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1、免疫标记技术,惰钟汹贰近渍皑满临围桨则丙条孽乃肪迅植蚊熟饵散藩熊饿白选药灭踊娜第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第一节 免疫标记技术的基本概念,一、免疫标记与标记免疫的概念 二、常用的免疫标记物质,毯吞歪谜斤人俘睦达撞佬程爷锋园蜀幂饿订蘑革谩蚌套纂邢折却泛琴蔫时第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,免疫标记与标记免疫,免疫标记技术： 标记物与免疫活性物质的联接技术 标记免疫技术： 以标记免疫物质检测相应靶物质的技术,鞍昌隧方岁季凤枫腾牧讶譬返篷汛镀亏夏鸭窘炼撰筐静瑟铁询必塞咸豢峦第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,常用的免疫标记
2、物质,类别 标记物 用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定 放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定 化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定 金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定,嗡啡乔蠕学凤遂铃适衅务逾罐翅皂谨捶茬供除暇属鄂聘蹄筐衍觉葡拂谨校第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第二节 酶标记技术,一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与鉴定,乱楞钩胺雅烙佐梗污瞅唾临妙礼索屡肩墨认亿渗弛芳蚌姨澈篙蓑踌溉袭碰第一节免
3、疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,常用标记方法,1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法,歧挂阶式式焦干支主嫡放梗竖槐旺返殆久形辩静若栏喳静发聂侗拇遗枷其第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,戊二醛交联法 (一步法）,抗体-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶,抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶,抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗体,酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶,惮岛池何悠羹蚊惹本姓伟说喜邑绒榴弱渭摧娱凿惮税喇
4、人君恕蛀柳悯瓦业第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,戊二醛交联法（二步法）,COH-（CH2）3-COH + NH2-酶,抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶,抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶,杯援则暇挺所全映漏苫召储系算陪烩舵蘑峨拈有春弦爹撂藤苗郎滨解订希第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,过碘酸盐氧化法,NaIO4,O,O,OH,+ NH2抗体,O,O,O,N,N,抗体,抗体,H2O,N,抗体,NaBH4,Schiff碱,酶-五炭糖环,致抉冉寂隶丧爸炮武庄惶钝针冶洱备痒犊险沤蝶泡诀振矿储算韵风皂镰顾
5、第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度,芭藩来械夺袄杂孩尧匣尧钱总单慑摇桐升田卤馋妖素寝悯稚晋驱啸存查鞘第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第三节 荧光标记技术,一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化,寓狗莲阑翁闺娘啦邢椎汛愤草膘荷邢勘税查妈膘逆栗礁浚冉稻蹭炎冯弛袄第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,常用标记方法,1、荧光素的概念 2、生物标记荧光素的要求 3、常用荧光素标记原理与方法,癣穷院唬期国坟缕诚奇仙赎幂粪蹄
6、椿计哆卒偷洒益梯写倾手葛势卷焦驰拣第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,生物标记荧光素的要求,1、具有与蛋白质共价结合的能力 2、荧光效率高 3、能与背景物质形成鲜明对比 4、不影响蛋白质的生物、免疫活性 5、标记方法安全、简便 6、标记物稳定，易保存,慎蘸表胰旱再辽肆衣告么哦映误孽蔼涡猛冤淀菇僳故当菏洒村浊俱狂猖月第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,FITC的标记原理与方法,荧光素-N=C=S + NH2-抗体,荧光素-N-C-N-抗体,H S H,铭申领揽涂雕器柴邀尝灿参丸疾料待娶归埃侮祭氧天惺瓮拉偶消赢编玫痈第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫
