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1、土壤中有机磷的测定实验方案设计土壤中磷知识总结I、土壤中磷的来源及分布： 土壤中的磷素来源于成土矿物、有机物质和含磷 化学肥料。土壤全磷量不能作为当季作物的土壤供磷的水平指标， 但可作为表示 土壤潜在肥力的一项指标。 土壤磷素分为无机形态和有机形态。 无机形态的磷约 占全磷的50%90%,主要包括磷酸钙类化合物（Ca-P）、磷酸铁类化合物（Fe-P）、磷酸铝类化合物（AI-P ）和表面为氧化铁胶膜所封闭的闭蓄态磷 （O-P）。 风化程度较高的土壤，如红壤以 O-P和Fe-P为主，风化程度较低的土壤以 Ca-P 和 AI-P 为主。有机形态的磷约占全磷 10%50%,主要以磷脂、植素、核酸和 核
2、蛋白形式存在。 土壤有机磷含量与土壤有机质含量密切相关。 土壤有效磷是指 当季作物所能吸收的磷。 土壤中磷移动性很小。 作物吸收的磷主要是土壤溶液中 的 H2PO- 4和 HPO2 4-。U、磷的营养功能：1、磷是植物体内重要化合物的组成元素；2、磷能加强光合 作用和碳水化合物的合成与运转； 3、促进氮素代谢； 4、磷能促进脂肪代谢； 5、 提高作物对外界环境的适应性川、作物磷素营养失调的症状缺磷时，各种代谢过程受到抑制，植株生长迟缓、矮小、瘦弱、直立、 根系不发达，成熟延迟、籽实细小、植株叶小、叶色暗绿或灰绿、缺乏光泽，主 要是细胞发育不良致使叶绿素密度相对提高，同时，Fe的吸收间接地促进叶
3、绿素合成，使叶色暗， 严重缺磷时， 在不少作物茎叶上明显地呈现紫红色的条纹或 斑点（花青苷） 甚至叶片枯死脱落， 症状一般从基部老叶开始。 逐渐向上部发展。缺磷 造成玉米果穗秃顶，油菜脱荚，棉花和果树落蕾、落花，甘薯及马铃薯薯块变 小，耐贮性变差。 磷素过剩 ，谷类无效分蘖，秕粒增加，叶肥厚而密，植株早衰。由于 磷过多，而引起的病症，通常以缺 Zn、Fe、 Mg 等的失绿症表现出来。W土壤中磷的测定方法：测定土壤速效磷的方法选择，酸性土壤一般采用盐酸氟 化铵或氢氧化钠一草酸钠法来提取，石灰性土壤或中性土壤采用碳酸氢钠来提 取。用 NaHCO 3 溶液 （pH8.5） 提取土壤速效磷，在石灰性土
4、壤中提取液中的 HCO 3 - 可和土壤溶液中的 Ca2+ 形成 CaCO 3 沉淀，从而降低了 Ca 2+ 的活度 而使某些活性较大的 Cap 被提取出来。在酸性土壤中因 pH 提高而使 Fe-p ， A1-P 水解而部分被提取。实验部分一、实验目的1、了解光度法测定土壤中有效磷的原理及方法2、熟悉分光光度计的使用二、实验原理1、土壤中的磷大部分不能被植物直接吸收利用，易被吸收利用的有效磷通常含 量很低。土壤中的有效磷是指能为当季作物吸收的磷量。2. 土壤中有效磷的测定方法有： 生物方法、 同位素方法、 阴离子交换树脂方法及 化学方法等。 其中应用最普遍的是化学方法。 它是用浸取剂提取土壤中
5、的一部分 有效磷。浸取剂种类很多， 它的选择主要根据各种土壤的性质而定。 酸性土壤中 磷酸铁和磷酸铝形态的有效磷可用酸性氟化铵提取， 形成氟铝化铵和氟铁化铵配 合物，少量的钙离子形成氟化钙沉淀， 磷酸根离子被提取到溶液中来， 石灰性土 壤则采用碳酸氢钠溶液浸取。3. 在含磷的溶液中， 加入钼酸铵， 在一定酸度条件下， 溶液中的磷酸与钼酸络合 形成黄色的磷钼杂合酸磷钼黄。H3PO4+12H2MoO4=H3PMo12O40+12H2O三、主要仪器和试剂1、仪器：723分光光度计，10mL吸量管，振荡机，漏斗，滤纸。2个滴瓶，50mL带塞比色管4个，50mL三角瓶4个，50mL容量瓶6个,25mL容
