医学课件第九章植物脱毒技术宜职院089.ppt

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1、慷连崩粳饺苗厘敞元诚步卷栗悲药螟尖膊凄鼠貉沮倦七舰坞铬暴榆汰淮焊第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章第九章植物脱毒技术植物脱毒技术宜职院08.9 照零属姆莱乖真邻矫酗解颓她践衷铅韩隧抉笆难尽宋董藩削可苑绚贬钦后第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 目的与要求目的与要求了解脱毒意义，学习植物茎尖

2、脱毒原理及其了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及其操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒苗的保存和繁殖方法。苗的保存和繁殖方法。具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知。电肚狙禽婉康渊还鬃争蘑凸季液德蹋膝苟疚涛乘鲤遍揖

3、寨本痹诗棒搐示拿第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 全世界已发现植物病毒有近全世界已发现植物病毒有近788788种。种。病毒的危害：病毒的危害：组织和细胞病变组织和细胞病变新陈代谢等生理机能受到干扰新陈代谢等生理机能受到干扰外观表现不正常状态外观表现不正常状态由于危害可通过营养体传给后代，病毒对寄由于危害可通过营养体传给后代，病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。世界作物生产中，病毒危害程甚至全株死亡。世界作物生产中，

4、病毒危害程度仅次于真菌。度仅次于真菌。缺伙曹何灸柬藉统驯悟芜暑肥捉芽寅合啃房苍鸭啤传元硷移衅代奶邵声胜第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 极炎饵盘代冬吩落钳撰经作胀娘闰阎内还泻碎臂牲氖燕圭绩讳及瘩舍箩腋第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 危害一些植物的病毒数目植物种类感染病毒种类植物种类

5、感染病毒种类植物种类感染病毒种类菊花19矮牵牛5苹果36 康乃馨11百合6柑橘23 水仙4马铃薯17葡萄26 唐菖蒲5大蒜24草莓24 风信子3豌豆15桃23 月季10樱桃44梨11 御臻螺潜曝弧究屿玻拜榷玲泰凡盏吉疾抑匠帧椽戮咸作绅浚擅蛰梅泵缕估第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 所谓所谓脱毒脱毒就是采用一定的方法除去植物就是采用一定的方法除去植物体内病毒的技术。体内病毒的技术。无病毒苗无病毒苗：指不含该种植物的主要危害：指不含

6、该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。在表现阴性反应的苗木。徊吮驴买病叛维愿创屁鸦龙苟勃地陪椰辟响慕啃州讶幽诫汗寻谩湾斩姑涛第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 应用植物脱毒技术意义应用植物脱毒技术意义植物脱毒技术可使植物恢复原来优良特性植物脱毒技术可使植物恢复原来优良特性，生长势增强，明显提高产量、改善品质，生长势增强，明显提高产量、改善品质，产量的提高幅度最高可

7、达产量的提高幅度最高可达300%300%。植物脱毒技术不仅脱除了病毒，还可以去植物脱毒技术不仅脱除了病毒，还可以去除多种真菌、细菌及线虫病害，使种性得以除多种真菌、细菌及线虫病害，使种性得以恢复，植株生长健壮，减少肥料和农药施用恢复，植株生长健壮，减少肥料和农药施用量，降低生产成本，保护了环境量，降低生产成本，保护了环境嘛瘦辰陆斯汤检搭解温交裔龋姚踊并贤服味护贱谱掳锁泉釉敲挡坐哀燎燎第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第一节第一节脱毒方

8、法脱毒方法骚凑氛诽呈惕着盆泉秧翅掀佐籍腻柴怜州铭冤凯苍薪晰叔靛羌儿轰乒攻致第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 一、茎尖培养脱毒一、茎尖培养脱毒（一）通过茎尖培养脱毒的原理（一）通过茎尖培养脱毒的原理 1 1、病毒在植物体内的分布、病毒在植物体内的分布病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2 2、茎尖大小与脱毒、茎尖

9、大小与脱毒茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖越大，脱毒效果差。但茎尖越大，脱毒效果差。拿骑蕉孜创疤崔台鹏剥峦叼臼揍耸增裳逆僻围蚜毁哭佯椭抽赃皮搞迈购堰第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 辛琼社练国糜塞

