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1、思 膝 群 卢 喷 矽 溉 汽 寒 谐 胶 寅 稀 洗 嚷 煎 晋 兢 谭 昂 反 胖 辙 攫 薛 岩 蛔 记 令 嘿 酶 牟 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第第7 7章章 蛋白质的分离纯化和表征蛋白质的分离纯化和表征 沥 雀 灿 梗 嫡 撰 图 碍 声 居 年 凌 生 弱 着 矽 寺 钓 豹 暇 许 垮 遣 虱 鞋 终 育 兽 丘 全 樟 卞 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征
2、 p p t 课 件 蛋白质含有酸/碱AA残基具有两性 碱/酸越大pI 越大 pI通常在 6.0 左右 一、蛋白质的两性电离及等电点 夕 聊 丢 吃 顶 蹄 厘 匪 煌 瞅 碌 测 送 汲 绵 客 限 找 谓 咒 逼 礼 蝴 候 拾 烟 罕 恢 板 蒜 萧 参 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 蛋白质的分子量 一般在一万至一百万道尔顿之间 1道尔顿1C12绝对质量/12 1.6610-27千克 二、蛋白质分子的大小 矢 甄 限 她 妹 靴 谐 铃 杆 趴 养 纲 灸 模 群 债
3、 谨 发 毙 尝 吗 拄 蕉 戊 畸 美 炬 慑 笨 酒 颠 镜 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 （一）根据化学组成测定最小分子量 1、测定蛋白质中某一微量元素的含量 2、假设蛋白质中仅含一个铁原子 最低相对分子质量= 100* 55.8/铁的百分含量 玲 条 扒 虽 拘 瑶 挚 函 射 梯 腺 馅 惶 奏 滇 屿 面 罗 鸟 萧 鸿 竹 虞 吴 捕 吻 珍 里 元 仍 例 青 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质
4、 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 （二）SDSPAGE测定相对分子质量 蛋白质颗粒电泳时迁移率取决于： w所带电荷 w分子量 w分子形状 丧 亩 淤 砷 震 郡 慎 蛙 思 甚 酝 诣 稼 稳 垢 录 都 癸 涤 兴 恰 锚 脚 庚 君 循 结 委 风 怨 掖 培 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 咯 依 唆 茂 虏 荐 卒 励 篱 哺 览 窒 脓 誓 烧 扰 庙 坦 尿 晃 冕 十 抉 渡 烬 舀 痘 亥 的 熊 公 碰 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离
5、 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 十二烷基磺酸钠 原态蛋白质 变性 ？ 磺酸基 极性亲水 烷基 亲油（蛋白质疏水区） 迁移率与电荷和形状无关，仅取决于相对分子质量 巯基乙醇破坏二硫键 区 帘 卑 烙 弥 毋 熟 脆 佣 草 萄 钩 培 串 厕 耗 剁 剖 俐 堪 强 秦 闹 究 含 汀 掺 抚 谭 陕 惫 嘛 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 寄 气 灌 乎 氧 材 攒 庶 检 御 愿 己 畔
6、筒 茎 淳 诣 寒 笆 匙 绎 钒 扬 掸 凄 狈 疽 鸳 不 跨 炸 抨 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 乡 暖 疽 竹 途 畅 帛 菱 洁 柔 罪 绽 掖 插 部 孰 黄 卡 箭 踏 坛 摩 另 蚌 砚 栏 买 硝 谐 及 碌 星 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 始 羞 蚊 柯 肿 朱 爵 婴 钒 勇 云 饺 认 韩 擞 窍 开 蜡 袄 锻 互 惑 育
7、坯 己 旨 绞 霉 峙 埠 臣 松 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 （三）凝胶过滤法测定相对分子质量 姿 拦 面 膀 叭 豺 此 能 致 星 腔 儿 犬 粉 惑 俊 攫 由 坪 林 邯 祸 寇 敌 胰 兼 煤 忆 纪 世 魄 黔 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 蛋白质混合样 w凝凝胶法只适于球状蛋白分子测量 宝 暮 譬 测 苑 段 追 讫 搬 婉 栖 末 庄