6、量瓶4个。2、试剂：(1)HCI 溶液(0.5mol/L ) 50mL : 4.5mL 浓盐酸 +100mL水（2）NH4F溶液（1moI/L ） 30mL称取3.7g氟化铵，溶于100mL蒸馏水 中（3）提取剂：分别移取15mL 1moI/LNH4F溶液和25mL 0.5moI/LHCI溶液， 假如 460mL蒸馏水中，配制成 0.03moI/L NH4F-0.025mol/L HCI溶液（500ml）。（4）HsBO溶液（100g/L） 100mL : 10g硼酸溶解于水中，稀释至100mL.（5） 15g/L钼酸铵-3.5moI/L盐酸溶液：溶解15g钼酸铵于300mL蒸馏水中， 加热至
7、60E左右，如有沉淀，将溶液过滤，待溶液冷却之后，慢慢加入350mL 10moI/L HCI溶液，并用玻璃棒迅速搅动，待溶液冷却至室温，用蒸馏水稀释至 1L,充分摇匀，储存于棕色瓶中。放置时间不得超过两个月。（6）氯化亚锡溶液（25g/L）:称取氯化亚锡2.5 g溶于10mL浓盐酸中，溶解 后加入90mL蒸馏水，混合均匀置于棕色瓶中，此溶液现配现用。（7）磷标准溶液（50卩g/mL）:准确称取105C烘干的KHPQ （A.R） 0.2195g， 溶解于400mL水中加浓H2SQ45m防止溶液长霉菌），转入1L容量瓶中，加水稀 释至刻度，要匀。准确移取上述磷标准溶液25.00mL于250mL容量
8、瓶中，稀释至 刻度，摇匀，即为5卩g /m L -1 （此溶液不宜久存）。四、实验步骤1、吸收池配套性检验用拇指和食指捏住洗手池毛面，分别在 4个吸收池内注入蒸馏水3/4，用滤 纸吸干池外壁的水滴，再用擦镜纸擦拭光面至无痕迹，垂直放在吸收池架上，盖 上样品室盖，将在参比位置上的吸收池推入光路调零调百。拉动样品槽拉杆，依次将被测溶液推入光路，读取相应的透射比或吸光度。若所测得各吸收池透射比 偏差小于0.5%，则这些吸收池可以配套使用编号1234透射比2、在不同波长 条件下测定标准溶液的吸光度:用吸量管吸取磷标准溶液（5pgmL-1） 5.0 mL分别放入25 mL容量瓶中，加入0.03mol L
9、-1NH4F-0.025mol L-1HC1溶液5-10 mL（按所取滤液毫升数而定）， 用吸量管加钼酸铵-盐酸溶液5mL，加蒸馏水至瓶颈刻度，并滴加 25g L-1氯化 亚锡3滴，摇动后，至溶液有深蓝色出现，用水稀释至刻度，摇匀，放置 15分 钟，与土样溶液同时显色，用1cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于 722E型分 光光度计中，在440 700nm波长范围内分别测定其吸光度 A值。当临近最大吸 收波长附近时应间隔波长10nm测A值，其他各处可间隔波长20nm测定。然后以 波长为横坐 标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长。波长/nm440460480500520540
10、A波长/nm560580600620640660A波长/nm680700670675685690A3、在不同显色剂用量 条件下测定标准溶液的吸光度：按步骤2进行操作，加入 不同量的显色剂 0、1,00、3.0mL、4.0mL、5.0mL、7.0mL、9.00mL摇匀。用 1cm 吸收池，以试剂空白为参比溶液，在选定的波长下测吸光度。记录各吸光度。在 最大吸光度附近每隔0.10mL测吸光度。氯化亚锡v/mL0.001.003.004.005.007.009.00A4、有色配合物稳定性试验取两个洁净的容量瓶，用步骤（2）方法配制氯化亚锡有色溶液和试剂空白溶 液，放置约2min，立即用1cm吸收池，
11、以试剂空白溶液为参比溶液，在选定的 波长下测定吸光度。以后隔10min、20min、30min、60min、120min测定一次吸 光度，并记录吸光度和时间。t/min210203060120A5、工作曲线的制作分别准确移取5卩g mL磷标准溶液0, 1.0 , 2.0, 3.0, 4.0, 5.0mL于 6 个 25mL容量瓶中，加入 0.03mol L-1NH4F-0.025mol L-IHCl 溶液 5-10 mL（按所取滤液毫升数而定），用吸量管加钼酸铵 -盐酸溶液5mL加蒸馏水至瓶 颈刻度，并滴加25gL-1氯化亚锡3滴，摇动后，至溶液有深蓝色出现，用水 稀释至刻度，摇匀，放置15分
