《实验二细胞器的分离.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验二细胞器的分离.doc（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、实验二 细胞器的分离、提取与测量【目的】掌握叶绿体分离的一般原理和方法，学习用测微尺测量细胞与细胞器大小的测定方法， 并了解应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。【原理】叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器， 能发生特有的能量转换。 利用低速离心机可以 分离叶绿体，其分离在等渗溶液 （0.35 molL 氯化钠或 0.4mol L蔗糖溶液 ） 中进行，目的 是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。将匀浆液在 1000r min 离心，去除其中的组 织残渣和一些未被破碎的完整细胞，然后，3000 r min 离心，可获得沉淀的叶绿体 （混有部分细胞核 ） 。在室温下进行分离要迅速。用显微测微尺可以
2、直接测量细胞大小， 精确度较高。 显微测微尺分为物镜测微尺和目镜 测微尺 2 种。目镜测微尺是 1 块小玻璃圆片 （可放人目镜内， 其大小正好卡人目镜筒内 ） ，在 圆片正中央刻有 1cm长的直线，直线上均匀分为 100小格或 50 小格，每小格的长度，随目 镜和物镜的放大倍数而变动。物镜测微尺是一块特制的玻璃载片，载片中央刻有一条 1mm 长的直线，均匀地刻分为 100 个小格，每小格为 1 100mm （为 10m） ，用一小圆形玻璃盖 片封盖着， 物镜测微尺较目镜测微尺小格的间距精确， 通过目镜测微尺测量细胞与细胞器的 大小（小格数 ） ，然后换以物镜测微尺校测小格数的精确数值，即为测量
3、的细胞与细胞器大小结果。某些物质在一定短波长的光 （ 如紫外光 ）的照射下吸收光能进入激发态， 从激发态回到基 态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光（如可见光 ） ，这种光就称为荧光。若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光 （ 称 为自发荧光 ） ，如叶绿素的火红色荧光。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后 同样也能发出荧光 （ 称为间接荧光 ） ，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。【材料】菠菜叶片。【 实验用品 】1 试剂：蒸馏水， 0.35 mol L氯化钠溶液， 0.01% 吖啶橙。2 器材：普通离心机，组织捣碎机，天平，荧光
4、显微镜，显微镜，载玻片，盖玻片， 镊子，接种针，滤纸，试管，试管架，移液管，滴管，烧杯，无荧光载片，盖玻片，离心管， 目镜测微尺，物镜测微尺，培养皿。【 实验步骤 】1 选取新鲜的菠菜嫩叶，洗擦干后去除叶梗及粗脉，称 3g于 0.35 molL 氯化钠溶液 45mL中，置人组织捣碎机或研钵中。2 利用组织捣碎机低速 （5000r min） 匀浆 3-5min ，或研磨成匀浆。3 用 6 层纱布过滤，滤液盛于烧杯中。4 取滤液 4 mL 在 1000 r min 下离心 2min ，弃去沉淀。5 将上清液在 3000 r min 下离心 5 min ，弃去上清液，沉淀即为叶绿体 （ 混有部分细
5、胞核 ） 。6 沉淀用 0.35mol L 氯化钠溶液悬浮。7取叶绿体悬液 1 滴置于载玻片上，加盖玻片后用普通光学显微镜观察、绘图。8将物镜测微尺放在载物台上，校准目镜测微长度：在低倍显微镜下，移动镜台测微 尺和转动目镜测微尺，使两者刻度平行， 并使两者间某段的起、止线完全重复。数出两条重 合线之间的格数， 即可求出目镜测微尺每格的相应长度。 目镜测微尺与物镜测微尺两者重合 点的距离越长， 所测得的数字越准确。 用同样方法分别测出高倍物镜下， 目镜测微尺每格的 相对长度。计算目镜测微尺每格的长度：例如，测得某显微镜的目镜测微尺 50 格相当于物 镜测微尺 7 格，则目镜测微尺每格长度为： （ 7X10m） /50=1.4 m格。9. 测量 5 10 个叶绿体的长轴和短轴，制表格表示测量结果。10. 取菠菜叶片于研钵中，加少量丙酮，研磨匀浆、过滤，滤液置于试管中，顺着太阳 光观察，再将试管避开直射光，比较颜色的变化。【 实验报告 】1. 绘制普通光学显微镜下观察的叶绿体形态示意图。2. 用测微尺测量叶绿体的大小后，制表格表示测量结果。3. 记录观察的荧光现象，分析结果。【思考题】1 分离叶绿体的实验原理是什么 ?2操作过程中应注意什么 ?