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1、北五味子多糖的提取和含量测定【摘要】目的成立提取和测定北五味子中多糖含量的方式。方式 采纳比色法测定北五味子中多糖含量。结果测得北五味子中多糖含量 为,平均回收率为%RSD=%。结论该方式简便、周密度及重现性均 较好，结果令人中意。【关键词】北五味子多糖提取含量测定Extraction and Determination of Polysaccharide from Schisandra chinensis (Turcz) Baill FruitAbstract： ObjectiveTo establish a method for the extraction and deteminatio
2、n of polysaccharide from Schisandra chinensis (Turcz) Baill in Schisandra chinensis (Turcz) Baill Fruit was determined by the method of Spectrophoto polysacharides in Schisandra chinenisis (Turcz) Baill Fruit was %, the average recovery was %, RSD was %. ConclusionThis method is simple, the result i
3、s stable, reproducible, and satisfactory.Key words ： Schisandra chinensis (Turcz) Baill ；Polysaccharide; Extraction; Determination北五味子 Schisandra chinensis （Turcz） Baill Fruit 是木兰科 植物五味子的干燥成熟果实，是闻名的滋补性中药，因其果实甘、酸、 辛、苦、成五味俱全，故名五味子，具有敛肺、滋肾、生津、收汗、 涩精之功效。现代药理研究证明五味子对中枢神经系统、呼吸系统均 有兴奋作用，亦能增进肝糖原异生，加速肝糖原分解，在
4、医治神经虚 弱、肝炎等的药物中应用十分普遍。五味子有南北之分，据木草纲 目记载“五味子南产者红，北产者黑，入滋补药，必用北者为良”, 北五味子的化学成份要紧为五味子木脂素、挥发油、五味子醇、多糖 等lo最近几年来对多糖提取工艺的研究方式很多，如热水浸提法、 稀碱液浸提法、稀酸液浸提法。但多糖是由单糖基通过糖苜键连接而 成的化合物，在稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖甘键的断裂，部 份多糖发生水解而使多糖的提取率减少，因此本文采纳热水浸提法， 用苯酚-硫酸法测定北五味子多糖的含量，取得中意的结果。1仪器与药品北五味子购于张家口市药材公司经鉴定为北五味子，其它试剂均 为国产分析纯；UV 752分光光
5、度计（上海第三仪器厂）；GOA型电热 真空干燥箱（天津东郊机械加工厂）；RE 52A型旋转蒸发器（上海 亚荣生化仪器厂）。2方式与结果葡萄糖储蓄液的配制周密称取105干燥至恒重的葡萄糖 100 mg,用蒸镭水溶解并定容到100 mlo苯酚溶液的配制取苯酚100 g,加铝片g和NaHCO3 g,蒸 储，搜集182储份，称取g,加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱 备用。测定条件选择反映温度选择周密吸取葡萄糖储蓄液ml于100 ml容量瓶 中，用水稀释至刻度，作为对照品溶液。别离吸取葡萄糖对照品液ml 于两个具塞试管中，各加苯酚液ml,并别离迅速滴加浓硫酸mlo另 取两份ml水同上操作，为空白液。
6、一份于水浴中煮沸15 min,另一 份于40水浴中恒温30 nlin掏出，冷却至室温，15 nlin后于490 nm 处测其吸光度值，别离为和。因此，本实验采纳40恒温30 min的 方式。苯酚及硫酸用量选择吸取葡萄糖对照品液ml5份，别离加 入苯酚液，一，ml,别离加水至ml,再各滴加浓硫酸ml, 40c恒温 30min后，测其吸光度值，别离为，可见加入苯酚液ml以上时, 反映都能完成；另取葡萄糖对照品液ml5份，别离加苯酚液ml,再别离滴加浓硫酸，ml,并均用水稀释至ml,加入硫酸体积占整体 积的以上时的结果较中意。反映时刻选择及稳固性取葡萄糖对照品溶液ml3份，各加 苯酚液ml,浓硫酸m
