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1、土壤硝态氮的测定A 紫外分光光度法1、方法提要土壤浸出液中的 NO3-，在紫外分光光度计波长 210nm 处有较高吸光 度，而浸出液中的其它物质，除 OH-、CO32-、HCO3-、NO2-和有机质等 外，吸光度均很小。将浸出液加酸中和酸化，即可消除OH -、 CO32-、HCO 3-的干扰。 NO2-一般含量极少，也很容易消除。因此，用校正因数法 消除有机质的干扰后，即可用紫外分光光度法直接测定NO 3-的含量。待测液酸化后，分别在 210nm 和 275nm处测定吸光度。 A210是 NO3- 和以有机质为主的杂质的吸光度； A275 只是有机质的吸光度，因为 NO3- 在 275nm 处
2、已无吸收。但有机质在 275nm 处的吸光度比在 210nm 处的吸 光度要小 R 倍，故将 A275 校正为有机质在 210nm 处应有的吸光度后，从 A 210中减去，即得 NO3-在 210nm 处的吸光度 (A)。2、适用范围 本方法适用于各类土壤硝态氮含量的测定。3、主要仪器设备3.1 紫外可见分光光度计；3.2 石英比色皿；3.3 往复式或旋转式振荡机，满足 180r/min ± 20r/min 的振荡频率或达 到相同效果；3.4 塑料瓶： 200mL 。4、试剂4.1H2SO4溶液 (1：9)：取 10mL 浓硫酸缓缓加入 90mL 水中。4.2氯化钙浸提剂 c(CaC
3、l2)=0.01mol·L-1：称取 2.2g 氯化钙 (CaCl2·6H2O，化学纯 )溶于水中，稀释至 1L 。4.3 硝态氮标准贮备液 （N）=100mg · L -1 ：准确称取 0.7217g 经 105110烘 2h的硝酸钾 （KNO 3，优级纯 ）溶于水，定容至 1L ，存放于冰 箱中。4.4 硝态氮标准溶液 （N）=10mg·L-1：测定当天吸到 10.00mL 硝态 氮标准贮备液于 100mL 容量瓶中用水定容。5、操作步骤称取 10.00g 土壤样品放入 200mL 塑料瓶中，加入 50mL 氯化钙浸提 剂，盖严瓶盖，摇匀，在振荡机上
4、于20 25振荡 30min（180r/min ±20r/min） ，干过滤。吸取 25.00mL 待测液于 50mL 三角瓶中，加 1.00mL1 ：9 H 2SO4溶液 酸化，摇匀。用滴管将此液装入 1cm 光径的石英比色槽中，分别在 210nm 和 275nm 处测读吸光值 （A 210和 A275），以酸化的浸提剂调节仪器零点。以 NO 3-的吸光值 （A） 通过标准曲线求得测定液中硝态氮含量。空白测定除 不加试样外，其余均同样品测定。NO3-的吸光值 （A） 可由下式求得：A= A 210- A 275× R式中 R 为校正因数，是土壤浸出液中杂质 （主要是有机质
5、 ）在 210nm 和 275nm 处的吸光度的比值。其确定方法为：A210 是波长 210nm 处浸出液中 NO 3-的吸收值 （A210 硝） 与杂质 （主要是有 机质 ）的吸收值 （A 210杂）的总和，即 A210= A210 硝 + A210 杂，得出 A210 杂 = A210- A210 硝。选取部分土样用酚二磺酸法测得NO3- N 的含量后，根据土液比和紫外法的工作曲线，即可计算各浸出液应有的A 210硝值，即可得出 A210杂。A 275是浸出液中杂质 （主要是有机质 ）在 275nm 处的吸收值 （因为 NO3- 在该波长处已无吸收 ），它比 A210 杂小 R 倍，即 A
6、210 杂=R· A 275，得出校正 因数 R=A 210 杂 / A 275。各不同区域可根据多个土壤测定 R 值的统计平均值，作为其他土壤测 试 NO3-N 的校正因数，其可靠性依从于被测土壤的多少，测定的土壤 越多，可靠性越大。标准曲线的绘制：分别吸取 10mg·L-1NO3-N 标准溶液 0、1.00、 2.00、4.00、6.00、8.00mL ，用氯化钙浸提剂定容至 50mL ，即为 0、0.2、 0.4、 0.8、 1.2、1.6mg/L 的标准系列溶液。各取 25.00mL 于 50mL 三角瓶 中，分别加 1mL1 ： 9 H 2SO4溶液摇匀后测 A
7、210，计算 A210 对 NO3-N 浓 度的回归方程，或者绘制工作曲线。6、计算结果土壤硝态氮，mg·kg-1= (N)V Dm式中： (N) 查标准曲线或求回归方程而得测定液中NO3-N 的质量浓度， mg·L-1；V 浸提剂体积， mL(50mL) ；D浸出液稀释倍数，或不稀释则D=1 ；m土壤质量， g。7、注释 土壤硝态氮含量一般用新鲜样品测定，如需以硝态氮加铵态氮反 映无机氮含量，则可用风干样品测定。一般土壤中 NO2-含量很低，不会干扰 NO 3-的测定。如果 NO 2-含量 高时，可用氨基磺酸消除 (HNO 2+NH 2SO3H=N 2+H2SO4+H2O
8、)，它在 210nm 处无吸收，不干扰 NO3-测定。浸出液的盐浓度较高，操作时最好用滴管吸取注入槽中，尽量避 免溶液溢出槽外，污染槽外壁，影响其透光性。大批样品测定时，可先测完各液 (包括浸出液和标准系列溶液 ) 的A 210值，再测 A275 值，以避免逐次改变波长所产生的仪器误差如需同时测定土壤 NH 4+ N，可选用 2 mol·L-1KCl 或 1 mol ·L -1NaCl 溶液制备待测液。但 2 mol · L -1KCl 溶液本身在 210nm 处吸 光度较高，因此同时测定土壤 NH4+N和 NO3-N时，可选用吸光度较 小的 1 mol · L -1NaCl 溶液为浸提剂。如果吸光度很高 (A>1 时)，可从比色槽中吸出一半待测液，再加 一半水稀释，重新测读吸光度，如此稀释直至吸光度小于0.8。再按稀释倍数，用氯化钙浸提剂将浸出液准确稀释测定。根据北京和河北石灰性 15 个土壤样品的测定结果，校正因素 (R) 的 平均值为 3.6，不同土类的 R 值略有差异，各地可根据主要土壤情况进行 校验，求出当地土壤的 R 值。