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1、Bcl-2、Bax及NF- k B在艾迪注射液诱导食管癌凋亡中的作用【关键词】 艾迪注射液 艾迪注射液是一种目前临床常用的中药复方精制剂， 其主要成分 是：黄芪、人参、刺五加、斑蝥等，有益气活血、消瘀散结、清热解 毒、扶正化瘀的功效。临床已经证实艾迪注射液对食管癌、原发性肝 癌、胃癌、大肠癌等多种肿瘤有明显的疗效 1，2。近年来，有研究 表明艾迪有诱导癌细胞凋亡的作用 3，Bcl-2 、Bax 及 NF-kB p50 是与凋亡调控有关的基因，笔者应用组织芯片技术，采用免疫组化法 检测Bcl-2、Bax及NF- k B p50在艾迪组与对照组食管癌组织中的表 达，以进一步探索艾迪注射液诱导食管癌
2、细胞凋亡的途径。1 材料与方法1.1 研究对象 本试验研究设计为回顾性研究，共观察江苏省中 医院胸外科2003年8月2005年12月收治的食管鳞状细胞癌手术病 人 46 例，其中艾迪组 23 例，对照组 23 例。所有病例术前均经电子内 镜及组织病理学检查证实为食管鳞状细胞癌，无远处转移，术前未经 放化疗或免疫治疗。1.2 临床试验用药及处理方法 艾迪注射液：生产厂家为贵州益 佰制药有限责任公司，批准文号为国药准字 乙艾迪组术前给予5%葡 萄糖注射液500 ml+艾迪注射液80 ml静滴，每月1次，治疗7天;对 照组不用艾迪注射液，其他处理方法相同，均行食管癌根治、胸腹淋 巴结清扫术。1.3
3、主要试剂Bcl-2、Bax、NF-k B p50由北京中杉金桥生物技 术有限公司提供；即用型快速免疫组化 MaxVisionTM 试剂盒由福州迈 新生物公司提供。1.4 试验方法1.4.1 标本收集 收集2003年8月2005年12月南京中医药大 学附属医院病理科归档食管鳞状细胞癌蜡块， 回顾性分析其病历资料， 符合艾迪组要求的 23 例，对照组 23例。1.4.2 常规病理学检查 观察肿瘤的部位、大小、浸润深度、大 体类型、淋巴结转移情况，常规 HE染色。1.4.3 方法 每一例均行光镜观察。制作组织芯片，直径均为 2 mm， 46 例食管鳞状上皮细胞癌，每例一个组织芯，加上阴性对照（正 常
4、食管鳞状上皮），共计 47 个组织芯。免疫组化染色，检测 Bcl-2 、 Bax、 NF-k B p50。1.5分析方法Bcl-2、Bax、NF-k B p50评分标准是根据食管癌 组织中免疫组织化学染色的深浅和阳性细胞百分数进行评分 : 阳性细 胞百分数<25%，浅棕色为阴性；阳性细胞百分数 >25%，棕色为 阳性。1.6 统计学分析 两组样本均值的比较采用 t 检验；采用 SPSS12.0统计分析软件进行有关检验，给出检验统计量及其相对的 P值， 用Fisher精确概率法时直接给出P值。以P 0.05作为有显著性统计 学意义，以P 0.01作为有高度显著统计学意义。2 结果2.
5、1 两组病例基本情况比较2.1.1 性别、年龄 艾迪组男 13 例，女 10 例；对照组男 17 例， 女 6 例；两组差异无统计学意义 (P>0.05 )。艾迪组平均年龄 (59.09 9.075 )岁，对照组为( 57.48 8.805 )岁，两组差异无统计学意义 ( P>0.05 )。2.1.2 肿瘤部位及长度 艾迪组肿瘤位于食管中段 14 例，下段 9 例；对照组中段16例，下段7例，两组差异无统计学意义(P>0.05 )。 艾迪组肿瘤长度03 cm为13例，36 cm为10例；对照组03 cm 为11例，36 cm为12例，两组差异无统计学意义(P>0.05
6、)。2.1.3 肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移 艾迪组低分化 2例、 中低分化 5例、中分化 8例、中高分化 8例、高分化 0例；对照组低 分化 3例、中低分化 0例、中分化 10例、中高分化 8例、高分化 2 例，两组差异无统计学意义( P>0.05 )。艾迪组肿瘤浸润深度位于 黏膜层 1 例、黏膜下层 3例、肌层10例、纤维膜 9例；对照组黏膜层 0例、黏膜下层 1 例、肌层 9例、纤维膜 13例，两组差异无统计学意 义(P>0.05 )。艾迪组有淋巴结转移9例，对照组有淋巴结转移10 例，两组差异无统计学意义( P>0.05 )。2.2艾迪对食管癌Bcl-2和Bax表达
7、的影响 艾迪组Bcl-2阳性 率为 39.1%(9/23)，对照组的阳性率为 78.3% (18/23)，两组比差异 较有统计学意义(Pv 0.05 );艾迪组Bax阳性率为56.5% (13/23 ), 对照组的阳性率为17.4% (4/23 ),两组比较差异有统计学意义(Pv0.05）。2.3 艾迪对食管癌 NF- k B p50表达的影响 艾迪组NF- k B p50 阳性率为 47.8%（11/23），对照组的阳性率为 87.0%（20/23），两组比 较，差异有统计学意义（PV0.05 ）2.4 NF- kB p50、Bcl-2 在食管癌中表达的相关性 结果见表 1， NF-kB p
