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1、分析方法验证或确认培训一、 分析方法的法规要求第十二条 质量控制的基本要求：（四）检验方法应当经过验证或确认；第二百二十三条 物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求：（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证：1. 采用新的检验方法；2. 检验方法需变更的；3. 采用中华人民共和国药典及其他法定标准未收载的检验方法；4. 法规规定的其他需要验证的检验方法。 （三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可 靠；药典或官方标准收载的方法不需完整验证； 需验证方法的适用性（确认） 自研方法或对官方标准进行了大幅调整 需完整验证 二、验证的目的：证
2、明采用的方法适合于相应的检测要求。三：验证项目1. 准确度1.1 定义：是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（）表示。1.2 方法，每份进样测定三次，计算该方法的百分回收率。，取杂质的LOQ 50% 100% 120%&度四个点（也可根据产品质量情况选择其他点），每 个浓度点测定三次。计算百分回收率。123 GC法残留溶剂准确度试验，取残留溶剂限度的 LOQ 50% 100% 120%四个浓度点 （也可根据产品质量情况选择其他点） 溶液，若样品测定浓度值低于限度值的 10%时，应 增加测定限度的 10%的浓度点溶液。 加入样品中， 每个浓度点测定三次， 计算扣除样品浓
3、 度后的百分回收率。2. 精密度2.1 定义：是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度， 一般用偏差，标准偏差或相对标准偏差表示。2.2 方法 ;对同一均匀的样品溶液或标准品溶液，连续重复进样六次，记录每次进样后各组分 的响应，峰面积或峰高，计算各响应值与平均值之间的偏差一一相对标准偏差RSD，稀释）中的误差。分别对同一批号的样品称量六次，按含量测定方法测定其含量，计算每一单一含量 与平均含量之间的相对标准偏差 RSD除另有规定外通常RSD2.0%。22 3.1按验证确定的方法，同一人用同一仪器检测三批样品，每间隔24小时以上，测定一次，共测定3次。专属性
4、-是指在其他成分（如杂质、降解产物，辅料等）可能存在下，采用的方法能正确 测定出被测物的特性。如方法不够专属，应采用多个方法补充。检测限-是指试样中被测物能被检测出的最低量。定量限-是指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测量结果应具一定准确度和精密度。线性-是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。范围一一是指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。耐用性-是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法可用于 提供常规检验依据。五：分析方法的验证项目典型分析方法验证的项目：-专属性specificity-精密度preci
5、sion-准确度accuracy-检测限detection limit定量限quantitation limit-线性linearity范围range耐用性robustness专属性 specificity-定义：指一种方法在有可能的干扰物质（如杂质、降解产物和基质）存在时，能够准确无误地评估 被分析物的能力? 鉴别 : 确保可以鉴别被分析物? 纯度检查：确保所有的分析过程能够为杂质的含量提供准确的数据，如相关物质检查、重金 属限度检查、有机挥发性杂质检查等? 含量测定：提供准确的检测结果以保证含量样品中被分析物的含量或效价值准确无误方法? 定性分析（鉴别） ：样品阳性结果空白阴性结果结构相似
6、物质的阴性结果；? 杂质检查（对照品可得） ：将可能的杂质对照品加入样品中；? 杂质检查（对照品不可得） ：用另外一种官方的标准或经验证的方法对样品和经降解的样品分析， 比较两种方法得到的杂质概 况? 杂质检查（对照品不可得）使用其他技术对峰纯度进行检查，如二极管阵列检测器、 MS 等? 含量测定：被分析物与其他干扰峰完成分离。 向样品中加入一定量的干扰物， 含量测定的结果不受干扰； 查主峰的纯度鉴别试验：本品的红外吸收图谱应与对照品的图谱一致。采用与被测物结构类似的化合物以及被测物分别进行红外测试。被测物为正反应。被测物结构类似的化合物为负反应。被测物结构类似的化合物可选用中间体、副产物或降
7、解产物 等。化学滴定的颜色反应；采用与被测物结构类似的化合物以及被测物分别进行鉴别试验。被测物为正反应。被测物结构类似的化合物为负反应。被测物结构类似的化合物可选用中间体、副产物或降解产物等。精密度 precision定义：对均一样品重复取样检测每个检测结果间的接近程度， RSD%,CV%重复性 repeatability ：短时间内同一分析人员使用同一仪器中间精密度 intermediate precision:在同一实验室内的变化，如不同分析时间、不同分析人员、 不同分析仪器重现性 reproducibility: 在不同实验室内重复方法100%浓度6次3浓度X 3次准确度 accurac
