1、不常见细菌耐药表型结果探讨不常见细菌耐药表型结果探讨胡付品胡付品胡付品胡付品华山医院抗生素研究所华山医院抗生素研究所华山医院抗生素研究所华山医院抗生素研究所药物敏感性试验方法药物敏感性试验方法l稀稀释法法p试管稀释法（肉汤稀释法）p平板稀释法（琼脂稀释法）p微量肉汤稀释法l扩散法（散法（纸片法）片法）pKirby-bauer（K-B）法lE-testl自动化仪器纸片扩散法纸片扩散法纸片扩散法纸片扩散法l原理：将浸有抗菌原理：将浸有抗菌药物的物的纸片片贴在涂有在涂有细菌的菌的琼脂平板脂平板上，抗菌上，抗菌药物在物在琼脂内向四周脂内向四周扩散，因此敏感散，因此敏感细菌在菌在纸片周片周围一定距离内的
2、生一定距离内的生长受到抑制。受到抑制。如何制备菌悬液？如何制备菌悬液？如何制备菌悬液？如何制备菌悬液？正确测量苯唑西林、万古霉素和利奈唑胺对葡萄球菌；以正确测量苯唑西林、万古霉素和利奈唑胺对葡萄球菌；以正确测量苯唑西林、万古霉素和利奈唑胺对葡萄球菌；以正确测量苯唑西林、万古霉素和利奈唑胺对葡萄球菌；以及万古霉素对肠球菌的抑菌圈直径及万古霉素对肠球菌的抑菌圈直径及万古霉素对肠球菌的抑菌圈直径及万古霉素对肠球菌的抑菌圈直径透射光透射光反射光反射光不要用反射光不要用反射光要使用透射光要使用透射光大肠埃希菌污染肠球菌；大肠埃希菌污染肠球菌；大肠埃希菌污染肠球菌；大肠埃希菌污染肠球菌；菌落再次纯分菌落再
3、次纯分菌落再次纯分菌落再次纯分铜绿假单胞菌有耐药菌落铜绿假单胞菌有耐药菌落铜绿假单胞菌有耐药菌落铜绿假单胞菌有耐药菌落抑菌圈内有菌落，怎么办抑菌圈内有菌落，怎么办抑菌圈内有菌落，怎么办抑菌圈内有菌落，怎么办?第第第第1 1问：如何解释阿米卡星对大肠埃希菌的抑菌现象？问：如何解释阿米卡星对大肠埃希菌的抑菌现象？问：如何解释阿米卡星对大肠埃希菌的抑菌现象？问：如何解释阿米卡星对大肠埃希菌的抑菌现象？阿米卡星阿米卡星厄他培南厄他培南J.Exp.Med.,Jul 1948;88:99-131药物：青霉素药物：青霉素药物：青霉素药物：青霉素G G细菌：细菌：细菌：细菌：-溶血性链球菌溶血性链球菌溶血性链
4、球菌溶血性链球菌矛盾的现象矛盾的现象矛盾的现象矛盾的现象 (EagleEagle现象现象现象现象)l指抗菌药物在高浓度的时候反而降低杀菌活性指抗菌药物在高浓度的时候反而降低杀菌活性l这种现象第一次由这种现象第一次由Eagle和和Musselman两位科学家两位科学家发现并报道。发现并报道。l青霉素类抗菌药物在作用于葡萄球菌、青霉素类抗菌药物在作用于葡萄球菌、溶血性溶血性链球菌以及肠球菌时出现药物低浓度（仍超过链球菌以及肠球菌时出现药物低浓度（仍超过MIC值）时抗菌活性好于高浓度。值）时抗菌活性好于高浓度。J.Exp.Med.,Jul 1948;88:99-131第第2问：金黄色葡萄球菌问：金黄
5、色葡萄球菌D试验试验lerm基因编码改变的核糖体结构基因编码改变的核糖体结构(23S rRNA甲基化甲基化)，导致对大环内酯类和林可，导致对大环内酯类和林可霉素类耐药。霉素类耐药。lerm 基因需诱导，红霉素具诱导作用。基因需诱导，红霉素具诱导作用。l若出现红霉素若出现红霉素R而克林霉素而克林霉素S，但，但D试验阳试验阳性。若未进行性。若未进行D试验，克林霉素很可能会试验，克林霉素很可能会被报告敏感而误导临床用药。被报告敏感而误导临床用药。表型表型结果结果克林霉素报告克林霉素报告红霉素耐药红霉素耐药(R)阴性阴性敏感敏感(S)评论或解释：该菌不表现为体外诱导型克评论或解释：该菌不表现为体外诱导
6、型克林霉素耐药。林霉素耐药。红霉素耐药红霉素耐药(R)阳性阳性耐药耐药(R)评论或解释：该菌表现为体外诱导型克林评论或解释：该菌表现为体外诱导型克林霉素耐药，用克林霉素治疗可能无效。霉素耐药，用克林霉素治疗可能无效。第第第第3 3问：如何解释万古霉素问：如何解释万古霉素问：如何解释万古霉素问：如何解释万古霉素E-E-试验结果？试验结果？试验结果？试验结果？l万古霉素依万古霉素依赖的的粪肠球菌球菌l长期使用包括糖期使用包括糖肽类、氨基糖、氨基糖肽类等等l抗生素抗生素压力下，必力下，必须依依赖万古霉素才能生万古霉素才能生长The change at the ninth codon resulted