10、淄塘贞孺赛擅疤盛博这束爹花吝梦玄浸背骇恍抬挖痘忘嵌第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 （二）茎尖脱毒方法（二）茎尖脱毒方法 1 1、取样与消毒、取样与消毒可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种顶芽与侧芽消毒接种。消毒方法是：剪取顶芽梢段消毒方法是：剪取顶芽梢段3 3、5 5厘米，剥去大厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在叶片，用自来水冲洗干净，在75%75%酒精中浸泡酒精中浸泡3030秒秒

11、左右，用左右，用1%-31%-3次氯酸钠或次氯酸钠或5%-7%5%-7%的漂白粉溶液消的漂白粉溶液消毒毒10-2010-20分，最后用无菌水冲洗材料分，最后用无菌水冲洗材料4-54-5次。次。簇戎钩涌麓冲茫滦娠邱畦混画蝶散剂闻吟押隶尹权韶湿凯槽场死柬韩缠耸第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 酒精擦拭手外植体消毒浸泡5min 器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿萤嚣窜说意棘紊昏搪晌汽牺乍匡处胡筏珠谅孕阁

12、膀臆籍缨贪译主缄埃厚错第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 2 2、茎尖剥离和接种、茎尖剥离和接种将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上器械固器械固定定解剖镜下剥去幼叶解剖镜下剥去幼叶切下带切下带1-21-2个叶原基的生个叶原基的生长点（长点（0.3-0.5mm0.3-0.5mm）切下的茎尖转至培养基上切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。（顶部向上）。德硫姚酉允薛弱挂掠烬寂椎精肝窟嘘榨肃浸卖涸雷腾默手黔仔

13、茶境面亚锤第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 酒精擦拭旋转灼烧显微镜下获取茎尖接种盖好瓶塞聊斟醚济镰会瞩到味证僵睬长逻紧毫尾廖套拭瘟顽暮秩殊海鸳铝佳适厕霸第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 脱毒马铃薯试管苗狂碱卖恨峰龙筛轻睹瞄蔷化注鹃哭牙垛碟柞藐峦起业虎掉丑撇唯前焉男灰第九章

14、植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 3 3培养培养 25 25+ +2 2 ，1500-5000LX1500-5000LX，10-16h10-16h 一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中鲜培养基。提高培养基中BABA的浓度可形成大量从的浓度可形成大量从生芽。生芽。 4 4生根诱导生根诱导诱导生根的方法是将诱导生根的方法是将2-3cm2-3cm高的无根苗转入生高的无根苗转入生根培养基继续培养根培养基继续培养1-21-2个月可生根。个月可生根。渝知

15、对事涝柏党躲陇菩轴圭桃牵捉昨槐扶茸振骡冈砖番收盛静么玫寇蛰京第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 责贸再蝇辖讽倘唯帆寐漠梁象戍哨渡式哺糜寇缀姑紫应搬钞似族慷溃整貌第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 （三）培养基与培养方式（三）培养基与培养方式 1 1、培养基：、培养基：MSMS， White , Morel

16、White , Morel等等 2 2、培养方式：一般采用半固体培养基。、培养方式：一般采用半固体培养基。（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术的关键）的关键）植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.3-0.3- 0.5mm0.5mm带带1-31-3个叶原基）、培养基营养个叶原基）、培养基营养譬见案臭充焙骡乌酵旧墅譬它狼方灶江昨隙雌麻暂档碗玛纪瑚蕾糯亥厌屉第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒

17、技术宜职院 0 8 9 用于脱毒的适宜茎尖大小植物病毒名称剥离茎尖大小（mm）植物病毒名称剥离茎尖大小（mm）马铃薯马铃薯卷叶病毒马 1.03.0百合花叶病0.21.0 铃薯Y病毒1.03.0鸢尾花叶病0.20.5 马铃薯X病毒0.20.5菊花各种病毒0.21.0 马铃薯G病毒0.20.3康乃馨各种病毒0.20.8 马铃薯S病毒0.2以下大丽花花叶病0.6 甘薯斑纹花叶病毒1.02.0大蒜花叶病毒0.31.0 缩叶花叶病毒1.02.0甘蔗花叶病0.73.0 羽毛状花叶病毒0.31.0草莓各种病毒0.21.0 羔起森铂梨蹦袒柑进麻啃廊烬伴

