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1、槐米中芸香昔（XX）的提取与鉴定【实验目的】1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。【实验原理】采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香昔结构中含有酚疑基，具酸性，能溶 于碱水，当加入酸溶液后，则芸香昔沉淀析出。芸香昔的精制是利用其可溶于 热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。【实验材料】设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、 滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH试纸、新华色 谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸憎水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸
2、、95%乙醇、氢 氧化锁、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标 准品、船皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、a-蔡酚、氢氧化钠、碳酸氢 钠、碳酸钠、镁粉、苯胺邻苯二甲酸、醋酸镁【实验步骤】实验1、芸香昔的提取:称取槐米粗粉20g,置500ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200ml,在 搅拌下加石灰乳，调至pH89,加热微沸20分钟（注意保持pH89）,并随 时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。滤渣同样操作再提取一次，合并 两次滤液。滤液在60C70C用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全， 抽滤，沉淀用蒸慵水洗23次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香昔粗品。
3、实验2、芸香昔的精制：称一定重量的粗品，按约1 : 200的比例悬浮于蒸慵水中，煮沸10分钟使 其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置空气中晾干或60。（： 70C干燥，得精制芸香昔，称重，计算得率。实验3、芸香昔的水解和鉴定：取芸香昔lg,研细后置于250ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100ml,直 火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留 作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制f斛皮素，然后 用乙醇（95%乙醇约15ml）重结晶即得精制榊皮素。（可省略重结晶过程）4、鉴定：（1）糖的纸色谱鉴定：样品：取上述滤去榊皮素的水解母液2
4、0ml,搅拌加饱和的氢氧化顿水溶液中和至 PH7,滤去沉淀，滤液浓缩至12ml得样品液对照品：葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液支持剂：新华色谱滤纸（中速15cmx7cm）XX:正丁醇醋酸水（4:1:5）上层液显色剂：苯胺邻苯二甲酸试剂喷雾，105C烘10分钟，显棕色或棕红色斑点（2）芸香昔、桝皮素的纸色谱鉴定：样品：1）自制芸香昔乙醇液2）自制懈皮素乙醇液体对照品：1）芸香昔标准品乙醇液2）桝皮素标准品乙醇液支持剂：新华色谱滤纸（中速15cmx7cm）展开剂：1）正丁醇醋酸水（4:1:5）上层液2） 15%醋酸水溶液显色剂：1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫外灯下观察斑点颜色2）经氨
5、气熏后再观察3）喷三氯化铝试剂后再观察（3）Molish 反应：取芸香昔少许置小试管中，加乙醇0.5ml,加10%a蔡酚溶液lml振摇使溶 解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml,静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫 色坏者为阳性。以同法试验船皮素，比较二者的不同。（4）酸性实验：取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香昔lmg,第二组每 试管中加入船皮素lmg,每组分别加稀氨水、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液 和1%氢氧化钠溶液各2ml,振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄 色。再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。（5）镁粉盐酸反应：取芸香昔lmg,加乙醇12
6、ml在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg,滴加 几滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者，表示有黄酮类化合物。以同法试验榊皮 素。（6）三氯化铝反应：取芸香昔lmg,加甲醇12ml在水浴上加热溶解，加入1%三氯化铝甲醇 溶液23滴，呈鲜黄色，以同法试验榊皮素。（7）醋酸镁反应：取芸香昔lmg,加甲醇12ml水浴中加热溶解，加1%醋酸镁甲醇溶液2 3滴，呈黄色反应。以同法试验船皮素。【实验说明】1、硼砂的作用，芸香昔分子中因含有邻二酚疑基，性质不太稳定，暴露在空气中能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼酸盐 能与邻二酚耗基结合，达到保护的目的。但其价格较高，工业上用较大量的石 灰加少量硼砂
7、，同样达到提高质量要求。2、加入石灰乳，使pH89,既可以达到碱溶解芸香昔的目的，又可以除 去槐米中含有的大量多糖黏液质。但pH不能过高，碱处理时间尽短，以减少酚 类氧化分解。3、用浓盐酸调pH45, pH过低会使芸香昔降低得率。4、提取时也可以不加碱，直接用沸水提取，得率也比较高。【实验思考】1、芸香昔经硫酸溶液水解后得到船皮素沉淀，试分析其水解母液加饱和的 氢氧化顿水溶液的目的是什么？2、为什么用碱溶酸沉法提取芸香昔时，要注意pH的控制？实验4从八角中提取茴香油水蒸汽蒸镭法将新鲜的八角枝叶或干果剪碎后，用分凝器、冷凝器、油水分离器合理组合 快速分离制备八角茴香油,此法可使油水自动快速分离，操作简便,提油时间短、得 油率高，油质量高。主要仪器设备及安装：切碎机（1台），蒸馅锅，分凝器，冷凝器，油水分离器取50g新鲜八角枝叶或干果于烧瓶中（八角干果加蒸憎水浸泡过夜），用 水蒸气蒸馅提取，直至憎出液约500mL为止，共耗时4h,放置冷却后用NaCI 盐析，分出油状物，再用无水Na2S04干燥，称重，计算产率。