 滤液于具塞试管中，加 3mL 茚三酮试剂，0.1mL 10g/L 抗坏血酸溶液，混匀。置沸水浴中加热 15min,取出后在间歇摇动下冷却 15min。 以 60%乙醇补充溶液体积至 5mL,摇匀，以试剂空白为对照，于 580nm 波长下 测定吸光度。从标准曲线上查出相应的氨基氮含量（ 卩g。