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1、抗菌的效力测试抗菌防腐剂是实际被添加到有菌的剂量配方里的物质，使他们不受微生物滋长或是被无意中引进到生产过程中的微生物侵害。在无菌包装多剂量配方的容器里，抗菌防腐剂被添加用来抑制由重复添加单剂量所引进的微生物的滋长。抗菌防腐剂不应被作为在良好生产操作中的替代方式使用，或仅是用来减少一个有菌产品的微生物群数量，或是在生产时控制多剂量的微生物量。在剂量表里抗菌防腐剂与添加的要求必需符合规定。所有有用的抗菌药剂都是有毒物质。为了最大的保护使用者，防腐剂的含量应被有效地显示在产品的最终包装上，并应会处在一个可能对人体有毒的水平线下。添加的抗菌防腐剂含量能够被保持在一个最小的浓度，如果配方的活性成分具有
2、一个固定的抗菌力。抗菌的效力，不管是产品里固有的或者是生产中添加的抗菌防腐剂，都必须在所有注入包装的多剂量容器里或其它包含抗菌防腐剂的产品上显示。抗菌防腐剂必须被显示在多剂量和口头剂量型和给其它剂量型，如眼药，耳药，鼻药，冲洗的和透析液。( 看Pharmaceutical Dosage Forms(a1151).本章提供的测试用来显示抗菌保护的效力。添加的抗菌防腐剂必须显示在标签上。测试的效力和标准适用于一个产品在原有的、未打开过的经由制造商销售的容器里。产品分类为了测试的目的，配制产品分开为四个分类（看表 1）。抗菌效力的标准对于这些产品是一个管理的作用。Table 1.Compendial
3、 Product Categories表1:配制药品分类CategoryProduct Description类 别产 品 概述1 针剂，其它非肠胃药剂，包括乳剂、无菌耳用剂、鼻用剂和眼用剂含水的或其它介质的。2 局部使用产品，含水的或其它介质，如未灭菌耳用剂产品、软膏，包括那些涂在黏膜上的。3 口服产品，除了以水为基底或其它的介质的解酸剂。4 含水解酸剂。测试生物体使用以下微生物的培养基：白念珠菌 （ATCCNO.10231）, 黑曲霉菌 （ ATCCNO.16404）, 大肠杆菌 （ ATCCNO.8739） , 绿脓杆菌(ATCC no.9027),和金黄色葡萄球菌( ATCC NO.6
4、538).在测试中使用活的微生物从原始的培养基移转次数不得超过五次。为了测试的目的，移转的定义是从一个已确定的培养基移到一个新鲜的媒介里。所有的移转均应被计算在内的。一旦有机体被以种子库(seed-lot)技术保存下来时，每个在新鲜媒介里冰冻的，融化的和再生的循环周期被认为是一次转移。种子存储技术将会被使用到培养的长期存储中。从ATCC得到的培养基将会依照操作方向苏醒。如果在液体培养基里生长，细胞会通过离心法的方式被聚集成块。悬浮在1/20 容量的新鲜的液体培养基里，并添加一个同等容量的20%（ V/V 水里） 的无菌的甘油。 从表面到10%的甘油液体培养基里可能得到在琼胶培养基上的细胞生长。
5、分配小部分的悬浮液到无菌的小瓶里。把小瓶子放在液化氮里或一个不超过-50 摄氏度的机械冷藏室里。当要求一个新鲜的种子存储瓶时，它可能被移除和使用来给一系列的有效的培养菌做接种。这些有效的培养基到时可以被定期地（每天，当测试细菌和酵母时）使用来启动接种培养基。媒介测试中所有媒介的使用，必须做促生长测试。在有机体测试下使用上面指定的测试微生物。接种体的准备准备测试，由最近再生的培养基的表面适当的接种特定的微生物。接种培养基的描述请参考表2，表2 里的适合的培养基是黄豆- 消化酪蛋白(soybeancasein digest)或沙保罗氏葡萄糖琼脂培养基。（参看Microbial Enumeratio
6、n Tests (61)和Absence of Specified Microorganism 62）为了获得细菌和白色念珠菌(C.albicans)培养基，使用干净的盐水溶液(Saline TS，注:9克氯化钠溶于1000 mL.的水 ) ，清洗表面的生成物，把它收集在一个合适的容器里，并添加足够的盐水溶液以获得一个每毫升大约1108 cfu 的微生物计数。为了获得黑曲霉菌(A. niger)细胞，使用干净的盐水溶液含0.05%的聚山梨醇酯80(polysorbate 80)，并添加足够的盐水溶液来获得一个大约1108cfu每毫升的计数。或者，一个合适的液体的培养液（如，黄豆- 消化酪蛋白液
7、soybean casein digest broth或沙氏琼脂培养液sabouraud dextrosebroth ）可能生长出培养菌微生物并通过离心法得到细胞，然后以无菌的8盐水溶液清洗和重新悬浮以获得一个大约110 cfu每毫升的微生物计数。（注意 预计的接种浓度可能通过浊度计测量来挑战微生物。如果悬浮液没有在两个小时内被使用，请冷冻它）测出每个悬浮液的每毫升的菌落数量，使用在TABLE2里的媒介和微生物的恢复培养期的情况来确认估计每毫升的原始cfu 。这个值可以用在测试中做接种尺寸的比对。细菌和酵母菌的悬浮液在24 小时收获期里应被使用，但真菌的准备可在冷冻情况下储存7 天。程序测试可
8、以在五个干净的容器里操作，如果在每个容器里有足够容量的产品且产品容器能被无菌地装入（ 如，使用针和注射器穿过一个人造的橡胶瓶塞），或者在五个无菌的，加盖的、尺寸合适的，能移转产品的充足容量的细菌容器里。给每一个准备好的标准的接种体的容器做接种注射，并混合。接种悬浮液的使用量在产品量的0.5%到1.0%之间。被添加到产品的测试细菌浓度（类型）到最终的测试准备浓度在接种之后是每毫升110 5and 1106cfu之间。对于类型4 产品（解酸剂） 测试准备的最终浓度在接种后是每毫升产品110 3到 110 4cfu 之间。在每次测试准备的活的微生物的原始浓度是预计是基于每个标准接种体的微生物浓度，通