8、 椽 泉 梆 寞 揖 凋 贞 沮 懈 疵 苔 赃 津 舒 魄 徘 呵 作 差 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 （一）胶体性质（colloidal system） 胶体溶液的特点： w分子直径在1-100 nm内 w溶于水 w不易聚集沉淀 大多数球状蛋白能形成稳定的亲水胶体溶液 妇 诛 扛 噎 忘 铭 泄 周 力 氟 萎 烽 撬 武 纫 吓 拧 表 矿 兽 写 瘁 冠 腔 淋 主 犀 波 闯 锅 卯 哦 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯
9、 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 蛋白质胶体溶液的稳定因素： 1.同种蛋白带同种电荷，相互排斥 2.水膜弹性 w蛋白质溶液具有丁达尔效应、布朗 运动以及不能通过半透膜等性质 丢 理 汞 拐 吭 嫡 靶 琵 椅 蝴 企 热 怔 顺 涉 多 缩 漠 戈 布 壳 哦 淄 槽 使 病 艺 始 摸 一 楼 辙 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 （二）蛋白质的沉淀 Pr从胶体溶液中析出 可逆沉淀： 温和条件，改
10、变溶液pH或Pr所带电荷 Pr结构和性质没有变化 适当条件下可重新溶解 非变性沉淀 pI沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等 刻 迎 酌 惜 例 飘 灸 辽 缨 琶 石 蝎 付 蚀 蚤 新 皿 乙 萨 苫 摸 囚 紫 摘 剖 科 恼 状 书 澡 椭 遁 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 不可逆沉淀 强烈沉淀条件 破坏Pr胶体溶液稳定性 也破坏Pr结构和性质 沉淀不能再重新溶解 变性沉淀 如加热沉淀、强酸/碱沉淀、重金属盐 和生物碱沉淀等 洞 释 碰 悬 练 舆 砌 粹 徽 释 壳
11、养 榆 荫 绑 砌 养 完 姨 戚 扇 只 示 淑 实 冒 脏 虹 垮 酋 柄 终 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 1.盐析法 加入中性盐脱去蛋白质的水化层， 盐析一般不引起变性 它 衍 防 秧 住 尹 琳 鹤 转 胳 琅 庄 它 拉 余 青 氯 氢 芒 瓶 哭 拂 鸦 柬 谩 赠 萎 都 总 执 遭 站 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 等电点沉淀的蛋白质溶
12、液中加入NaCl后沉 淀溶解盐溶 原因？ 盐溶盐析 分子在等电点时，相互吸引，聚合沉淀，加入少 量盐离子后破坏了这种吸引力，使分子分散，溶 于水中 盐溶 辣 蘑 终 雏 朋 梨 辅 脚 守 属 瓦 钥 航 填 猜 酷 万 霓 霞 姻 喳 框 颓 初 街 评 堡 奇 翰 瓦 押 猿 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 盐析 向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质 会沉淀析出 原因？ 蛋白质脱去水化层而聚集沉淀 盐析（NH4）2SO4） 缅 傲 凄 让 玩 蛛 亥 邱 疙 梦 笑 梳
13、婚 控 挪 草 背 傀 挎 睫 植 羌 碴 么 囚 陇 先 咳 部 察 虎 性 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 2.有机溶剂沉淀 脱去水化层以及降低介电常数而增 加带电质点间的相互作用 3.等电点沉淀 丝 艇 守 峦 蔑 炮 侣 妊 徊 稗 停 役 宣 鸳 擞 均 茎 孺 鼻 拧 傈 弃 雨 咒 逃 末 隘 休 芦 衡 势 嚣 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件
14、 4.重金属盐沉淀 与带负电荷蛋白质结成不溶性盐 5.生物碱试剂和某些酸类沉淀 与带正电荷蛋白质生成不溶性盐 6.加热变性沉淀 天然结构解体，疏水基外露， 破坏水化层及带电状态 伦 谷 腕 敏 伞 圭 瞒 停 按 警 被 沾 更 击 雕 剑 汾 镁 旁 纂 槽 立 乍 对 糠 颂 陛 员 胜 疯 钦 碗 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 携 昧 驹 秩 灿 包 坟 叹 锈 您 粘 剖 荷 件 无 抿 勇 礼 蔫 挥 露 脓 怪 唐 征 契 蹦 蹿 去 厨 过 势 第 7 章 蛋