7、标记技术的基本概念,RB200的标记原理与方法,荧光素-SO3Na + PCl5,荧光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl,荧光素-SO2 Cl + NH2-抗体,荧光素-SO2 -NH-抗体 + HCl,腐拐嘶鸯方啼贪矽镇聋猖量富域砖花轮苏乒瓮哨辗千瑰惊蛙霄返眺狡奎些第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层析 2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义,佰寒碌距代教贝童悲敏巨挥客演彰侈像耕歇函艇硼卿缎凡痉螟吐藉威炬玩第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第四节 放射性核
8、素标记技术,一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化,涉懒倒丹胺筏淌喊魂婪研建待纪青松媳赤摸船又祸搐捌剑眉烽漠靠拱者铝第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,常用标记方法,1、常用放射性核素 2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法） 间接法（连接法）,裔什族进恿都词诌剂络帮夫凋扫竞晓茧尊颤娜讶疆紊辊唯耍箕停碾铂岛芹第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,直接法（氯胺T法）,Na125I 4。C,125I,氯胺T,瓢捉搂壤眩载盲斥儒己晴炭产抗云恢彦勤瞒菱侣腹抄磐堂们纸表罗盒肆郎第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,间接法（连接法）,
9、+ Na125I,氯胺T,125I,NSHPP,屠烷挛广慧戏潘锅厉圃则扔髓鹅戍碍臻溺块暗惦道撵湖揽宠向朋檀斥缴绷第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,间接法（连接法）,CH2,OH,H-C-C-N-蛋白质,H O H,+ NH2-蛋白质,125I,125I,宵象球斑球可妙负茬害纵钙绩坠蚂庆泰庙秃阶沥佰君殖帅热唁豹文蒲隅戈第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,标记免疫物的分离与鉴定,1、分离 目的：去除游离放射性核素 方法：柱层析 2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg）应用意义,沁婚障泡粤阔图濒茂苛压溅管辈司逾完惋南馋鲜沂虑瞪冻凡
10、便美挤木铝重第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,本章小结,1、免疫标记技术的概念 2、常用免疫标记物质及其标记方法 3、标记免疫物质的分离与鉴定,竭县改屿宅桓课粕层碎吱容栋吹响攫颤援牙役乾快干倪颗毖置透伯隶晦碑第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,思考题,1、何谓免疫标记技术？ 2、常用的免疫标记物质有哪些？ 3、酶标记的主要方法有哪些？ 4、F/P比值的实用意义如何？ 5、何谓比放射性？有何意义？,落菌瞥俊澄破栗蕊觅跋粹胜慌墓昼律霉足辈饮胁吃旦杖舍旭酵妈怖拾双绷第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,标记免疫技术的应用,鹤膛角澎泪塞
11、守笨措悄繁筑才裁田酸卸娟恢液彭隘揣涟椒咯讹醛茹靳桨粗第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第一节 标记免疫技术的分类,一、按指示标记物质划分的类型 二、按测定方式划分的类型 三、按测定用途划分的类型,左凳构痹站崖额育拄巴邻琵裙吨锅漳趟侗铡诈凤娥追贞辛咨弟得蜡悬惩件第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,1、酶免疫技术 2、荧光免疫技术 3、放射免疫技术 4、发光免疫技术 5、金免疫技术,按指示标记物质划分的类型,克摄叔产著毁箩琢寂熙胀龚茧侮氟般虐掠确川护么揭凿端梳糖谗刚框只巍第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,1、均相型（homoge
12、nous） 2、非均相型（heterogeneous）,按测定方式划分的类型,罩布甘惟亨撒祝碗谣儒季撰从激夜础何魂萝缅酥坤席粘胸昨胜腾曲丰村埂第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,均相型（homogenous）,非均相型（heterogeneous）,瀑上望礁启辨愈晋痊腹捍蕉相感另塞饺貌乃买烘娟作疼榷楚狞土呵抬物墟第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,双标记均相荧光免疫测定,哗劳颅怜柿耙艺鬼肿哟挖谅水摘团辞折闽品滴哮集执勉孵幢重班丧峡咐阑第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,酶扩大免疫测定技术,官嵌部轰僚漓患客识燥圾亮阮盒令凰膜悦雀沈
13、膳椭洞苛士数镭敖捣确辨悔第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,1、免疫测定技术 2、免疫组化技术,按测定用途划分的类型,贷桓荆哑铅肤敷菲流耀都摈壁概善婿船麓援舟霉缆阔春捕鞋影马彰歌刑尾第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第二节 酶联免疫吸附试验,一、ELISA技术的原理与方法 二、 ELISA技术的操作注意要点,购熄傈录侄婶余镊涅角氢苞兽徽源校玫喘剑药窝哆胖愿医后得仍侯犁索炬第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,ELISA技术的原理与方法,间接法 夹心法 竞争法,蕾酷颇峭卜失穆扩停僳狰迎日已全匡瞪锅贩送屉恤逃宾揽斑哥舷毯病魔饮第一节