12、钟，与土样溶液同时显色，测其吸光度。V/mL0.001.002.03.004.005.00AC ug/mL以磷的微克数为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线,&土壤样品预处理称取风干土壤样品1g （精确至0.01g ）,放入50100mL小、塑料瓶（或50mL带塞比色管）中，加入0.03mol L-1NH4F025mol L-1HCI溶液20mL稍摇匀， 立即放在振荡机上，振荡30分钟。用无磷干滤纸过滤，滤纸承接于盛有100g -L-1H3BO3J溶液15滴的50mL三角瓶中，摇动瓶内溶液（加H3BO3&止F-1 对显色的干扰和腐蚀玻璃仪器）。7、土壤中有效磷的测定准确移
13、取上述土壤滤液510mL容量瓶中，用吸量管加入15g -L-1钼 酸铵-盐酸溶液5mL摇匀，加入蒸馏水至瓶颈刻度，滴加 25gL-1.氯化亚锡3滴后，再用水稀释至刻度，充分摇匀。显色 15min后，再分光光度计上，以试 剂为空白，用1cm比色皿在680nm处测其吸光度值。测定次数123吸光度A质里浓度口 g/mL平均质量浓度卩g/mL相对极差%五、注意事项用氯化亚锡作还原剂作还原剂生成磷钼盐，溶液的颜色不够稳定，必须严格 控制比色时间，一般在显色后的15-20分钟内颜色较为稳定，显色后应准确 放置15min后，立即比色，并在5min内完成比色操作。六、数据处理七、实验评议与讨论所需仪器与试剂清
14、单1、仪器溶液，假如460mL蒸馏水中，配制成0.03moI/L NH4F-0.025moI/L HCI 溶液723分光光度计，10mL吸量管，振荡机，漏斗滤纸。2个滴瓶，50mL带塞比色管4个，50mL三角瓶4个，50mL容量瓶 6 个,25mL25mL容量瓶4个。2、试剂（1）HCI 溶液（0.5mol/L）：4.2mL 浓盐酸 +100mL水(2)NH4F容液(1moI/L): 称 取3.7g氟化铵，溶于100mL蒸馏水中（3）提取剂：分别移取15mL1moI/LNH4F溶液和 25mL 0.5moI/LHCI(500ml)。(4)H3BO3溶 液(100g/L)100mL : 10g硼
15、酸溶解于水中，稀释至 100mL.（5）15g/L钼酸铵-3.5moI/L 盐酸溶液：溶解15g钼酸铵于300mL蒸馏水 中，加热至60E左右，如有沉淀，将 溶液过滤，待溶液冷却之后，慢慢加 入350mL 10moI/L HCI溶液，并用玻 璃棒迅速搅动，待溶液冷却至室温， 用蒸馏水稀释至1L，充分摇匀，储存 于棕色瓶中。放置时间不得超过两个 月。（6）氯化亚锡溶液（25g/L）:称取 氯化亚锡2.5 g溶于10mL浓盐酸中， 溶解后加入90mL蒸馏水，混合均匀置 于棕色瓶中，此溶液现配现用。（7）磷标准溶液（50卩g/mL）:准确称取105 C烘干的 KH2PO4 （ A.R） 0.2195
16、g，溶 解于400mL水中加浓 H2SO45mL（防止溶液 长霉菌），转入1L容量瓶中，加水稀释至刻 度，要匀。准确移取上述磷标准溶液 25.00mL于250mL容量瓶中，稀释至刻度， 摇匀，即为5卩g /m-1 （此溶液不宜久存）。日程安排第一周 6.18-6.19：查阅资料，设计实验方案6.20 ：方案探讨，改进，确定6.21 ：实验仪器与试剂准备 第二周6.25 ：配制实验所需试剂6.26-6.27：条件实验每日两个6.28-6.29：土壤样品测定 （ 每日一种试样 ） 第三周 7.2：试样处理及测定（每日一种式样） 7.3：加标回收量测定7.4-7.5 ：实验室清扫，仪器药品整理，实验总结