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1、硝普钠对成年大鼠全脑缺血后的海马神经元具有保护作用【摘要】目的研究硝普钠对全脑缺血后海马神经元细胞是不是 具有保护作用。方式通过四动脉结扎制备全脑缺血/再灌注模型。脑 缺血前35 min第1次腹腔注射硝普钠(1 mg/kg),缺血/再灌注40 min 后第2次腹腔注射硝普钠(1 mg/kg),尔后每隔24 h再注射硝普钠(1 mg/kg),持续3次，共注射5次。于再灌注5天后制作石蜡切片并焦 油紫染色观察硝普钠对大鼠海马神经元的影响。方式在再灌注5天 后，给药组的海马神经元细胞的存活率是对照组的7倍，注射硝普钠 能显著降低大鼠海马区神经元的死亡。结论硝普钠对全脑缺血引发 的海马神经元的死亡有重
2、要的保护作用。【关键词】硝普钠神经元脑缺血再灌注大鼠Abstracts )bjectivc To investigate the protective effects of sodium nitro prusidc (SNP) on hippocampal neuron injury caused by cerebral ischemia/reperfusion in Transient (15 min) brain ischemia was induced by the four-vessel occlusion (4VO) in Sprague-Dawley rats. SNP (1 mg
3、/kg) ip was given to the rats 35 min before and 40 min after ischemia, and was repeated every 24 hours for 5 times. After that, the rats were perfusion-fixed with paraformaldehyde, the brains were sectioned and stained with crystal violet to examine the survival of CAI pyramidal cells in the It was
4、found that the survival ratio of CAI pyramidal cells of SNP group was 7 times that of the vehicle control group. Administration of sodium nitro prusidc significantly decreased the degree of neuronal SNP has ncuroprotcctivc effect on hippocampal neurons against the injury caused by cerebral ischemia/
5、reperfusion.Key words: sodium nitro preside (SNP); neuron; cerebral ischemia /reperfusion; rat脑组织对缺血高度敏感。脑组织不同于其他组织，脑损伤后尚 存的健康组织很难替代受损组织的功能,因此神经元丢失往往致使脑 功能缺点。一氧化氮(nitric oxide, NO)是一种细胞间和细胞内信使 物质和效应分子，在中枢神经系统行使多种生理功能，硝普钠(sodium nitro pruside, SNP)是NO的供体。本实验通过腹腔注射NQ供体SNP, 观察其对全脑缺血大鼠海马神经元损伤的影响，以证明NO是不
6、是参 与成年脑缺血后的海马神经元损伤的保护作用。1材料和方式1. 1实验动物药品 雄性Spraguc-Dawlcy(SD)大鼠，250300 g, 清洁级，由徐州医学院实验动物中心提供，经检疫证明为健康状态。 SNP购于徐州医学院附属医院，产品批号：()70524,批准文号：国药 准字H,生产厂家：北京双鹤现代医药技术有限责任公司。1. 2方式1. 2. 1全脑缺血模型制笛按本室已成立的大鼠四动脉结扎模 型，动物以20%水合氯醛(300500mg/kg)腹腔注射麻醉后，分离 双侧颈总动脉并电凝椎动脉。手术第2天动物于清醒状态下结扎双侧 颈总动脉，使全脑缺血15 min,然后再灌注5天。缺血时维
7、持其直肠 温度在。C o以缺血动物体征表现判断缺血模型的靠得住性。1. 2. 2实验分组与给药方案实验分为4组，别离为：假手术 组、缺血/再灌组、SNP组、溶剂对照组。假手术组手术操作同缺血/ 再灌组，但不进行颈动脉结扎，该组共做了 6只老鼠存活5只。给药 组于全脑缺血前35 min第1次腹腔注射SNP (1 mg/kg),缺血/再灌 注40 min后第2次腹腔注射SNP (1 mg/kg),尔后每隔24 h再注射 SNP (1 mg/kg),持续3次，共注射5次，该组共做了 8只老鼠，存 活6只。溶剂对照组手术操作同给药组，只是用生理盐水代替SNP, 该组共做8只老鼠，存活5只。缺血/再灌组
8、共做了 8只老鼠，存活 5只。1. 3样品制窗和组织学方式 于再灌注第5天以水合氯醛麻 醉大鼠。接着以生理盐水和4%多聚甲醛进行心室灌注。取脑放于4 一样的多聚甲醛中固定1天以上。然后将脑块放于梯度乙醇中脱水并 于二甲苯中透明。石蜡包埋后进行切片(5 Rm),经脱蜡、脱二甲苯, 最后于焦油紫溶液中染色。以CA1区1 mm内的细胞数量作为计数标 准。统计学处置数据以均数土标准差表示，统计分析采用方差分 析(ANOVA),查验水准：a=。2结果各组大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区细胞存活量测定结果见 图一、表1。表1各组大鼠脑缺血/再灌注后海马CA1区细胞存活 量 与假手术组比较：*P&K与缺血/
9、再灌注组比较：3讨论最近几年来，随着对N。的不断深切研究，发现其在中枢神经系统中具有重要作用，参与很多疾病的发病进程，已成为神经病学和 神经生物学研究的热点之一。可是NO在急性脑缺血中是保护仍是损 伤作用的研究结果一直有争议。SNP在体内可直接分解出NO氮，是 常常利用的NO的供体。本研究腹腔注射SNP,应用焦油紫染色的方 式可以很直观的观察海马CA1区细胞死亡情况。正常情况下，假手 术组海马CA1区细胞几乎没有死亡，而缺血15 min再灌注5天后， 海马CA1区细胞几乎全数死亡;生理盐水作溶剂对照组，海马CA1区 细胞也几乎全数死亡;而在SNP组，发现海马CA1区细胞存活量明显 增加。证明N
10、。参与脑缺血后的海马神经元的保护。NO对急性脑缺血神经元保护的作用机制可能是：调节脑血 流量作用1, NO作为自由弥散的信使分子，呈脂溶性，能自由 通过血管内皮进入血管光滑肌细胞，通过激活GC,促使GTP分解生 成cGMP。后者通过离子通道机制使血管光滑肌扩张，局部血流量增 加；抗血小板和白细胞聚集黏附作用LU,内皮细胞产生的N。可 降低血小板和白细胞在血管内皮的黏附和聚集，这有助于保证微循环 的通畅和保护脑血管内膜不受损害；阻断N甲基一D 一天门冬氨 酸(NMDA)受体的作用2 , NO使NMDA受体的琉基亚硝酰基 化，阻断NMDA受体的过度兴奋，减少钙内流，进而减轻神经元的 兴奋性毒性损害；对NOS的调节作用：神经元中存在对NOS的负 反馈调节机制。这种作用主要表现为NO通过对自身NOS的负反馈 抑制和对NMDA受体阻断，使细胞内钙含量降低，进而降低cNOS 活性。而N。在细胞信号转导中作用的具体的分子机制还需进一步研 究。【参考文献】1刘子凡，彭光荧.由硝普钠提供的一氧化氮在急性缺血性 卒中的病理生理学中的作用J1 .国外医学脑血管疾病分 B,1999,7(1):49-50.2柏干苹，方勇正，李延谦.谷氨酸在低氧性脑损伤中的作 用J .中国临床康复，2002,6(22):3354-3355.