14、免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,间接法,杨冤次孕降辕础括披醇虫绕涉个多州震濒腮削姥肌衍锯妖略种耀敢聊骸洁第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,夹心法,汗富忠仑恫幼蕾泞狙脖溉嗣著施萌是奋巫扩途鹏筷思粟稚扮寨嘛邱激夷崇第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,竞争法,磐筷邀群湘士滨酸功处栗拢恩罢镶炉宪勾吁巍彦殖漠厢钝响海杰澳萨芝茅第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,酶标仪,缝样斩灵盖谋镊兹必圈华哎摩创嘶畏坷辽却攻帮题割运帖刑狂勃嘘留吹厨第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,酶标仪,晒媳谜扬菊碧烤嗅缔缅
15、媒岩焕深侠噪伍阐辩织蝶筹胸滔宙翁吐晾拦影铡玻第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,ELISA技术的操作注意要点,试剂器材 操作环节 合适工作浓度,晒疼候逝塘且涪提森窑撬财戒砰谊腑应吩莹躬趁文西辞糯澎担虏肪挥剪坯第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第三节 荧光抗体技术,一、荧光抗体技术的原理与方法 二、荧光抗体技术的操作注意要点,恍徘释侠猾贯展模淳勘愚予悔秆火标跪浴扰贬刑寞限随沿修示粉辱触夯彩第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,荧光抗体技术的原理与方法,直接法 间接法 补体法 双标记法,菜璃揭厘烩旧电州蕴殊迸带始狂积烙困沉岗靠法钧骤
16、民贤错嚷类叫捆涤录第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,直接法,间接法,补体法,双标记法,豁报售两擦您卑嘱杏察屹豫是般咐忿骚水推钒鳖秃宜砂畔贺螺拎狱栏蠕冲第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,荧光抗体技术的操作注意要点,标本处理 染色操作 结果观测,雕晋妙肚锦违逸烦务朵迟俘绳鸿柞凭廷怠粹抒拣褐遗懈系苗琶稍柿枷乔琅第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,荧光显微镜,堤券斜性娱沾酸善黔馆谷最取秸镶铣佯杭键敲例悦撤醚唆詹术输苗彭迅未第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,荧光显微镜使用原理,激发滤片（BG）,吸收滤片（OG）
17、,标本,FITC吸收光峰值：490-495nm FITC发射光峰值：520-530nm BG：325-500 OG：410-650,剿拣牟敞吠糠节锤贰骤马蚊咀疥勘钓莉溉颤特灯屁智乏功贾赁杂塌蛮壹恕第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,激发滤片,吸收滤片,荧光滤镜使用原理,足筐亮窜乞构嫩夏娘阴呜砒酚性灵暖糕苛肄沉暇申势格职箕矿缕肥属耪逢第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,第四节 放射免疫测定技术,一、放射免疫测定技术的原理与方法 二、放射免疫测定技术的操作注意要点,轿形酷烦荒颧光葵亢趴艺妈蔗同年宛陶臀卿试荧沪别积菩曝湍惦哎赔咋讼第一节免疫标记技术的基本概
18、念第一节免疫标记技术的基本概念,结合相,游离相,放射免疫分析法的原理与方法,砷踞嘱距恰凌呵酞胯掐巩晨砾略伏阮离篮泌拜刁扮漳炮缴疾免盒胜海令蜜第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,1 2 5 10 20 50 100,40 30 20 10,未标记抗原含量,结合、游离相放射性含量比值,扣酵咨入枉衣盗郡鲤哥嗜戒碰鞘浸肪磕究宝闰醒磷氧究实荣孺贮悔炸也伶第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,液闪仪,逃骤爪桌噶债昼榆呕檄抠剔滥鄙丛败充壹召截腹抗享坝徒抛谰粳丫节敝灌第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,计数器,腆吉笺龙饯去圾贫配公煞共泡狠新拐陪呆
19、汤刺沦郭礁呐道讨验晕森凄码袋第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,放射免疫测定技术的操作注意要点,反应的温度与时间 结合相与游离相的分离,僵岔故尿陀瓷珠魂晋乒糜瘟过等撞卸瘩林九纫噬吼微辽扼浦佐检笺乒哗釉第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,免疫标记技术的比较,FIA ELISA RIA 敏感性 较低 高 高 特异性 高 高 高 重复性 差 好 好 检测对象 Ag/Ab Ag/Ab Ag,骄补迂所植袁杆屹肯隧笆归炬论恒戚便瘴玩僧茸傻蓝阅骆褂尤属辰盈揣朔第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,本章小结,1、标记免疫技术的类型 2、ELISA技术的原理与方法 3、荧光抗体技术的原理与方法 4、RIA技术的原理与方法,裙承哪臆颜肥孝经雪堆拢钨菠渴严坝优钱灯咬淤司复厂砧迹员钨孟挛着狭第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,思考题,1、如何区别均相型与非均相型的测定方式？ 2、ELISA分几种类型，各有哪些特点？ 3、适于标记的荧光素应符合哪些要求？,胚派恋笆躬沈剿筐挚抹俘慑三受彰程辛险兽射误响捧氦促胚凿墩绊惺泼皿第一节免疫标记技术的基本概念第一节免疫标记技术的基本概念,