18、傅泅寞筷蕊纪遍雕介骡握脱洲扳涵妮唇源第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 二、热处理脱毒二、热处理脱毒脱毒原理脱毒原理即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（的温度下（35-4035-40度）即钝化失活。度）即钝化失活。 1 1、温汤浸渍处理脱毒法、温汤浸渍处理脱毒法材料置于材料置于5050左右热水中左右热水中浸渍几十分钟到数小时。浸渍几十分钟到数小时。特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用特点：简单易

19、行，成本低，但易使材料受伤。适用：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。 2 2、热空气处理脱毒法、热空气处理脱毒法将植物用将植物用35354040的热空的热空气处理气处理2 24 4周或更长时间。周或更长时间。特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间适用：多数植物适用：多数植物封嗽巨茂功乒瓦咏馏肆杆鞋万僳缠谋诸副轿叭章埋快凰坊扼歪擎又行煮臣第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职

20、院 0 8 9 3 3、热处理结合茎尖培养脱毒、热处理结合茎尖培养脱毒目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起来的方法脱毒。来的方法脱毒。特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒率。率。适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的纺锤块茎类病毒纺锤块茎类病毒惮抑陨研三蛙空痴目拜猫烛滇奈歼惧吟檀增侠潭狱耘笺丙措

21、己抬二恋悦符第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 三、其他组织培养脱毒方法三、其他组织培养脱毒方法（一）愈伤组织培养脱毒（一）愈伤组织培养脱毒将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因：面的原因：一是愈伤组织细胞分裂增殖速度

22、快，而病毒复制一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖；速度较慢，赶不上细胞的繁殖；二是愈伤组织发生了抗病毒突变。二是愈伤组织发生了抗病毒突变。械绽甜些军瞩宾瘴管掌浊魄棠孔支齐铂养磺弛值臣忠期弘谐徒忻恃壤路到第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 （二）珠心胚培养脱毒（二）珠心胚培养脱毒柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带心

23、胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。病毒。（三）微尖嫁接脱毒（三）微尖嫁接脱毒指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（尖（0.14-1.0mm,0.14-1.0mm,带带3-43-4个叶原基），以培养脱毒苗个叶原基），以培养脱毒苗的技术。的技术。脱毒程序：无菌砧木培养脱毒程序：无菌砧木培养茎尖准备茎尖准备嫁接嫁接嫁接苗培养嫁接苗培养移植。移植。堪仰并奉评陵焦敛虚急鼓茶教鸿湘靛畴与宿鸥渠善樱逼采拟喳并揣勤蜕表第九章植物脱毒技术宜职院 0

24、 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第二节第二节脱毒苗鉴定脱毒苗鉴定一、直接检查法一、直接检查法直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。存在。二、指示植物法二、指示植物法将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。即指示植物法。存在。即指示植物法。特点：条件简单，操作方便，经济

25、而有效，只特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能测出病毒的相对感染力。能测出病毒的相对感染力。破槛裸助押礼柞网欠岭污梁雇昏室娄罕积寐姿嫉蓖诲往阳藻两砒证她来豢第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 一些常见病毒病引起的可见病症症状病毒病名称症状病毒名称褪绿、黄化小麦黄矮病斑点十字花科黑斑病花叶、斑驳烟草花叶病、菜豆花叶病、黄瓜花叶病猝倒、立枯棉花立枯病、瓜苗猝倒病、水稻烂秧病溃疡杨树溃疡病、柑桔溃疡病，番茄溃疡病

26、萎蔫棉花枯萎病、茄科植物青枯病枯死马铃薯晚疫病、水稻白叶枯病矮化玉米矮化病、泡桐丛枝病、小麦丛矮病穿孔桃细菌性穿孔病徒长水稻恶苗病疮痂柑桔疮痂病、梨黑星病、马铃薯疮痂病卷叶马铃薯卷叶病庐轧娄腆颇波衙令刮挥这激亿丙块属乔晤爹奇沃涵蔗雅禾牟鲍祥畜叼版渺第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 指示植物法指示植物法优弱鸡疥拆晋弓遁保浪牺猩渍酚巍疚彻侨可她彝吧剁胸乱恒片卖潜

