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1、颞骨组织切片三维重建的方法及意义计算机技术的不断开展和切片技术的提高，使三维重建像形态逼真、 立体感强，各种重建的结构空间毗邻及定位准确， 且已从定性研究向定量研究 方向开展。该技术在颞骨内部结构中的研究， 极大地促进了耳科及相关学科的 开展。本文对颞骨组织切片三维重建在方法学和应用范围等方面的资料加以综 述。1方法学意义1.1火棉胶包埋特征 组织学包埋切片的方法较多，包括石蜡、明胶、碳蜡和 火棉胶包埋等1，2。火棉胶作为一种古老的包埋方法现应用较少，但其适用于大块组织的包埋 与切片3。它有不使纤维组织及肌肉过度硬化的特性，对于神经、眼球角质 及 某些中空的组织能减少收缩，使其真实地保存细胞和
2、组织间的形态特征， 并能 切削较薄的切片，来解决神经组织和胚胎学方面的特殊需要，这些特点 非常适合三维重建要求4，5。1.2 三维重建的方法 由于三维重建技术工序复杂，要求条件高，在火棉胶颞 骨切片标本制备 中，每一步骤均要仔细认真，才能确保重建结构的质量。 组织块的选择，选 无疾患的新鲜颞骨，其内部结构保存较好，便于精细结构 的观察。脱钙，将 标本置于3.6%盐酸溶液中2周，酸的浓度过高、时间 过长易造成软组织结构的 破坏。一般用细针能比拟容易地刺入骨组织，触之 如额头的硬度为宜。脱 水，组织块较大，脱水时间应相应的延长，组织块 脱水不充分，可以使火棉胶 包埋失败。透化，为浸胶之前重要的步骤
3、，使 组织块更好的适应火棉胶溶 剂。浸胶，为保证大块组织浸胶彻底，每个梯 度的浸胶时间应延长为4周以上。浸胶不彻底往往造成切片失败和切片过程 中结构的丧失。同时在长达半年 的浸胶过程中应严格密封，防止空气中的水 分进入。火棉胶遇水分变白并呈胶 冻样，此时应将标本脱水后从最低浓度重 新浸胶6。包埋，包埋块的底托用 硬质木板并用5%2aC03溶液煮沸数小 时。将硬纸围起，10%火棉胶包埋，其内部 不宜产生气泡，包埋后的组织块 质地均匀，包埋后将盛有氯仿的烧杯一起放入密闭的容器中，这样火棉胶遇氯仿气体后外表凝固，2030 min后将包埋块 倒置于氯仿溶液中1224h , 取出保存于75%酒精溶液中。
4、定位，用钻头在组 织块的四周垂直钻四个孔， 用4%明胶溶液加等量的墨水轻轻地注入孔内，便于扫描时准确定位。所打的孔不在组织上，应对组织结构无破坏，使重建的结构不受影响。切片，玻片经常规处理后，以4%铬矶明胶溶液做粘合剂为宜，因 蛋白甘油遇酒精 时其蛋白凝固而失去粘附作用，使标本在染色过程中易脱片。另外在切片过程中，为防止切片卷曲，可用与组织块切面同样大小的一纸片贴在切面上，切片与纸片一起切下放入 75%酒精后二者别离79。扫描及结构 重建，采 用透射扫描直接对玻片结构进行扫描，可以获得较为清晰的像。总之组织学切片三维重建技术要求：要有熟练的切片技术，切片平整、 等距、连续、参照点准确、结构对位
5、一致。熟悉并熟练应用三维重建及测量 的软件，应用简单的描记方法，便于控制及调整结构。对位准确、序号严 格 所以在重建过程中应严格把握每一个环节。2 颞骨及内部结构三维重建的意义2.1 形态学显示Morik 10首先应用颞骨组织切片三维重建技术， 通过颞骨咽鼓管连续切 片， 对咽鼓管腔、软骨、腭帆张肌进行重建，从不同的角度对附着肌肉组织的 观 察来进一步说明咽鼓管系统的功能。Harada 11对颞骨进行三维重建研究， 提出颞骨三维重建不仅可以了解内部的形态学特征和颞骨内部结构的立体空间 关 系，同时还可以在三维像上进行手术模拟。Takagi 12做了更为精细的研究，其 应用三维重建技术对前庭器的
