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1、多型性腮腺肿瘤p53和Ki多型性腮腺月中瘤p53和Ki-67的免疫组化表达郭树江 河南煤化集团鹤壁煤业公司总医院五官科458000【摘要】目的： 探讨Ki-67、P53的表达与多型性腮腺瘤的发生及其临床病理意义。方法：2004年1月至2009年10月所用之石蜡包埋组织标本的腮 腺多型性腺瘤患者，经随访3年以上，其中良性30例，恶性26例；以正常腮 腺组织30例为对照。应用Envision法检测应用免疫组Ki-67、P53的表达， 分析其与腮腺多型性腺瘤良恶性之间的关系。结果：p53在正常腮腺组织中的表达：腺管细胞P53强阳性1例（3.3%）,中等3例（10.0%）,弱阳性 12例（40.0%）
2、,无表达14例（46.7%）。腺泡细月fi染色阴性25例（83.3%） , 3例弱阳性（10.0%） , 2例中等（6.7%）。间质细胞p53强阳性 1例（3.3%）,弱阳性8例（26.7%） , 21例阴性（70.0%）。Ki-67在正常 腮腺组织中的表达：腺管细胞Ki-67强阳性0例（0.0%）,中等2例（6.7%）,弱阳性6例（20.0%）,无表达22例（73.3%）;腺泡细胞染色阴性27例（90.0%）,弱阳性3例（10.0%）;间质细胞染色强阳性 0例（0.0%）,弱阳性5例（16.7%）,无表达25例（83.3%）。p53在PA表达p53表达强阳性7例（23.3%）,中度染色16例
3、（53.3%）,弱阳性7例（24.4%）。多形性腺瘤粘7软骨样组织中 P53表达强阳性1例（3.3%）,中 度染色11例（36.7%）,弱阳性18例（60.0%） 。 P53在粘液软骨样组织中表 达和月中瘤导管细胞p53表达差异有统计学意义（P0.001 ）。Ki-67在PA 表达Ki-67表达强阳性5例（16.7%）,中度染色12例（40.0% ）,弱阳性 13例（43.3%）;多形性腺瘤粘液软骨样组织中 Ki-67表达强阳性2例（6.7%）,中度染色7例（23.3%）,弱阳性21例（70.0%） 。 Ki-67在粘液软骨样组织中表达与月中瘤导管细胞之间比较差异有统计学意义（P0.01 ）。
4、2.5 p53在CAP表达p53表达强阳性11例（42.3%）,中度 染色 5 例（19.2%）,阴性 10 例（38.5%）。 2.6 Ki-67 在 CAP 表达 Ki-67 表达强阳性13例（50.0%）,中度染色3例（11.5%）,阴性10例（38.5%）。结论：Ki-67、P53在腮腺月中瘤呈高表达，二者联合检测可提高 诊断准确度。【关键词】 腮腺；上皮性月中瘤； 免疫组化检查；月中瘤抑制基因；Ki-67 多型性腮腺瘤（Pleomorphic salivary adenoma, PA ）是最常见的腮腺月中瘤1,部分可呈恶化并发生远处转移2。腮腺癌在多形性腺瘤中（Carcinoma e
5、x pleomor phicadenoma CPA）是存在于多型腮腺瘤中恶性转化所致3,是最常 见的恶性混合瘤，约占全部腮腺月中瘤的10%4。由多型腮腺瘤转化为腮腺癌的确切病理学机制仍然不清，可能涉及不同分子学事件5。癌症的分子生物学研究表明，月中瘤抑制基因如p53功能的缺失可能导致各种癌症的发生6,7。P53 月中瘤抑制基因的突变是人类月中瘤最常见的遗传变异。月中瘤细胞增生程度是反映其生物学行为的重要参数，直接影响着临床治疗和预后，Ki-67是一种敏感而特异的增殖期细胞标记物 网。本研究的目的在于探讨 Ki-67、P53的表达与 多型性腮腺瘤的发生及其临床病理意义。1资料和方法1.1 一般资
6、料 福尔马林固定、石腊包埋组织标本，多型性腮腺瘤30例，CPA26例，男性32例，女性24例，年龄2584 （48.3 3.5）岁；同期切除 的正常腮腺组织30例（男16例，女14例，年龄2177岁）为对照组。所有 标本均经HE染色，并为病理学医生再次确认。1.2 试剂Ki-67单克隆抗体，克隆号：SP12; p53单克隆抗体，克隆号：DO- 11。 显色剂：DAB-0031,福州迈新生物技术开发公司；EnvisionTM+加强型试 齐I盒，丹麦Dako公司，编号：K400033。1.3 方法 石蜡标本4 m厚连续切片，免疫组化采用SP法，石蜡切片置 0.01mmol/L柠檬酸缓冲液微波修复抗
7、原，DAB显色，苏木素复染，脱水、透 明、封片。已知阳性片作阳性对照，PBS替代一抗作阴性对照。1.4 结果判断Ki-67和p53均定位于细胞核，以背景清晰细胞核出现明显棕黄 色颗粒为阳性反应。计数采用Ki-67指数和p53指数S&，指每个标本低倍镜（X100）下观察并确定有代表性的 Ki-67和p53染色阳性视野，选择5个视 野，在高倍镜（X400）下每个视野数200个月中瘤细胞，计算其阳性细胞总数。1.5 统计学分析采用SPSS16.0统计软件处理数据，计量资料的比较采用t检验，计数资料的比较采用卡方检验，取P0.05。2结果2.1 p53在正常腮腺组织中的表达 腺管细胞P53强阳性1例（
