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1、机体免疫状态是衡量机体是否患病的重要指标，目前多采用流式细胞术来监测机体的免疫状态，其中最重要的指标是检测T 、 B 和 NK 淋巴细胞的水平。T 细胞主要包括T 辅助细胞（ Th ）和 T 抑制细胞（ Ts）细胞亚群。CD3+ 细胞代表外周血中总的成熟T 细胞，理论上应约等于CD4+ 细胞和 CD8+ 细胞的总和，但往往出现CD4+加 CD8+ 细胞之和大于 CD3+ ，这是因为 CD4+ 细胞包括 CD3+/CD4+ 细胞（真正 Th细胞）和 CD3-CD4+ 细胞（非 Ts 细胞），而后者包括 CD3-CD8+CD16+56+细胞（一部分NK 细胞）和 CD3-CD8+CD16+56-（
2、未知细胞） 。由此可见， 真正的 TH 细胞是 CD3+CD4+细胞，真正 Ts 细胞是 CD3+CD8+ 细胞。尤其当患者 NK 细胞明显增加时，会使CD4 细胞和 CD8细胞的总和远大于 CD3+ 细胞，因此，用三色荧光标记才能分析真正的辅助性T 细胞和抑制性T细胞。首先在淋巴细胞中识别出CD3 细胞，然后在 CD3 细胞中再区分CD4+ 和 CD8+ 细胞。NK 细胞的表面无 T 细胞和 B 细胞表面标志，但有 CD16 和 CD56 等标志， 用 CD16+56 抗体能鉴定出 NK 细胞（一定是CD3 阴性）， CD3-CD16+56+细胞才是真正的NK 细胞。根据是否表达 CD8 ，
3、又可将 NK 细胞分为 CD3-CD8+CD16+56+细胞（所占比例小，不影响CD8 比例）和 CD3-CD8-CD16+56+ 细胞（主要成分）。B 细胞的表面标志是 CD19 ，理论上 CD3-CD19+ 细胞才是真正的B 淋巴细胞。但CD3+CD19+ 细胞很少，可忽略不计，所以CD19+ 细胞就是 B 淋巴细胞。在抗肿瘤效应中， CD4 和 CD8 分别是 T 淋巴细胞的辅助诱导细胞亚群与抑制/细胞毒细胞亚群， CD4 细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子，增强和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞如杀伤性T 细胞， B 细胞等共同发挥抗肿瘤作用，CD4 细胞的减少，导致免疫功能低
4、下。 CD4/CD8 比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相关。CD4 降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者；CD8 降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病；CD4/CD8 比值升高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、病毒感染等；CD4/CD8比值降低见于艾滋病( 常小于 0.5) 。监测器官移植排斥反应时， CD4/CD8比值升高预示可能发生排斥反应。1淋巴细胞担负着免疫的主要功能。淋巴细胞亚群的测定有助于了解机体免疫状况及一些疾病的监测。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料，通过流式细胞仪检测分析即可以把各种不
5、同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比例。最常检测的亚群包括T 细胞（ CD3）、 B 细胞（ CD19）、 NK细胞（ CD16+56）、辅助性T 细胞（ CD3+CD4+）和抑制性T 细胞（ CD3+CD8+）等等。(1)应用 CD3/CD19区分 T 淋巴细胞和B 淋巴细胞CD3是 T 细胞的特异性抗原，CD19则用来识别B 细胞因此应用 CD3/CD19双标试剂即可以区分和鉴定T 淋巴细胞和 B 淋巴细胞亚群；CD3、CD19阳性表达为独立的阳性细胞群体。如出现双阳性细胞均为假象。这样就可不用同型对照来设定阴性或阳性界线。此外，此检测还会出现双阴性群体，这些都是NK细胞，这些