6、椭圆囊和球囊斑进行精细的测量，并认 为：椭 圆囊的大局部和外半规管在一个平面上；球囊斑的现状似一个半 球形；两 个斑之间比right angle少，以其来估测二者之间的相互合作关系。 以后有学 者对耳蜗的长度 13、圆窗龛的尺寸 14、半规管和壶腹嵴之间的 角度 15以及前 庭神经节的空间关系 16等进行了研究。2.2 结构的测量 在对颞骨及其内部形态结构进行三维显示的研究后，许多学 者利用三维重 建特殊的优势，根据临床手术中特殊情况对颞骨内部结构进行 相应的测量。 Takahashi 17 针对单管神经切除术而相应地对单管神经的长度 和手术进路等方 面进行测量，该学者对蹬骨及其相关的结构进行
7、重建，结果 说明：砧骨长突下 方到卵圆窗的中心平均距离为 3.8 mm ，认为外科入路假设从 圆窗中后上进路是非 常危险的，因为它非常靠近椭圆囊，从圆窗的后下进路 比拟平安，并建议在卵 圆窗下缘钻洞以抬高受压的蹬骨底板时，孔的直径不 应大于 0.5 mm 。 Yasumura 18针对不同年龄段未成年的颞骨应用三维重建技 术观察面神经的发育过程中变 化，面神经管与鼓环和外耳道的关系，为该区 域未成年人不同年龄组的手术提 供了必要的形态学根底。同时该学者又对面 神经管在中耳腔内的裸露情况进行 了研究，结果显示，面神经骨管缺乏 面 神经暴露 最常见的部位在卵圆窗区占 70%，缺损的形状似圆形多见，
8、而在 其它部位那么形态大多不规那么，裸露的长度0.42.6 mm，宽度0.11.6 mm，面积为 0.031.87 mm2,这些骨质缺损的 近 端常是耳科手术要涉及的部位 19，20。2.3 临床应用Pickett 21应用三维重建技术了解面神经后进路鼓室的研究，并认为当鼓 室发育好时有足够的空间可以进入鼓窦和圆窗龛。 而当乙状窦前位、 高颈静脉 球位时，鼓室向后扩展减少，上述的部位就是后半规管和相邻的面， 明确这个 间隙包括侧方的面神经管和蹬骨肌、 上方的外半规管、 前方的后半规管和前方 的前庭，下方的颈静脉球。 Harada T 等22对 1 例 E 三联染色体综合症的颞 骨 间隙连续切片
9、，并进行结构重建，研究显示，该疾病中内耳有明显的结构 不正 常，包括椭圆囊扩大、 后半规管缺如、 耳蜗发育不全， 蹬骨形态不规那么， 面神 经走形异常和鼓膜平坦。3 优势及局限性生物组织三维结构重建像提供了三维立体视觉， 显示复杂的空间结构， 对 研究疾病的隐藏、组织器官的发育过程及其规律性以及辅助设计手术径路和模 拟手术等有较好作用， 特别是应用三维重建像建立教学模型， 测量三维形态学 参数，辅助解剖训练促进教学等多方面优势明显 13。随着高分辨率 CT 和 MRI 的开展，应用影像学进行三维重建优势非常明显， 在较为精细结构上，它们的 分辨率还达不到，特别是超微结构的三维重建， CT 和
10、MRI 那么无法实施。但 是生 物组织三维重建存在有较大的局限性，要求切片质量高、连续性好、制 作过程 复杂、费工费时，并且不能从临床上做前瞻性的研究，仅适合于根底 方面的研 究。作者单位：陈合新 ( 510515 广州市 第一军医大学南方医院耳鼻咽喉科 ) 钟世 镇( 第一军医大学临床解剖学研究所 ) 许庚( 中山医科大学第三附属医院耳鼻 咽喉科 )参考文献1 战雅.火棉胶石蜡整块染色耳蜗的制作 .解剖科学进展， 1998 ，4(3) ： 2822 李玉霞，孙本善，郭宪生 . 胶双重浸泡包埋法制作皮肤与瘢痕组织切片 . 临 床 与实验病理杂志， 1998 ， 14(2) ：1193 周立国，
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