7、 in the inactivation of the ddl gene andvancomycin-dependent growth.第第第第4 4问：铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药？问：铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药？问：铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药？问：铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药？第第第第4 4问：铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药？问：铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药？问：铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药？问：铜绿假单胞菌对复方新诺明天然耐药？20112011年年年年CHINETCHINET监测监测监测监测69816981株克雷伯菌属耐药率（株克雷伯菌属耐药率（株克雷伯菌属
8、耐药率（株克雷伯菌属耐药率（%）第第第第5 5问：肺炎克雷伯菌体外药敏结果会显示对氨苄问：肺炎克雷伯菌体外药敏结果会显示对氨苄问：肺炎克雷伯菌体外药敏结果会显示对氨苄问：肺炎克雷伯菌体外药敏结果会显示对氨苄西林敏感吗西林敏感吗西林敏感吗西林敏感吗?l肺炎克雷伯菌对氨苄西林肺炎克雷伯菌对氨苄西林天然耐药天然耐药是是天然产天然产SHV型酶型酶n160株肺杆中20株对氨苄西林敏感l19株细菌SHV基因出现“点突变”，mRNA 逆转录失败，无法翻译出由SHV基因正确编码的-内酰胺酶。第第第第6 6问：大肠埃希菌对头孢噻肟的耐药机制？问：大肠埃希菌对头孢噻肟的耐药机制？问：大肠埃希菌对头孢噻肟的耐药机制
9、问：大肠埃希菌对头孢噻肟的耐药机制？第第第第7 7问：如何解释大肠埃希菌对头孢唑啉问：如何解释大肠埃希菌对头孢唑啉问：如何解释大肠埃希菌对头孢唑啉问：如何解释大肠埃希菌对头孢唑啉S S但头孢呋辛但头孢呋辛但头孢呋辛但头孢呋辛R R的现象？的现象？的现象？的现象？头孢呋辛头孢呋辛头孢呋辛头孢呋辛头孢唑林头孢唑林头孢唑林头孢唑林头孢呋辛酶头孢呋辛酶可水解可水解头孢呋辛但头孢呋辛但不能水解不能水解头孢唑啉头孢唑啉第第第第8 8问：大肠埃希菌纸片法药敏结果，结果可能吗？问：大肠埃希菌纸片法药敏结果，结果可能吗？问：大肠埃希菌纸片法药敏结果，结果可能吗？问：大肠埃希菌纸片法药敏结果，结果可能吗？头孢唑
10、林头孢唑林头孢唑林头孢唑林 S S 头孢他啶头孢他啶头孢他啶头孢他啶R R 2005 年，Ling Ma发现一株大肠埃希菌具有特殊的耐药表型，该菌对氨苄西林和头孢他啶耐药，但对头孢西丁、头孢曲松、头孢噻肟、亚胺培南和头孢唑啉敏感。分子生物学试验研究结果证实，该菌产SHV-57 型ESBL第第第第9 9问：这株大肠埃希菌可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌可能的耐药机制是什么？第第第第1010问：这株铜绿假单胞菌可能的耐药机制是什么？问：这株铜绿假单胞菌可能的耐药机制是什么？问：这株铜绿假单胞菌可能的耐药机制是什
11、么？问：这株铜绿假单胞菌可能的耐药机制是什么？可能的机制：可能的机制：1、膜孔蛋白缺失：膜孔蛋白缺失：导致亚胺培南耐药2、AmpC酶：酶：对头孢西丁耐药3、ESBL：对头孢他啶和头孢吡肟耐药产产产产ESBLESBL菌株的检测菌株的检测菌株的检测菌株的检测含酶抑制剂复合制剂与相应单药抑菌圈直径相差5mm，即判断该菌为产ESBLs菌株头孢他啶/克拉维酸：0.19g/mL头孢他啶：0.5g/mL =2.63头孢他啶/克拉维酸：0.19g/mL头孢他啶：32g/mL =168第第1111问：该菌一定为产问：该菌一定为产ESBLESBL菌株？菌株？MIC比值比值假阳性结果假阳性结果第第第第1212问：如
12、何解释这株大肠埃希菌的药敏结果？问：如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果？问：如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果？问：如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果？l耐耐药p阿莫西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢哌酮p阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦l敏感敏感p头孢噻肟、头孢他啶第第第第1212问：如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果？问：如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果？问：如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果？问：如何解释这株大肠埃希菌的药敏结果？lESBL确确证试验阴性阴性l本株本株细菌菌产生生TEM-1型型内内酰胺胺酶、膜孔蛋白缺失。、膜孔蛋白缺失。l头孢西丁的耐西丁的耐药性可能是