6、细胞也提供了双阴性群体的对照。(2)应用 CD3/CD4来鉴定 CD4+T细胞首先用 CD3来区分全部T 细胞而 CD3/CD4双阳性细胞为真正的辅助/ 诱导性 T 细胞，这是 HIV 病毒感染的主要对象 ;CD3-/CD4+细胞群是由单核细胞组成，这些细胞相对于CD4+和 T 细胞来说弱表达CD4，在光散射参数的位置分布也较广。 所以 CD3/CD4抗体组合能够完全把 CD4阳性辅助 / 诱导性 T 细胞区分开。 另外，应用适当的双色组合如 CD4与 CD29,CD4与 CD45RA,也可以测定 T 辅助细胞的的亚群。如 CD4+2H4(CD 45RA)+细胞是 Ts 的诱导细胞 ;CD4+
7、 4B4 (CD29)+ 细胞 Th 的诱导细胞。同理,? 利用 CD8+CD45RA和 CD8+CD29+ S6F1可测定 T 抑制细胞的亚群。T 辅助细胞还可分成Th1、 Th2 两个亚群，同时标记细胞内细胞因子IFN- 和IL-4 ，可区分 Th1 细胞（ CD4+/IFN- +）和 Th2 细胞（ CD4+/IL-4+ ）。（ 3）应用 CD3/CD8鉴定 CD8+T淋巴细胞CD8的表达不只限于细胞毒性 T 细胞，此抗原在部分的 NK细胞上也能检测到。所以利用 CD3抗体才能把该细胞亚群分开。若采用三色测定可给出更为准确的各亚群的情况: 如真正的T 辅助细胞应是CD3+ CD4+CD8
8、-真,正的 T 抑制细胞应是 CD3+CD4- CD8+,单标 CD8+细胞中不仅有 T 抑制细胞 , 还含有 30%左右的 NK细胞 ; 而 CD3+CD4-CD8-细胞群是 T 细胞 , 此类细胞与感染有关 CD3+CD4+ CD8细-胞 +CD3+CD4-CD8+细胞 +CD3+CD4-CD8细-胞+CD3+CD4+CD8+细胞 =CD3+细胞。(4) 自然杀伤细胞（ NK）的检测CD16(FcR ) 表达于大多数NK细胞上，但也表达于中性粒细胞，此抗原NK细胞的表达比较弱，并在NK细胞活化时丢失；CD56表达于大多数NK细胞上，也表达于一些T 淋巴细胞，与CD3联合使用可以区分CD3+
9、/CD56+T淋巴细胞和CD3-/CD56+NK细胞。联合使用3 种抗体最完全地鉴定所有的NK细胞。 NK细胞或表达 CD16，或表达 CD56，但它们不表达CD3。CD16和 CD56联合使用，根据荧光强度可将NK细胞从双阴性细胞中区分出来。这样运用该试剂组合，NK细胞可形成独立的群体与其它细胞相区分。2图 1 流式分析细胞亚群外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。以下给出常用细胞亚群的正常范围供参考, 请注意同一CD中有多种克隆的McAb,同一 CD中不同 McAb?所测出的数值不同, 每个实验室应测定自己实验室的正常数值：表 1 人
10、外周血各细胞亚群表面抗原和流式检测的正常参考值细胞表面抗原细胞名称正常参考值（ %）T 细胞抗原CD2总 T细胞62.5-89.0CD3成熟 T细胞61.1-77.0CD4T 辅助 / 诱导性细胞亚群15.8-41.6CD5T 细胞（ B 细胞亚群）69.5-88.0CD8T 细胞 / 细胞毒性细胞亚群18.1-29.6CD28T 细胞受体共刺激分子39.5-6408CD8+/CD28+细胞毒性 T 细胞8.6-15.5CD8+/CD28-T 抑制性细胞9.9-24.8CD3+/HLA-DR-静止 T细胞55.3-77.1B 细胞抗原CD19全部 B细胞7.3-18.2CD20全部 B细胞7.3-18.2NK细胞抗原CD3-/CD（16+56）+NK细胞8.1-25.63造血干细胞、祖细胞CD33粒细胞前体21.3-30.4CD34多能干细胞0.1-0.5活化细胞表面抗原CD3+/HLA-DR+活化 T细胞1.2-5.8CD3-/HLA-DR+活化 B细胞3.0-11.7CD3+/CD25+活化 T细胞1.01-2.20CD5+/CD19+活化 B细胞3.1-6.6CD69活化诱导分子（ AIM）0.8-3.5CD38活化 T细胞42.4-60.0免疫调节细胞CD4+/CD29+T 辅助性细胞诱导亚群9.8-26.0CD4+/CD45-RA+T 抑制性细胞诱导亚群15.5-254