8、3.3%）,中等3 例（10.0%）,弱阳性12例（40.0%）,无表达14例（46.7%）。腺泡细胞染 色阴性25例（83.3%） , 3例弱阳性（10.0%） , 2例中等（6.7%）。间质细 胞p53强阳性1例（3.3%）,弱阳性8例（26.7%） , 21例阴性（70.0%）。2.2 Ki-67在正常腮腺组织中的表达 腺管细胞Ki-67强阳性0例（0.0%）,中 等2例（6.7%）,弱阳性6例（20.0%）,无表达22例（73.3%）;腺泡细胞 染色阴性27例（90.0%）,弱阳性3例（10.0%）;间质细胞染色强阳性0例（0.0%）,弱阳性 5例（16.7%）,无表达 25 例（83
9、.3%）。2.3 p53在PA表达p53表达强阳性7例（23.3%）,中度染色16例（53.3%）,弱阳性7例（24.4%）。多形性腺瘤粘液软骨样组织中P53表达强阳性1例（3.3%）,中度染色11例（36.7%）,弱阳性18例（60.0%）。P53在粘液软骨样组织中表达和月中瘤导管细胞p53表达差异有统计学意义（P0.001 ）。2.4 Ki-67在PA表达Ki-67表达强阳性5例（16.7%）,中度染色12例 （40.0%）,弱阳性13例（43.3%）;多形性腺瘤粘液软骨样组织中 Ki-67表达强阳性2例（6.7%）,中度染色7例（23.3%）,弱阳性21例（70.0%） 。 Ki-67在
10、粘液软骨样组织中表达与月中瘤导管细胞之间比较差异有 统计学意义（P0.05）;二者的Ki-67表达亦未显示有显著差异。3讨论3.1 正常腮腺组织中p53和Ki-67表达正常腮腺组织中p53表达呈阴性或弱阳 性，与文献9结果一致。有作者观察 11 正常的胸腺上皮细胞不表达p53,来 自正常口腔黏膜亦无p53表达12;而口腔癌病人的“正常”黏膜呈p53表达阳性 13。月中瘤抑制蛋白p53广泛存在于多种细胞内，在正常细胞，p53的表达很 低，免疫组化方法多呈阴性结果。但是，p53蛋白质的基因编码可发生频繁的 突变，导致突变蛋白质的积累。因而，在 22%70%的恶性月中瘤如结肠癌、胃 癌、膀胱癌、乳腺
11、癌、肺癌、甲状腺癌， p53蛋白质可经免疫组织化学检测证 实皿巴Ki-67是与增殖细胞相关的核抗原，仅分布于核内，其功能被认为与细胞的 有丝分裂密切相关。现已知道 G0期细胞无Ki-67抗原表达，在G1后期开始 出现，S、G2期升高，M期达高峰，其后迅速降解。在甲状腺的皮质组织、 外周淋巴组织生发中心和睾丸未分化的精原细胞中未见表达。Ki-67抗原在非增生性的或低转化性的组织中几乎不表达，它反映的是细胞的增殖情况，月中 瘤细胞的增生活性与月中瘤生物学行为有关。3.2 p53和Ki-67和PA和CPA中表达 以核染色p53强阳性和中度染色作为阳 性，本组中PA检测阳性率为76.6%,与文献结果一
12、致16,17。CPA中阳性表达 为61.5%,文献资料分别为67%10和75%5。Ki-67在PA和CPA中表达阳性 分别为 56.7%?口 61.5%。3.3 p53和Ki-67表达与月中瘤Ki-67反映的是细胞的增殖情况，在许多月中瘤组 织中都高表达。正常宫颈组织中 Ki-67表达只存在于基底层细胞核中，癌组织 中其表达明显增强，它在子宫颈上皮内瘤变I、子宫颈上皮内瘤变R、子宫颈上皮内瘤变出及宫颈癌中表达水平随病变程度的加重而升高，并与宫颈癌的 发生、发展及恶性程度有关。P53基因是定位于人类第17号染色体17P13. 1 的抑癌基因，人类月中瘤中约51种与P53基因突变有关，P53蛋白在
13、细胞增殖 和凋亡调节中起关键作用。另一方面，突变型P53蛋白表达促进月中瘤血管增生，是月中瘤发生发展的机制之一。本研究结果显示，PA和CPA组织中p53和Ki-67表达均较正常的腮腺组织为高，提示组织细胞中二者表达阳性有助于对月中瘤的诊断。但是，由于二者在良或恶性月中瘤组织中均呈高表达，用于鉴别 月中瘤组织良恶尚有困难。总之，本研究结果显示：CPA与PA和正常腮腺组织比较，p53和Ki-67 表达增强，而对于PA和CPA的鉴别意义需要增加样本进一步观察；应用 明确的阳性或阴性判断标准确定肿瘤抑制基因表达可能较不同分级的标准得 到的结果更能令人信服；月中瘤抑制蛋白p53和Ki-67联合染色分析可
14、提高确诊准确度；月中瘤抑制蛋白p53和Ki-67在月中瘤细胞异常表达频率较粘液软骨 样组织中表达异常更为多见，这一结果与粘液软骨样组织不是恶性疾病进展 的重要月中瘤细胞相一致；p53和Ki-67在PA和CPA的表达值得进一步进行 精确的DNA研究，以确定引起突变的可能原因如甲基化或杂合性(heterozygosity丧失对月中瘤发生和发展的影响；由于p53和Ki-67在良或恶性月中瘤组织中均呈高表达，用于鉴别月中瘤组织良恶尚有困难。参考文献1 Ungari C, Paparo F, Colangeli W,et al. “Parotidgand stumours: over view of a
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