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1、17 B雌二醇对人桡动脉舒张作用的体 夕卜实验 】 目的： 研究 17B雌二醇(17B estradiol, E2 )对人桡动脉(RA)的舒张 作用及其机制方法：采用离体血管灌流的方法，观察 E2 对人 RA 的舒张作用 以及 NO 合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(N w nitro L arginine methyl ester, L NAME, 8 Br cGM 味口鸟苷酸环化酶抑制剂美蓝(MB)对 这一过程的影响结果：观察到 E2(0.1100 卩 mol/L)可剂量依赖性地舒张血 管且具有内皮依赖性；8 Br cGMP(0.11X 103 卩 mol/L)也可引起剂量依赖 性的血管舒张
2、效应.10 卩 mol/L MB 使 E2 舒张人 RA 的作用完全消失.10 卩 mol/L L NAMEE 部分抑制 E2 舒张 TA 的作用.结论：E2 对 RA 的急性舒张 作用具有内皮依赖性此作用是 E2 通过非基因组方式使血管内皮细胞分泌 NO 进而可能引起血管平滑肌细胞内的 cGMP 水平升高实现的. 【关键词】 雌二醇；桡动脉；一氧化氮； 环 GMP 0 引言 绝经前妇女心血管疾病发病率明显低于同龄男性和绝经后妇女，说明雌激 素具有很强的心血管保护作用1.动物研究表明，雌激素能够通过非基因组 途径快速舒张血管，雌激素的快速舒血管作用可能是雌激素促进了血管内皮细 胞释放 NO 进
3、而抑制平滑肌细胞的收缩2.有报道，雌激素可以直接抑制 血管平滑肌细胞的收缩作用，产生舒血管作用3.然而，雌激素作用于血管 的确切机制还未完全清楚，雌激素对人动脉的作用及其机制也少见报道 我们 采用离体灌流人桡动脉环，观察雌激素对保留内皮和去内皮血管的急性舒张作 用，并进一步研究这种舒张血管的作用机制 1 材料和方法 1.1 材料人桡动脉由西京医院心血管外科取材自 10 例行冠状动脉旁路移植 术的男性患者，年龄 4565 (55 8)岁.17 B雌二醇、左旋硝基精氨酸甲酯 (N w nitro L arginine methyl ester, L NAME)美蓝(MB、8 Br cGMP 去甲肾
4、上腺素(NE (美国 Sigma 公司).RM 6280 多道智能生 理记录及分析处理系统(第四军医大学生物医学工程系) 1.2 方法 1.2.1主药物配制 17 B雌二醇用 DMSO己制成 10 mmol/L 的原液， 实验前 用 Kreb s 液稀释成工作液.L NAME,M 用去离子水配成 10 mol/L 原液， 实验时加入 Kreb s 液，工作浓度为 10 卩 mol/L. 8 Br cGMF 直接用 Kreb s 液配成工作液（0.11000 卩 mol/L） . Kreb s 液成分 （mmol/L）: NaCl 118, KCl 4.75, CaCI2 2.54, KH2PO
5、4 1.19, MgSO4 1.19, NaHCO3 25,葡萄糖 10,充以含 950 mL/L O2 和 50mL/L CO2 的混合气，用 HCI 调 pH 至 7.27.4. 1.2.2 离体血管环灌流将游离的 RA 放入到预冷、充以含 950 mL/L O2 和 50 mL/L CO2 Kreb s 液中，仔细去除血管上的脂肪及结缔组织，将动脉剪成 23 mm 的小段，然后将血管环套在不锈钢小钩上，放入 37C,充以含 950 mL/L O2 和 50 mL/L CO2 的 Kreb s 液中， 并连接在张力传感器上.给血管 环加 0.5 g的前负荷，在 Kreb s 液中平衡至少
6、120 min 以上，在此过程 中，孵育血管环的液体每15 min 换 1 次，并使前负荷维持在 0.5 g.加入 10 卩 mol/L 的 NE 检测标本活性（收缩幅度小于 500 mg 者弃去），然后冲洗使血 管张力恢复到基线.稳定 30 min 后重复给予 NE 待血管收缩达到稳定值时逐 步增加 E2 的浓度（0.1100 卩 mol/L ）.去内皮采用细钢丝插入血管腔中滚动 完成.用 10 卩 mol/L 的乙酰胆碱（Ach）对血管环是否有舒张反应作为判断血 管内皮是否完整的标准. 统计学处理：血管环的例数 n 等于提供血管的患者数.以 NE 对血管环收 缩的最大效应为 100%.制作