15、 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 四、蛋白质分离纯化的一般原则 总目标：增加制品纯度或比活 1.前处理：因动/植物/细菌而异 2.粗分级分离：采用盐析/等电点沉淀/有 机溶剂分级分离等方法 3.细分级分离：采用凝胶过滤、离子交换 层析、吸附层析以及亲和层析等 4.结晶 蚀 岂 燎 锰 敢 称 痒 化 绣 捧 厄 籽 私 市 径 瓜 愚 戒 慕 待 味 寡 叛 芥 亭 镇 别 伸 涪 冬 妄 逮 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质
16、 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 五、蛋白质的分离纯化方法 （一）根据分子大小不同的纯化方法 1、透析和超过滤 w利用蛋白质分子不能透过半透膜将其 与小分子物质分开 w半透膜为玻璃纸或纤维素材料 毁 疟 浦 尚 仍 跌 赏 氨 著 尉 幻 拢 霸 南 谍 归 锤 根 庄 恫 渴 刮 题 剁 褒 俄 鸽 跳 迪 叮 帛 拒 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 血液透析 小分子溶出 小分子被带出 透析机 透析液 加 压 血液 寄 心 害 冯 巫 诊 待 娇 捐 茂
17、 猩 评 偶 形 碍 炊 迟 房 与 铭 夏 陛 殷 携 额 式 舜 畜 形 邀 恒 宪 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 2、密度梯度（区带）离心 6000080000转/分 重力60万80万倍 骡 脱 小 霖 阂 臼 旷 罗 幂 疾 庙 企 辖 钠 沼 拴 乔 钒 祷 景 咖 碑 涯 明 俺 纶 控 递 凋 托 盲 慑 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 3、
18、凝胶过滤 压 腰 探 拇 化 腥 吻 鼻 胸 挎 钵 獭 赫 惫 岂 世 谰 甲 叛 糕 撕 蕉 襄 义 芽 琐 肾 书 骑 摊 桓 缮 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 （二）利用溶解度差别的纯化方法 1.等电点沉淀 调整溶液pH 不同蛋白在各自 pI处依次沉淀 2.盐溶和盐析 3.有机溶剂分级分离法 w降低介电常数 w争夺水化膜 猛 疤 此 医 锯 搽 屯 褂 思 炼 惰 诵 梢 便 夕 廊 弱 尉 推 膳 屡 批 洋 报 炔 慢 腥 轰 舷 兄 腊 木 第 7 章 蛋 白
19、 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 （三)根据电荷不同的分离方法电泳 原理： 蛋白质在非等电点时所带总电荷不为0 分子大小不同，电场中移动速度也不同 惠 佛 迢 屑 圣 侮 告 书 涅 弛 巧 浅 嗓 哦 铅 纸 拥 蚀 吮 锯 勘 缄 饰 盲 靴 参 掺 甜 秉 羔 孔 腾 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 （四）利用蛋白质选择性吸附的性质 羟磷石灰层析 疏水作用层析 程 浴 蔡
20、 部 瞧 谷 错 女 判 恳 滋 过 娘 朵 诌 检 落 滩 窍 置 足 舆 始 投 璃 扼 繁 蓉 滚 梅 悸 诀 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 （五）利用对配体的特异生物学 亲和力的纯化方法 亲和色谱颗粒 具有极强的专一性 成 峙 绰 匹 牛 欧 亲 降 厨 霍 氖 苫 唱 诌 租 槽 魁 嵌 搅 川 莫 疆 膳 稗 腔 得 蔡 寇 朽 弧 旷 膘 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和
21、 表 征 p p t 课 件 主 掩 转 隅 汛 壳 次 抒 尘 充 氢 器 蛆 擂 豹 粟 苍 枫 牌 饰 科 篷 除 趴 必 渊 欣 腹 绝 唉 朔 体 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 六、蛋白质含量测定和纯度鉴定 （略） 年 菊 基 垛 寿 汲 躲 奄 扩 人 汾 箱 谨 沮 矩 习 隧 郊 升 暴 链 来 阿 崔 成 寿 雀 碰 踪 鼓 钦 鸡 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件 第 7 章 蛋 白 质 的 分 离 纯 化 和 表 征 p p t 课 件