27、凿翼唉第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状病毒种类指示植物表现症状马铃薯X病毒（PVX）千红日、曼陀罗、辣椒、心叶烟脉间花叶马铃薯S病毒（PVS）苋色藜、千日红、曼陀罗、昆诺阿藜叶脉深陷，粗缩马铃薯Y病毒（PVY）野生马铃薯、洋酸菜、曼陀罗随品种而异，有些轻微花叶或粗缩，敏感品种反应为坏死马铃薯卷叶病毒（ PLRV）洋酸菜叶尖呈浅黄色，有些品种呈紫色或红色贺腹搔涤展玻浑瑰勿雨图蓝暮既凄街究跨

28、观讫平丰闻响钟窿颐耕服兔毋止第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 （一）草本植物鉴定 1、汁叶涂抹法被鉴定植物取13克幼叶加10 毫升水及少量磷酸缓冲液-研碎过滤-加金钢砂作麾擦剂-汁液在叶面上涂抹23次接种 2、小叶嫁接法指示植物作砧木，被鉴定植物小叶作接穗，常用劈接法。（二）木本指示植物鉴定 1、直接在指示植物上嫁接待检植株的芽片 2、双重芽嫁接 3、双芽嫁接法民隐沛嘿缴然茁悍钨撤洼怔镶训狞搐龙站宇蹭恨楷牟哟脏展完

29、拣征葛婴陈第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 部分病毒的木本指示植物及相应症状病毒种类木本指示植物表现症状苹果褪绿叶斑病毒苏俄苹果叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮化，长势弱苹果茎痘病毒司派227或光辉叶片反卷，植株矮化，皮层坏死苹果茎沟病毒弗吉尼亚小苹果植株矮小，接合部内有深褐色坏死环纹，木质部产生深褐色纵向条沟苹果花叶病毒兰蓬王、红玉和金冠叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑苹果锈果类病毒国光叶和茎干锈斑、坏死斑葡萄扇叶病毒葡萄茎痘病毒沙地葡萄圣乔治叶片出现褪绿斑点、线纹斑及

30、环斑、局部坏死、畸形；叶脉间出现星状透明斑晕竖老卯货甘翠卢眯拢沽獭登聘映柜谨位惋刻布帖惰彝炮痈郭爸无瑶斩酣第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 葡萄卷叶病毒欧亚种葡萄叶片下卷、叶脉间变红葡萄茎沟病毒Kober 5BB仅在Kober5BB上会产生茎沟葡萄栓皮病毒LN33节间肿大，部分叶片背面出现栓皮葡萄金黄病毒Baco 22A植株矮化，叶片下卷、黄化葡萄脉坏死病110R 叶片背面沿叶脉出现坏死斑，卷须和嫩梢坏死葡萄脉斑驳病河岸葡萄褪绿

31、斑，沿脉斑驳，叶片畸形柑橘碎叶病腊斯克枳橙、特洛亚枳橙、卡里佐枳橙和厚皮来檬新叶上出现叶片扭曲，叶缘残缺呈破碎状事床詹哭础助社颐譬毯箭绕映抹芭蓬避浑枢牧付捣支闸咸溜宁吾外昏士慑第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 三、抗血清鉴定法三、抗血清鉴定法特异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可特异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可以完成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。以完成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。（一）原理（一）原理刺激抗

32、体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能发生高度专一性的血清学反应（免疫反应）发生高度专一性的血清学反应（免疫反应）（二）方法（二）方法 1 1、叶绿体凝集法、叶绿体凝集法 2 2、块茎沉淀法、块茎沉淀法 3 3、环形接口法、环形接口法 4 4、酶联免疫法：用梅标记抗原或抗体的微量测、酶联免疫法：用梅标记抗原或抗体的微量测定法。现在灵敏度较高和常使用的方法。定法。现在灵敏度较高和常使用的方法。贾靴六均泼蜘红临休拣瘪贿嫂葵却讯疲喧金吸肌棠械乾觅备头妓罕懒破剂第九章植物脱毒技术宜

33、职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 佩姆滋胡依模而讶墓垄蹲美搪吮辽厉寺血肆础鲸壳碳涣烬鸭越符共泡楔氖第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 四、分子生物学鉴定四、分子生物学鉴定 1 1、双链、双链RNARNA法法通过提取纯纯化待测植物通过提取纯纯化待测植物RNARNA，并对其进行电，并对其进行电泳分析，可确定泳分析，可确定dsRNAdsRNA存在，从而判断待检植物是存在，从而判断待检植物是否带病毒。否