7、累积浓度 舒张反应曲线，求出最大舒张反应值 （RmaX和血管最大舒张的半数有效浓度 （EC50 .统计学处理采用组间t检 验， P0.05为差异显著. 2 结果 2.1E2 对人桡动脉的作用人桡动脉血管环用 1 卩 mol/L 的 NE 产生张力，待 稳定后加入 E2 （0.1100 卩 mol/L）.数据用 1 卩 mol/L NE 预收缩的血管舒张 到未加药前的百分数表示.NE 使保留内皮或去内皮的 HIMA 收缩后，E2 可引起 剂量依赖性的舒张效应，且具有内皮依赖性（图 1）. 图 1E2 对人桡动脉舒张的量效关系（略） 2.28 Br cGMP 寸人桡动脉的作用人桡动脉血管环用 1
8、卩 mol/L NE 产 生张力，待稳定后，加入 8 Br cGMP （0.11000 卩 mol/L）.数据用 1 卩 mol/L NE预收缩的血管舒张到未加药前的百分数表示.NE 使 RA 收缩后，8 Br cGMP 可引起剂量依赖性的舒张效应（图 2），8 Br cGMP 的浓度为 1000 卩 mol/L 时，Rmax=（9 吐 8）%, EC50=4.7 0.3（log10mol/L）. 图 28 Br cGMP 寸人桡动脉舒张的量效关系（略） 2.3L NAME 寸 E2 舒张人桡动脉的影响人乳内动脉血管环用 1 卩 mol/L NE 产生张力，待稳定后加入 E2 （1 X 10-
9、41 卩 mol/L）. 一些血管环在加入 E2 之 前 20 min用 L NAME（10 卩 mol/L）预处理，数据用 1 卩 mol/L NE 预收缩的血 管舒张到未加药前的百分数表示 L NAM 可以使 E2 舒张 RA 的作用完全消失 （图 3）. 图 3L NAMES MB 对 E2 舒张人乳内动脉效应的影响（略） 2.4MB 对 E2 舒张人桡动脉的影响人乳内动脉血管环用 1 卩 mol/L NE 产生 张力，待稳定后加入 E2 （1 X 10-41 卩 mol/L）. 一些血管环在加入 E2 之前 20 min 用 MB （10 卩 mol/L）预处理，数据用 1 卩 mol
10、/L NE 预收缩的血管舒张到未 加药前的百分数表示 10 卩 mol/L 的 MB 可以使 VNP 舒张 HIMA 的作用完全消失 3 讨论 E2 的急性舒血管作用为非基因组机制，雌激素受体 a和B都可能参与其 中，以往报道，其效应呈内皮依赖性和内皮非依赖性， NO 在雌激素的舒血管作 用中起关键的作用4-5 . NO 分泌后可以激活血管平滑肌细胞中的 GC 使细 胞内cGMP 浓度升高，进一步激活 PKG 产生舒血管作用6.这些研究是以 动物为研究对象得到的实验结果，而 E2 对人桡动脉的作用还少见报道.本实验 采用冠状动脉旁路移植术使用的桡动脉来观察 E2 对其的作用. 我们的结果显示：
11、E2 对人 RA 的舒张为内皮依赖性的，而 NOS1?制剂 L NAM 可以完全抑制 E2 的舒张作用， 说明雌激素的急性舒血管作用依赖于血管 内皮分泌的 NO. GC 抑制剂 MB 抑制 E2 对 RA 的舒张作用程度与 L NAM 大致相 等，用 cGMP 类似物8 Br cGMP 同样能够产生强烈的舒血管作用，且与 E2 的舒血管作用相似，进一步阐明了 E2 的舒血管作用有赖 NO cGMRS路的参与. NO cGMPS路激活 GC 升高细胞内重的第二信使 cGMP 通过 cGMP 勺介导， 激活 PKG PKG 通过以下机制产生舒血管作用： 抑制 L 型钙通道，减少钙内流，增加钙泵对钙
12、的摄取，从而降低细 胞内游离的钙离子浓度； 直接作用于收缩蛋白而使血管舒张； 在某些血 管组织中，PKG还可特异性抑制磷酸二酯酶活性， 阻止 cAMF 降解而加强 cAMP 介导的舒张作用； 活化 K 通道，加速细胞复极化，抑制钙内流7.我们 的结果表明 和 MB 可以完全阻断E2 的舒血管作用，提示 E2 激活 通路产生舒血管效应8 . E2 的快速舒血管作用为内皮依赖性，说 明血管内皮细胞在 E2 的刺激下分泌 NO 增加，引起血管舒张.这与 Geary 等 9在小鼠大脑动脉的研究是一致的.Binko 的研究发现10:去内皮后 的大鼠胸主动脉急性暴露 10-6 mol/L 的 E2 10
13、min 后并没有明显减弱新福林引 起的收缩作用，而与E2 孵育 24 h 后，可以明显减弱新福林收缩血管的程度， 并活化平滑肌细胞 NOS 刺激NO 的表达和分泌. 作者：苏海川，赵玉红，韦耿泽，陈军，李陕区【摘】目的： 研究 17B雌 醇（17 B ）对人桡动脉（RA）的舒 本篇论文是由 3C0M 文档频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站 的，论文版权属原作者，请不用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否 者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。 总之， E2对 TA具有依赖内皮的舒张作用它作用于血管内皮细胞促进 NO 的释放，激活 通路，舒张血管这是以非基因组的方式快速舒