13、由膜孔蛋白缺失所致，而非性可能是由膜孔蛋白缺失所致，而非-内内酰胺胺酶lPa/Pb调控控TEM-1b高表达所致，高表达所致，强启启动子子Pa/Pb是由弱启是由弱启动子子P3经32CT突突变而成而成第第第第1313问：肠杆菌科细菌对头孢西丁耐药就表示细菌产问：肠杆菌科细菌对头孢西丁耐药就表示细菌产问：肠杆菌科细菌对头孢西丁耐药就表示细菌产问：肠杆菌科细菌对头孢西丁耐药就表示细菌产AmpC AmpC 酶吗？酶吗？酶吗？酶吗？l肠杆菌科杆菌科细菌菌对头孢西丁耐西丁耐药只能表示只能表示该菌是菌是产AmpC 的的可疑菌株。可疑菌株。l某些某些类型的型的ESBL 也能水解也能水解头孢西丁西丁1234123
14、4123420092009年年年年1414家医院大肠埃希菌的耐药率（家医院大肠埃希菌的耐药率（家医院大肠埃希菌的耐药率（家医院大肠埃希菌的耐药率（%）（）（）（）（CHINETCHINET监测）监测）监测）监测）抗菌药物抗菌药物耐药率耐药率抗菌药物抗菌药物耐药率耐药率产产ESBL(4515株株)非产非产ESBL(3477株株)产产ESBL(4515株株)非产非产ESBL(3477株株)阿米卡星阿米卡星10.14.3头孢吡肟头孢吡肟36.96.5庆大霉素庆大霉素61.840.3头孢哌酮头孢哌酮/舒巴坦舒巴坦7.42.4哌拉西林哌拉西林97.849.5头孢西丁头孢西丁13.27.2哌拉西林哌拉西林
15、/他唑巴坦他唑巴坦5.04.1亚胺培南亚胺培南0.20.6头孢唑林头孢唑林98.426.4美罗培南美罗培南0.30.5头孢呋辛头孢呋辛98.016.5厄他培南厄他培南0.51.1头孢噻肟头孢噻肟85.810.4环丙沙星环丙沙星71.042.4头孢他啶头孢他啶31.26.4复方磺胺甲噁唑复方磺胺甲噁唑74.056.1 第第第第1414问：改良问：改良问：改良问：改良HodgeHodge试验阳性就是产试验阳性就是产试验阳性就是产试验阳性就是产KPCKPC酶？酶？酶？酶？改良改良改良改良HodgeHodge试验检测假阳性结果试验检测假阳性结果试验检测假阳性结果试验检测假阳性结果Figure 1.Ph
16、enotypic carbapenemase detection by MHT 1、K.pneumoniae ATCC BAA-1705,positive result2、K.pneumoniae ATCC BAA-1706,negative result3、CTX-M-producing K.pneumoniae clinical isolate4、KPC-producing K.pneumoniae clinical isolateETPMEM改良改良改良改良HodgeHodge试验检测假阴性结果试验检测假阴性结果试验检测假阴性结果试验检测假阴性结果第第第第1515问：这株大肠埃希菌对厄他
17、培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？l1.厄他培南：厄他培南：p13 mml2.厄他培南厄他培南+APBp14 mml3.厄他培南厄他培南+EDTAp14 mml4.亚胺培南：胺培南：p30 mml5.头孢吡吡肟：p12 mm第第第第1616问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？l1.厄他培南：厄
18、他培南：p13 mml2.厄他培南厄他培南+APB+EDTAp14 mml3.美美罗培南：培南：p28 mml4.法法罗培南：培南：p23 mm l5.法法罗培南培南+APBp23 mm第第第第1616问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？l1、头孢美美唑：p26 mml2、头孢噻肟：p11 mml3、头孢噻肟/克拉克拉维酸：酸：p30 mml4、头孢他他啶：p22 mml5、头孢他他啶/克拉克拉维酸：酸：p30 mml6、头孢噻肟/硼酸：硼酸：p13 mm第第第第1616问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？问：这株大肠埃希菌对厄他培南可能的耐药机制是什么？小结小结小结小结 l细菌耐菌耐药越来越越来越严重，需加重，需加强检测p表型、基因型l做好做好细菌菌药敏敏试验不容易不容易p且做且珍惜l常常规和科研是兄弟和科研是兄弟p常规输送炮弹p科研推进常规？不当之处，请批评指正！不当之处，请批评指正！
免费区 