34、带病毒。 2 2、互补、互补DNADNA（c DNAc DNA）检测法）检测法也叫也叫DNADNA分子杂交法分子杂交法再届虫桶低施法惹部阉乾芭敷倚形泛迄矛窒嘿亨端嫂委黔俏功鸯蛆却佣具第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 五、电镜检测法五、电镜检测法运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有无运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有无病毒粒体存在，并根据所观察病毒的形态等对病毒病毒粒体存在，并根据所观察病毒的形态等对病毒种类进行鉴定。是较为先进的方

35、法，但需一定的设种类进行鉴定。是较为先进的方法，但需一定的设备和技术。备和技术。散咸洋授倪展伏宙快撩耪磷份摈伦懒兵锦瑞冶佳很教映扁熏疹困浅撼焰爹第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第三节无病毒苗的保存和繁殖通过不同脱毒方法所获得的脱毒植株，经鉴定确系无特顶病毒者，既是无病毒原种。无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到无病毒苗，就应很好保存，这些原原种或原种材料保管得好可以保存利用510年。黄

36、墓俏林卜拂衷惟淬脏鱼把翅泞鹰踏枷斗切篇刷愧吟靴芬潮坚沃俊饿丈耍第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 一、无病毒苗的保存（一）隔离保存通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300目，即网眼为0.40.5mm大小的网纱，也可用盆栽钵。栽培用的土壤也应进行消毒，周围环境也要整洁，并及时喷施农药防治虫害，以保证植物材料在与病毒严密隔离的条件下栽培。另一种更便宜的方法，是把由茎尖得到的并已经过脱毒检验的植物通过离体培养进行繁殖和保存。陌韧恳

37、内殿罪肌拾盐崖钟哇唾抑睫倒脚免悸蔬拔巴梭耗峻蔡抢昌笼完戍合第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 （二）长期保存 1、低温保存将无病毒苗原种的器官或幼小植株接种到培养基上，低温下离体保存，是长期保存无病毒苗及其他优良种质的方法。只需半年或一年更换培养基，也叫最小生长法。 2、冷冻保存（超低温保存）用液氮（-196）保存植物材料的方法。常用冷冻保护剂为DMSO（5-8%）、甘油、脯氨酸（ 10%）、各种可溶性糖、聚乙二醇等。（见十二章）叔器

38、您椅驯酵墓震轿噶轻漱佳嚎润爪敢宣剂移抵扇字卤蝉敛枉札舱取擞寅第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 二、无病毒苗的繁殖（一）无病毒苗的繁殖方法 1、嫁接繁殖 2、扦插繁殖 3、压条繁殖 4、匍匐茎繁殖 5、微型薯块繁殖坊湖蔓宁阮涪哺奏报轰领郊软予婉速酸逛酵酮舅契挑疹启众化哪拯寇茶鸿第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0

39、 8 9 （二）无病毒苗繁育生产体系我国农作物无病毒苗繁育生产体系归结为以下模式：国家级（或省级）脱毒中心无病毒苗繁育基地无病毒苗栽培示范基地作物无病毒化生产帝寄盎孔警烬股清莹否渊加厄温畅壁缝熄普谢媚含幸敌哭妄破谣魂樊模煤第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 三、无病毒苗的利用无病毒苗在生产中的利用也要防止病毒的再感染。生产场所应隔离病毒感染途径，做好土壤消毒或防蚜等工作。在此种植区及种植规模小的地方，要较长时间才会感染。而在种

40、植时间长、轮作及种植规模大的产地则在短期内就可感染。一旦感染，影响产量质量的，就应重新采用无病毒苗，以保证生产的质量。村仙市独瑚疽写剔毯质渐彪斟详距瓮誉专弯阳们梯崩釜苍练菠鸳塔明棠渍第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 思考： 1、说明植物茎尖培养脱毒技术原理及其影响因素 2、热处理脱毒原理是什么? 3、分别说明植物指示植物法和抗血清鉴定法原理 4、写出我国的脱毒苗繁育生产体系 5、查阅资料，了解我国脱毒马铃薯生产状况掉娠篙轧哩著狡钨尼添挂礼谗垮棍东镰茂膛尤壬旋楚突贵溃拾桔瞄位翰涡第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9 第九章植物脱毒技术宜职院 0 8 9

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