14、张 TA. 【参考文献】 1 Stampfer MJ, Colditz GA, Willett WC, et al. Postmenopausal 已therapy and dis已芒息己.Ten yey.r fol low up “OTii T.he nurses he汩T.h srndy J . N Engl J Med, 1991,325:756-762. 2 Cruz MN, Douglas G, Gustafsson JA, et al. Dilatory resp on ses to estroge nic compo unds in small femoral arteries
15、of male and femu.l e estrogen receptor oer.a knoclnuT. mi ce J . Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2006,290(2):H823-829. 3 Leu飞 IIS, Seto 汎 Kwu.n 训,ut i.l. I neothe I jm i TK：le;ieidcnT. relaxation to raloxifene in porcine coronary artery J . Eur J Pharmacol， 2006, 20, Epub ahead of print. 4 WLt:出 1址
16、丄习“1 K. Kor;：eli 儿 ct d Ci：:. ti vc potc.ssJuni channel lnhihkors antr.igorize g已nisten ti.nd daidzein induced arterial relaxation in vitro J . Life Sci, 2001, 69(12):1407-1417. 5 Dubey RK, Oparil S, Imthurn B, et al. Sex hormones and hypertension J . Cardiovasc Res, 2002,53(3):688-708. 6 Mendelsohn
17、 ME, Karas RH. The protective effects of estrogen on the cardiovascular system J . N Engl J Med, 1999,340(23):1801- 1811. 7 Lhirohi Ill, Dey 1 I ak I. cXiVlP ccpcrdint poToi n In TI;：I.SC signaling mechanisms in smooth muscle: from the regulation of tone to gene expression J . J Appl Physiol, 2001,9
18、1:1421-1430. 8 Li HF, Zhang P, Tian ZF, et al. Differential mechanisms invo vecl in effects of genisteir and 17 b已tu estradiol 0门 porcine coronary arteries J . Pharmazie ， 2006,61(5):461-465. 9 Geary GG, Krause DN, Duckies SP. Estrogen reduces mouse 1 c.rt已tone T.hipu疥i encloihel 1 al NOS and eye 1(.： oxyciicisi ki;ndent mechanisms J . Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2000,279: H511-H519. 10 ljiro，IL 17 betJ 底m汕山 redness Vc.soconstri ction i n eridothel i um denudec T】t a-ortas Throng! inclucibl e NOSJ . Am J Physiol, 1998,274(3 Pt 2):H853-859.