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1、实验九 补骨脂素、异补骨脂素的提取、分离和鉴定补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea coryli folia L.的干燥成熟果实。具有补肾助阳、温中止泻之功。主治肾虚阳痿、遗精遗尿及腰膝冷痛，小便频数；外用治白癫风。补骨脂中含有 数种香豆素和黄酮类成分，主要有补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂双氢黄酮 (补骨脂甲素)、 异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)、补骨脂次素等。药理研究证明，补骨脂甲素有明显扩冠作用， 补骨脂素及异补骨脂素是具吸收紫外线性质的光敏性物质，因此是抗白癫风的有效成分，制剂有祛白素，补骨脂注射液、复方补骨脂酊等。一、补骨脂中主要成分的物理性质1 .补骨脂素(psoralen) : Ci
2、iH603,无色针状结晶(乙醇),mp189oC, 190oC。溶于乙醇、 苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙酰和石油酰。UV扁ax m( lg ": 242sh (4.38), 247 (4.40), 291 (4.03), 330 (3.80)。 IR vnax cm-1 : 1710, 1630, 1575,1259。补骨脂素异补骨脂素2.异补骨脂素(isopsoralen): C11 H603,无色针状结晶,mp137oC, 138oC。溶于甲醇、乙 醇、丙酮、苯、氯仿；微溶于水、乙酰，难溶于石油酰。UV ?max m( lg £ ): 245 (4.38), 297 (
3、3.96)。 IR vmax cm-1 : 1724,1709,1613,1513,1370, 1330, 1266, 1250, 1055, 999, 833, 747。3. 补骨脂双氢黄酮(补骨脂甲素)(bavachin, corylifolin): C 20H2004,无色结晶，mp191oC, 192cC,加 为-29.1o (乙醇)。4. 异补骨脂查耳酮(补骨脂乙素)(isobavachalcone, corylifolinin): C20H20O4,黄色针状结 晶，mp154oC, 156oC。5. 补骨脂次素(psoralidin ) : mp292oC。二、目的要求1. 掌握用
4、溶剂法提取吠喃香豆素类化合物的操作技术。2. 通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱法的操作技术。3. 掌握香豆素类化合物的鉴定方法。三、基本原理根据内酯类化合物在乙醇中溶解度大，水中溶解度小的性质， 利用乙醇，从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素， 并用活性炭进行脱色， 最后利用两者的极性差异， 用氧化铝 干柱层析予以分离。四、操作(一) 提取分离流程心ns 50,乙醇 皿皿 回收乙醇甲醇回流中川出咔皿 派编 补骨脂粗滤液一担旧十棕黑色粘稠物一心甲醇提取液 # 一?放置抽滤折能朴骨脂素粗品：苦渡液放冷析电补骨脂素精品氧化铝干柱色谐分离异补骨脂素回流，抽滤'补骨脂素(二) 提取
5、1 .超声波振荡提取取补骨脂粗粉200g，用50%乙醇1500m1分3次进行超声波振荡提取， 每次30min,过 滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，放置过夜，倾去上清液，得棕黑色粘稠物。将棕黑色粘 稠物加20倍量甲醇分4次回流，每次15min,趁热抽滤，合并滤液，浓缩至小体积，放置 析晶，滤取结晶，80（C干燥即得补骨脂素粗品，称重。2. 浸渍法提取称取补骨脂粗粉200g,用50%乙醇浸泡3次，每次24h,合并3次滤液，回收乙醇至 无醇味，以下操作同 1法。3. 称取补骨脂粗粉 200g,放入1000ml烧瓶中，加入50%乙醇500ml,热回流1h,过滤，回收乙醇至无醇味，放置过夜，倾去上清液，
6、得棕黑色粘稠物。将棕黑色粘稠物加80ml甲醇溶解，加少许活性炭，回流 l0min,趁热抽滤，滤液回收甲醇至小体积，放置析晶。（三）精制将上述粗品加适量甲醇（3: 100的比例）溶解，加少许活性炭，回流 l0min,趁热抽滤，滤 液放冷析晶，滤取结晶，少量甲醇淋洗，80OC以下干燥即得补骨脂素精品 。（四）补骨脂素和异补骨脂素的分离取色谱用中性氧化铝 40g，装于直径1.6cm*30cm的色谱柱中。取补骨脂素精品甲醇液 约1-2ml,加样，以石油酰-乙酸乙酯（1: 2）作洗脱剂，洗脱，每 20ml为一溜份，各溜份 回收溶剂后，用薄层板检查，和标准品对比，于紫外光灯下观察荧光与颜色。（五）鉴定1
7、.呈色反应（1）异羟脂酸铁反应取补骨脂素精品少量，置于试管中，加入7%盐酸羟胺甲醇溶液2滴3滴，再加10%氢氧化钾甲醇溶液 2滴3滴，于水浴上加热数分钟，冷却，用盐酸调至pH34,加1%三氯化铁试液1滴2滴，观察溶液颜色。（2）开环闭环试验 取样品少许加稀氢氧化钠溶液1m1 2m1,加热，观察现象；再加稀盐酸试液几滴，观察所产生现象。（3）荧光取样品少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，于紫外光灯下观察荧光与颜色。2. 薄层色谱鉴定薄层板：硅胶 GCMC-Na板。点样：补骨脂素精品乙醇液、干柱色谱分得的两样品乙醇液、补骨脂素对照品乙醇液及异补骨脂素对照品乙醇液。展开剂：石油酰一乙酸乙酯 （2:
8、3）。展开方式：上行展开。显色：在紫外光灯（365nm）下观察荧光斑点。观察记录：记录图谱，计算Rf值。五、附注 原料最好用未炮制过的补骨脂种子，其中补骨脂素和异补骨脂素含量较高。 补骨脂含大量油脂，据文献报道，用50%乙醇或40%丙酮提取，方法简便，得率高，亲脂性杂质少，乙醇又较丙酮便宜，故选用50%乙醇提取。利用香豆素内酯类的特点，用碱提酸沉法，由于补骨脂中含大量油脂和糖类成分，易发生皂化反应和形成胶状物，难以过滤，得率低。 从补骨脂中提取得到的白色针状物，为补骨脂素和异补骨脂素的混合物，两者含量比 随药材的品种、质量不同而不同，由于两者均属于光敏性物质，故临床应用时，不必将两者 分开。在进行干柱色谱分离前，应先做薄层色谱检查两者的含量情况。六、思考题1.从中药中提取香豆素类成分还有哪些方法？2 .异羟脂酸铁反应的机理是什么？参考文献1 .洪永福等，补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的分离和鉴定，药学通报，(10)1979, 447页.2 .徐永昭，补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取实验，中药通报，7(5)1982, 30页.3. 翼春如等编，中药化学实验技术与实验，郑州，河南科学技术出版社，1986, 291页.4 .吴焕，补骨脂的化学成分 (综述)，中草药通讯；(10)1978 , 32页.