《实验06蚕豆根尖微核检测技术.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验06蚕豆根尖微核检测技术.doc（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的1. 了解微核测试原理和毒理遗传学意义。2. 学习蚕豆根尖的微核测试技术。二、实验原理微核(micronucleus,MCN)是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色 体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形， 游离于主核之外，大小应在主核1/3 1/10，染色与主核一样或稍浅。一般认为 微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便 形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核 之外的小核，即微核。三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Car noys
2、固定液、1mol / L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3.四、方法与步骤浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽2430h,此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托 盘内培养。用被检测液处理根尖：当初生根长到 12cm时，选初生根生长良好的蚕 豆 6 8 粒，分别放入蒸馏水(CK)、0.4 mmol/ L、0. 8 mmol/L、1.2mmol/L 的 NaN3 中染毒 8 12h。根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗 3次，每次 23 min;将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复 2224h;同时均设蒸馏水处理 为空白对照组。以上温度均为
3、 25C。根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下11.5cm长的幼根，用Carnoys固定液固定2024h。固定后的根如不及时制片，可换入 70%的酒精 溶液中置4C冰箱中保存备用。酸解：用1mol/L盐酸在60 士下酸解8min,幼根软化即可。染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根 3次，每次12分钟。最后浸于水 中。制片前取出置载玻片上,截下 12mm 左右长的根尖,滴 1-2 滴改良苯酚 品红染液染色 1015min 后,加上盖玻片,覆以吸水纸常规压片。五、实验结果在显微镜低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀,分裂相较多的部位,再 转高倍镜观察微核。每一处理观察 3 个根尖,每个根尖数 1000 个细胞,统计其 中含微核的细胞数，然后平均，即为该处理的 MCN%,即微核千分率，以此可 作一个检测指标。根据你的实验安排列表填出你的实验结果。污染指数（PI）二样品实测MCN%平均值/对照组MCN%平均值污染指数在 01.5区间基本没有污染; 1.52 区间为轻度污染; 23.5区 间为中度污染; 3.5以上为重度污染。六、作业1. 在蚕豆根尖细胞的微核测试中,为什么要进行恢复培养？2. 产生微核的根尖细胞在产生前的分裂中期可能出现什么样的中期分裂图象？实验观察中请同时仔细观察每个分裂相细胞。