8、y定义：方法的检测结果与真实值的接近程度。方法：原料药：分析已知含量的对照品；第二种确定 的方法分析，结果比较制剂：加样回收；第二种确定的方法分析，结果比较应在方法的范围内计算回收率：3浓度X 3次分析方法的验证 -检测限检测限 detection limit定义： 在声明的实验条件下所能检测到的被分析物的最小量。 限度检查的指标； 表示为在样品中的 浓度% , ppm方法：检测已知浓度的样品 （对照品 ）杂质的 DL0.05%信噪比 2:1/3:1分析方法的验证 -定量限定量限 quantitation limit定义： 在声明的实验条件下被分析物可被定量分析并能满足合格的精密度和准确度的最
9、小值。微量物质的定量分析：有关物质定量分析，有机挥发性物质的定量分析。%，ppm方法：已知浓度样品（对照品）相关物质 0.05 %证明精密度和准确度分析方法的验证-线性与范围线性和范围 linearity and range定义：-线性：在给定的范围内使检测结果直接或通过数学转换后与被分析物在样品中的浓度成比例的能力-范围：在适当的精密度、准确度和线性基础上检测到的被分析物的最低水平到最高水平区间方法：一定范围内的不同浓度点进样，绘制响应值（y）与浓度（x）之间的回归线，计算回归方程,相关系数（r,r2）主成分含量测定：80 % 120 %检测浓度杂质含量测定：定量限（50 %） 120 %标
10、准装量差异：70% 130%检测值溶出实验：土 20%规定范围要提供如下数据:回归方程y = a + bx回归曲线相关系数分析方法的验证 -耐用性耐用性 robustness 定义：分析方法的某些参数发生微小变化时方法抗干扰的能力，表示在正常使用时的可靠性 方法：刻意改变参数，考察结果的变化流动相的 pH 值、流动相的组成（极性的变化） 、 不同供应商柱子、柱温、流速等液相：评估柱温、流速、色谱柱、缓冲盐pH 、有机相比例、流动相比例、溶液放置时间对检测结果的影响气相：评估柱温、流速、色谱柱、溶液放置时间对检测结果的影响分析方法的验证 -系统适用性系统适用性 system suitabilit
11、y耐用性验证的结果影响参数在方法中列出在日常样品分析前、过程中进行考察色谱方法中尤为重要液相和气相可以不同；液相：任何两个组分之间的分离度 R 不小于 1.5；重复进样 （6 次 ）的相对标准偏差 RSD 不大于 2.0%气相：任何两个组分之间的分离度 R 不小于 3；重复进样 （6 次 ）的相对标准偏差 RSD 不大于 15% 。六、分析方法确认适用于药典方法和其他已验证的法定标准。因为药典方法和其他法定标准被认为是验证过的 分析方法，不需要验证，但需要通过方法确认来证明方法在该实验室条件下的适应性。对于方法确认，通常采用两种方式：一、由两名检验人员分别独立对同一批产品进行检验（如可能使用不
12、同的仪器）比较两人的 检测结果来证明方法在本实验室（人员，分析仪器，试剂）的适用性；二、根据验证目的和评估结果选择相关项目进行确认： （具体见下表）表13-1*检验项目髀认内容示囲检检项目准谕度恰密度检制限丘性1S 1用性原 料 药鉴别（HPIX法）否否可能h 香1否杏有关物质（HPLC法）否可能是否是否L| 1*,5含址测定（HPLC祛）否可能可能否制鉴别（ HPLC法）否否是否 i書1否普溶出度可能基厂是可能.苦書!習有关物质|可能是是否是否否否含催测定可能是是否否舌1苦否备注：“是”代表该项内容需鉴确认1 “否”代表该项内容不需要确认“可能代表该顼内客据实际情况评怙确定七、分析方法再验证
13、 在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制剂处方改变、分析方法发生部分改变等，均有必要对分析 方法再次进行部分或完整的再验证，以保证分析方法可靠。当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量测定方法的专属性就需要再 进行验证，以证明有关物质检查方法能够检测新引入的杂质，且新引入的杂质对主成份的含量测定应无干扰。当制剂的处方组成改变、 辅料变更时，可能会影响鉴别的专属性、溶出度和含量测定的准确度，因此需要对鉴别、含量测定方法再验证。当原料药产地来源发生变更时，可能会影响杂质检查和含量测定的专属性和准确度，因此需要对杂质检查方法和含量测定方法进行再验证。再验证原则：根据改变的程度
14、进行相应的再验证。当这种改变到达一定程度时，则需要完整的验证。如分析方法完全改变时，则应视为新方法并需要完整的验证。方法再验证是对分析方法的完善过程， 应根据实际改变情况进行再验证，从而保证所采用的分析方法能够控制药品的内在质量分析方法的验证内容程序内容建立验证方案1、确定标准及方法2、确定试验及检查范围3、确定步骤4、方案审批分析仪器的确认1、安装：确认安装、检查、文件检查及保存2、仪器校正3、适用性预试验4、再确认：制订再确认的周期5、制订使用、清洁、保养规程，建立记录适用性试验1、准确度试验：回收率测定2、精密度试验：重现性，相对标准差常规 1.0 %, HPLC 应 2.0 %3、专属性4、检测限5、定量限6、线性7、范围&耐用性验证报告评价及批准验证证书审核、签发