8、50、Bcl-2 有明显的相关性，呈正相关。表 1 NF-kB p50、 Bcl-2 在食管癌中表达的相关性 注：rs = 0.358 , x 2=5.906 , P= 0.015 , Pv 0.05，差异有统计学意义 3讨论肿瘤的发生发展与细胞凋亡密切相关。许多抗肿瘤中药，如喜树 碱、长春新碱、紫杉醇等，能诱导肿瘤细胞凋亡。艾迪注射液是临床 常用的中药复方抗肿瘤制剂，该药由黄芪、人参、刺五加、斑蝥中提 取有效成分精制而成，是一种新型多靶点药物，其抗肿瘤作用与诱导 肿瘤细胞的凋亡有关。阎志钧等 4用艾迪成功诱导脑胶质瘤细胞 U251凋亡。已有研究证实爱迪的有效成分：刺五加皂苷、去甲斑蝥素 等能
9、诱导肿瘤细胞的凋亡。刺五加皂苷体外对胃癌细胞凋亡的诱导实 验显示，其促进体外培养胃癌细胞凋亡的作用明显强于维甲酸5。刘晓兰等6通过探讨去甲斑蝥素对人早幼粒细胞株（HL-60）细胞 增殖的抑制作用，发现去甲斑蝥素对 HL-60的抑制作用是通过诱导细 胞凋亡来实现的，形态学染色也证实了以上的实验结果。细胞凋亡是 受基因调控的一种细胞主动的自杀形式，机体细胞数量的恒定取决于 细胞增殖和凋亡之间的动态平衡，肿瘤的发生发展与这种平衡发生破 坏密切相关。凋亡受凋亡相关基因（如 Bax、 Bcl-2 等）的表达调控。Bcl-2 位于线粒体外膜，能抑制多种因素引起的细胞凋亡。 Bax 是Bcl-2 基因家族中
10、的成员，和 Bcl-2 基因具有 40%的同源性，但生理 作用却相反，能促进细胞的凋亡。研究表明Bcl-2和Bax的表达程度 及其比例决定细胞接受凋亡信号后的命运， Bcl-2 占优势时细胞生存， Bax 蛋白大量表达时加速细胞的凋亡 7。 Wyllie 等8研究表明 Bcl-2基因和Bax基因的相关蛋白可形成异源二聚体，Bax之间可形成 同源二聚体，且异源二聚体抑制凋亡， Bax 同源二聚体则促进凋亡， 因此认为Bcl-2与Bax比率的升降可调节细胞的凋亡，调高Bax/Bcl-2 则促进凋亡，降低 Bax/Bcl-2 则抑制凋亡。本试验中 Bcl-2 、Bax 在 艾迪组的阳性率分别为39.
11、1%、56.5% ；在对照组的阳性率分别为78.3%、17.4%。 Bcl-2 在艾迪组的表达阳性率比对照组显著降低，而 Bax则显著增高，两者均具有统计学差异（Pv 0.05 ）。由此可以看出， 艾迪注射液可以通过下调 Bcl-2 蛋白的阳性表达，增大 Bax/Bcl-2 的 比值，促进癌细胞凋亡。核因子 k B （nuclear factor of kappa B , NF-k B）是近年来发现的一个真核细胞核转录因子家族，能在转录水 平上调控多种基因的表达， 参与机体多种生理病理进程， 已经证实 NF- k B 在免疫应答、炎症反应、细胞黏附、细胞分化、生长与凋亡等方 面扮演了重要角色9
12、。研究表明NF-k B是细胞凋亡和增生的重要调 节因子，在肿瘤凋亡的调控中起关键性作用，抑制肿瘤细胞 NF-k B 的活性可引起肿瘤细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的生长10 NF- k B 活化后可以调节抗凋亡和促凋亡蛋白的表达。 研究表明， NF-k B 除可 通过调控凋亡抑制蛋白（IAP）及IL-6、IL-8等细胞因子的表达外， 还可通过诱导和上调Bcl-2家族蛋白发挥抑制凋亡作用11 Bcl-2 启动子上存在NF-K B的特异性结合位点12, 13, NF-K B可通过 转录途径直接上调 Bcl-2表达13,同时还可通过TNF-a、p21WAF1 14等其他途径促进 Bcl-2 表达。在肿瘤
13、细胞中由于 NF-K B 的活 化可以激活含有 K B 的 Bcl-2 及 Bcl-XL 编码基因的转录表达，而对 无k B位点的Bax和Bad基因则无此作用，这就可能使得两类不同功 能的蛋白表达量失衡，从而增强肿瘤细胞的抗凋亡性。抑制 NF-K B 活性可抑制 Bcl-2 的表达，进而诱导肿瘤细胞凋亡 15。笔者的研 究结果中可以看出 NF-K B p50 在艾迪组的表达阳性率（ 47.8%）比对 照组（87.0%）降低（PV 0.05 ）。艾迪注射液有抑制NF-k B活性的作 用。笔者的结果还发现：NF-k B p50与Bcl-2表达有正相关性（rs = 0.358 , Pv 0.05 ）
14、,可以进一步证实 NF- k B p50对Bcl-2有正相调节 作用，通过下调 Bcl-2 蛋白的阳性表达，促进癌细胞凋亡。由此可以 看出，艾迪注射液可以通过抑制 NF-K B的活化，下调Bcl-2蛋白的阳 性表达，诱导癌细胞凋亡，这可能是其诱导食管癌细胞凋亡的途径之一。【参考文献】1 吴敏慧，姚俊涛，王玉珍 . 艾迪注射液治疗晚期消化系统肿瘤 的临床观察 . 现代肿瘤医学， 2005， 13（ 3） :416-417.2 吴继萍 . 爱迪 注射 液的药效 与应用 . 中医研究， 2003，16（ 2） :59-61.3 严英，钟秀驰，周伟生，等. 中药制剂介入治疗恶性肿瘤的药理 与临床研究概
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