9、过皿测法来预计的。在 22.5 2.5的温度下将容器接种。如表3，在适当的时间间隔里把每个容器做样品标示。记录下在每个间隔时间里出现的任何变化 （参看 Microbial Limit Tests (61) 下的程序）。以平皿计数方式 (platecount)在适当的时间间隔里计算出现的cfu 数。使用特定的抗菌剂做为钝化剂（中和剂）或是适当的稀释量来做平皿计数。 在表 2 中规定出培养基与不同菌种的各种接种状况与验收时间。在开始测试时使用每毫升多少CFU来计算浓度，在适当的间隔测试对每个微生物计算每毫升CFU浓度的 log 10 值的变化，并表述以log为单位的减少变化量。Table 2.Cu
10、lture Conditions for Inoculum Preparation接种体准备的培养基MicrobialOrganismSuitable MediumIncubationInoculumRecoveryTemperatureIncubation TimeIncubation微生物适合的培养基接种温度接种时间Time验收时间Escherichia coliSoybean Casein Digest Broth;黄豆 - 消化酪蛋白液18 to 24hours3 to 5days大肠杆菌32.5 2.5Soybean Casein Digest Agar18至24小时3至 5天(AT
11、CC No.8739)黄豆 - 消化酪蛋白基Pseudomonasaeruginosa Soybean Casein Digest Broth;18 to 24hours3 to 5days绿脓杆菌黄豆 - 消化酪蛋白液32.5 2.518至24小时3至 5天(ATCC No.9027)Soybean Casein Digest AgarMicrobialOrganismSuitable MediumIncubationInoculumRecoveryTemperatureIncubation TimeIncubation微生物适合的培养基接种温度接种时间Time验收时间黄豆 - 消化酪蛋白基
12、Staphylococcus aureusSoybean Casein Digest Broth;黄豆 - 消化酪蛋白液18 to 24hours3 to 5days金黄色葡萄球菌32.5 2.5Soybean Casein Digest Agar18至24小时3至 5天(ATCC No.6538)黄豆 - 消化酪蛋白基Candida albicansSabouraud Dextrose Agar;沙氏琼脂培养基44 to 52hours3 to 5days白念珠菌22.5 2.5Sabouraud Dextrose Broth44到52小时3至 5天(ATCC No.10231)沙氏琼脂培养
13、液Aspergillus nigerSabouraud Dextrose Agar;沙氏琼脂培养基6 to 10days3 to 7days黑曲霉菌22.5 2.5Sabouraud Dextrose Broth6至 10天3至 7天(ATCC No.16404)沙氏琼脂培养液抗菌效力标准抗菌效力的要求如Table 3 下规定的标准（参看significant figures and tolerances under generalnotices ）。增加值不高于现行测量值的0.5 log10单位的可视为没有增加。测试微生物的标准For Category 1 Products对第一类产品Bac
14、teria: 细菌7 天里的原始计数量不少于1.0 log的减少量，在14 天里原始计数量不少于3.0 log的减少量，在 14 天 -28天里计数量不增加。Yeast and Molds:原始计数量在 7 天， 14 天， 28天里没有增加。酵母和霉菌For Category 2 Products对第二类产品Bacteria:Not less than 2.0log reduction from the initial count at 14days,and no细菌increase from the 14dayscount at 28days.Yeast and Molds:No incr
15、ease from the initial calculated count at 14and 28days.酵母和霉菌For Category 3 Products对第三类产品Bacteria:细菌Not less than 1.0log reduction from the initial count at 14days,and no increase from the 14dayscount at 28days.Yeast and Molds:No increase from the initial calculated count at 14and 28days.酵母和霉菌For Category 4 Products对第四类产品Bacteria,Yeast,No increase from the initial calculated count at 14and28days.在14-28and Molds:天里最初计算数量不增加。细菌、酵母和霉菌（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）