7、l,于40别离恒温20, 30, 40 min。测得吸光 度值别离为，一可见加热30 min即可使反映完全。另测反映完成后样 品在不同时刻内的吸光度值，结果3h内稳固。标准曲线绘制周密量取葡萄糖标准溶液，ml置具塞试管中，别离加蒸储水使成 ml,再别离加入苯酚溶液ml,摇匀，然后加浓硫酸ml,充分摇匀， 于40水浴中恒温30 min,掏出，冷却至室温，另以蒸播水同上操作 为空白对照，在490 nm处测定吸光度，绘制标准曲线，成立回归方程: A= 81C+ 204 71, r= 8。周密度实验周密吸取对照品溶液ml, 6份，同项下操作， 结果显示吸光度的RSD-%o多糖的提取流程北五味子粉碎后，
8、称取500 g,用清水洗净, 加水4 500 ml,微沸煎煮1 ho过滤，滤渣加水2 000 ml,煎煮1 h, 过滤，归并提取液，加热浓缩至300 mlo加入乙醇使乙醇含量为80% 放置12h,抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮反复洗涤，取得棕色粗 多糖。将粗多糖溶于水，用seveg法除去蛋白，加入1%活性碳脱色， 抽滤，滤液加入乙醇，使溶液含醇达80%,静置留宿，抽滤，残渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，真空干燥，即得精制北五味子多糖。换算因子测定精准称取60c干燥恒重的五味子多糖20 mg,加水溶解后定 容到100 ml容量瓶中，摇匀，作为多糖储蓄液精准量取多糖储蓄液ml, 加水至ml按测量标准曲
9、线一样的方式测其吸光度值，依照标准曲线 计算浓度。按下式计算换算因子：f=W/CD式中：W为多糖重量（Hg）, C为测试液中据标准曲线方程计算取得的单糖浓度（Ug-ml-1） D为 多糖的稀释因子，测得f=,（n=6）。样品含量的测定准确称取干燥五味子粉末100 mg, 3份，别离置于索氏提取 器中，用80%乙醇回流提取lh,改用水微沸煎煮，3份别离煎煮1, 2, 3次，各定容至100 ml,为样品液。别离周密吸取上述样品液10 ml, 别离定容至100 ml,各取ml,按项下操作，平行做6次，并按下式 计算多糖含量（以粗多糖计）。结果见表1。说明提取两次即可。多糖 含量（） Df/WX100
10、o式中：C为样品溶液的葡萄糖的浓度（UD为样品溶液的稀释因子，f为换算因子，W为样品的重量（Ug）o表1样品中多糖的含量（略）回收率测定周密吸取样品液ml （6份）再别离周密加入不 同量的标准溶液,依样品测定方式测定吸光度，计算回收率平均值为乳 RSD=%o3讨论苯酚硫酸比色法是测定多糖含量较经典有效的方式之一，但各自 的报导中，对反映温度的操纵、试剂中苯酚及硫酸用量不尽相同。常 见的反映温度有煮沸、40恒温和室温3种，鉴于冬季和夏天室温相 差较大，本实验仅比较于前两种条件，证明本法以40恒温30 min 较好。加入苯酚量ml以上时，反映能完成。关于硫酸的用量，经实 验对照以为硫酸占整体积以上
11、时，在重现性、稳固性及回收率方面都 有明显的优越性，而且与文献报导一致2。实验结果说明，北五味子多糖提取两次即可，平均含量为, 比文献报导的稍低3,这可能与北五味子的产地、采收季节等因素 有关。五味子粗多糖的初步药理研究说明4,五味子粗多糖能明显提高小鼠的耐缺氧能力，具有抗疲劳作用，亦能使正常小鼠胸腺和 脾脏的重量的增加。说明五味子粗多糖能够提高机体对环境的适应能 力和防御能力。而北五味子多糖含量较高，这可能是北方五味子药效 较优的缘故之一，可是北五味子多糖的结构组成和生理活性有待进一 步研究。【参考文献】1应国清，俞志明，单剑峰，等.北五味子有效组分的研 究进展J.河南中医，2005, 25 (6)： 84.2 Dong Q, Zheng L J on the determination of oligosaccharide and polysaccharide by modified phenol-sulfuric acid method j.中国中药杂志，1996, 31 (9)： 550.3韩学君，王发善.北五味子有效成份的高效液相层析测 定J.黑龙江医药科学，2003, 26 (4)： 104.4苗明三.五味子多糖对衰老模型小鼠的阻碍J .中国 医药学报，2002, 17 (3)： 188.