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1、5.3 血红蛋白的提取和分离 班级 姓名 1. 使用凝胶色谱法分离蛋白质时，洗涤红细胞、释放血红蛋白和透析过程中，分别使用下列哪些试剂()蒸馏水 生理盐水 20 mmol/L的磷酸缓冲液 清水 柠檬酸钠A B C D2. 在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是 ( )A磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 B血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和C防止血红蛋白被02氧化 D让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能3在盛有红褐色的Fe(OH)3胶体的U形管的两个管口，各插一个电极，通直流电后，发现阴极附近的颜色逐渐加深，这说明 ( )AFe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阴极移
2、动 BFe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阳极移动CFe(OH)3胶体粒子带正电荷，向阳极移动 DFe(OH)3胶体粒子带负电荷，向阴极移动4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是()A.蛋白质分子所带的电荷 B.蛋白质分子的形状C.蛋白质分子的相对分子质量 D.缓冲溶液的pH5.用凝胶色谱法分离蛋白质的实验中,相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中哪一个()6.有关缓冲溶液的说法不正确的是()A.缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变B.缓冲溶液通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而成C.调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同
3、pH范围内使用的缓冲液D.生物体内进行的各种生物化学反应都是在相同的pH下进行的7.血红蛋白的提取和分离中,将搅拌好的混合液转移到离心管中,离心后,可以明显看到试管中的溶液分为4层,其中第3层是()A.无色透明的甲苯层 B.脂溶性物质的沉淀层C.血红蛋白的水溶液 D.其他杂质的暗红色沉淀物来源:Z.xx.k.Com8.下列操作正确的是()A.分离红细胞时采用低速长时间离心 B.红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C.分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D.透析时要用20 mmol/L的磷酸缓冲液,透析12 h9.通过样品处理和粗分离得到的血红蛋白溶液,还含有其他种类的蛋白质分子(如呼吸酶等)
4、。常用凝胶色谱法将杂蛋白与血红蛋白分离开来，对血红蛋白进行纯化。以下做法、说法不正确的是()A.凝胶色谱分离蛋白质包括:制作色谱柱、装填色谱柱、样品加入和电泳B.色谱柱的装填过程要注意:装填前凝胶需要充分溶胀、装填要均匀、尽量紧密,降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液洗涤平衡不能断流C.样品加入和洗脱的基本过程是:调节缓冲液面加入蛋白质样品(不能破坏凝胶面)调节缓冲液面洗脱红色区带均匀地移动标志着成功收集分装蛋白质。最后将纯化的样品进行电泳鉴定D.如果红色区带移动不均匀、歪斜、散乱、变宽等,其主要原因是色谱柱的装填有问题10.有关凝胶色谱法和电泳法的说法正确的是()A.它们都是分离蛋白质的重要方法 B
5、.它们的原理相同C.使用凝胶色谱法需要使用缓冲溶液而电泳不需要 D.以上说法都正确11.下列关于凝胶色谱法的原理及操作不正确的是()A.是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法B.在洗脱过程中,大分子不能进入凝胶内部而最先流出,小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢,最后流出C.凝胶内部有很微细的多孔网状结构,其空隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系D.一般情况下,凝胶对要分离的物质没有吸附作用,因此所有要分离的物质都应该被洗脱出来12.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子,分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示,下列有关蛋白质分离的叙述正确的是 () A.若将样品以2 000
6、 r/min的速度离心10 min,分子戊在沉淀中,则丙也一定在沉淀中B.若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质,则分子甲移动速度最快C.将样品装入透析袋中透析12 h,若分子丙保留在袋内,则乙也一定保留在袋内D.若用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子,则分子甲和分子丁形成的电泳带相距最远13.在蛋白质的提取和分离中,关于对样品处理过程的分析正确的是()A.洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B.洗涤前,应进行快速离心,分离出暗红色的红细胞液体C.洗涤过程选用0.1%的生理盐水D.透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质14.下列说法不正确的是()A.透析袋是一种选择透过性
7、膜,大分子物质不能通过此膜,离子和小分子能够通过此膜B.在透析过程中,血红蛋白溶液中的离子和小分子不断通过半透膜扩散进入到pH=7的磷酸缓冲液中C.使用pH=7的磷酸缓冲液是为了维持血红蛋白的正常特性D.缓冲液量远多于血红蛋白溶液量有利于杂质分子充分地向外扩散15.以下对DNA和血红蛋白的提取与分离(鉴定)实验的分析正确的是()A.都要用猪血细胞来做实验B.在DNA的粗提取与鉴定实验中,有两次DNA析出,所依据的原理相同C.在实验中都要进行除杂处理,以便得到较纯净的DNA或血红蛋白D.将析出的DNA溶解在2 mol/L的NaCl溶液中,加入二苯胺试剂后呈现蓝色题号123456789101112
8、131415答案16.商品化植酸酶主要来自微生物,首先筛选出产酶的菌株,然后制备植酸酶。请根据下面的流程图回答问题:(1)中的主要成分有哪些? ；中包含哪些成分?_。(2)请写出一种纯化得到植酸酶的方法: ；其依据是_。17.凝胶色谱技术是一种快速而又简单的分离技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,故对高分子物质有很好的分离效果。目前凝胶色谱技术已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛应用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。据图回答问题。(1)a、b均为蛋白质分子,其中先从层析柱中洗脱出来的是, 原因是 。(2)自己制作凝胶色谱柱时,
9、在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由 替代。(3)装填凝胶色谱柱时,色谱柱内不能有气泡存在,原因是 。(4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体(填“相同”或“不同”)。洗脱时,对洗脱液的流速要求是 。18.血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2和部分CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。(1)将实验流程补充完整。(2)凝胶色谱法的基本原理是根据 分离蛋白质。(3)洗涤红细胞的目的是去除 ,洗涤干净的标志是 。(4)下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入示意图,正确的加样顺序是 。(5)如果红色区带 ,说明色谱柱制作成功。5.3 血红蛋白的提取
10、和分离限时训练参考答案：题号123456789101112131415答案CDACBDCDAACADAC16.(1)小分子杂质 植酸酶等多种蛋白质(2)凝胶色谱法 根据蛋白质之间分子大小差异进行纯化(或电泳法 根据蛋白质之间电荷、分子大小等差异进行纯化)17.(1)a a相对分子质量较大,无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快(2)尼龙网和100目的尼龙纱(3)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果(4)相同 保持稳定18.(1)血红蛋白的释放 凝胶色谱柱的装填(2)相对分子质量的大小(3)杂蛋白(或血浆蛋白) 离心后的上清液中没有黄色(4)(5)均匀一致地移动