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1、文档从网络中收集，己重新整理排版.word版本可编辑.欢迎下载支持.分子荧光光谱实验报告篇一：分子荧光光谱实验报告分子荧光光谱实验报告一、实验目的：1.掌握荧光光度法的基本原理及激发光谱、发射光谱的 测定方法；学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性分析。 2 ,了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。3.了 解影响荧光产生的几个主要因素。二、实验内容：测定荧光黄/水体系的激发光谱和发射光谱；首先根据已知的激发波长（如果未知，则用紫外分光光 度计进行测量，以最大吸收波长为激发波长）测定发射光谱， 得到最大发射波长；然后根据最大发射波长测定激发光谱， 得到最大激发波长；然后在根据最大激发波长测定
2、测定发射 光谱；根据所得数据，用origin软件做出光谱图。三、实验 原理：某些物质吸收光子后，外层电子从基态跃迁至激发态， 然后经辐射跃迁的方式返回基态，发射出一定波长的光辐射, 此即光致发光。光致发光现象分荧光、磷光两种，分别对应 单重激发态、三重激发态的辐射跃迁过程。本实验为荧光光 谱的测定。激发光谱：在发射波长一定的条件下，被测物吸收的荧1格式已调整，word版本可编辑.文档从网络中收集，已重新整理排版.word版本可编辑.欢迎下载支持.光强度随激发波长的变化图。发射光谱：在激发波长一定的条件下，被测物发射的荧 光强度随发射波长的变化图。各种物质均有其特征的最大激发波长和最大发射波长,
3、 因此，根据最大激发波长和最大发射波长，可以对某种物质 进行定性的测定。四、荧光光谱仪的基本机构五、实验结果与讨论：XX00SI / RI (CPS / MicroAmps)15000010000050000OWavelength (nm)400000SI / RI (CPS / MicroAmps)300000XXOO100000Wavelength (nm)400000荧光黄/水体系第二次发射光谱SI / RI (CPS /MicroAmps)300000XX00100000Wavelength (nm)篇二：实验课-分子荧光光谱法实验报告实验二分子荧光光谱法实验目的1、掌握荧光光度计的基
4、本原理及使用。2、了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用；3、掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激 发光谱、发射光谱的测定方法。实验原理1、激发光谱与发射光谱具有不饱和基团的基态分子经光照后，价电子跃迁产生 荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到 基态S0各振动能级所产生的光辐射。激发光谱：是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光 波长(或频率)变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标 为发光相对强度。激发光谱反映不同波长的光激发材料产生 发光的效果。即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长 的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光 激发材料时，使材料发出某一
5、波长光的效率。荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确 定一一激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强 度随激发波长变化的光谱；获得方法：先把第二单色器的波 长固定，使测定的?em不变，改变第一单色器波长，让不同 波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐 标，？ex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线 上找出？ex,实际上选波长较长的高波长峰。发射光谱：是指发光的能量按波长或频率的分布。通常 实验测量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长 （或频率），纵坐标为发光相对强度。发射光谱常分为带谱 和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的情况。发射光 谱的获得
6、方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的？ex 不变，改变第二单色器波长，让不同波长的光扫描，测定它 的发光强度，以I为纵坐标，？em为横坐标得图谱即荧光物 质的发射光谱，从曲线上找出最大的?em。2、荧光分光光度计包括四个部分，即激发光源、样品池、双单色器系统、 检测器。特殊点是有两个单色器，光源与检测器通常成直角。单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光 （测量）波长的第二单色器光源：氤灯、高压汞灯、激光器（可见与紫外区）检测器：光电倍增管仪器材料仪器：HORIBA Fluoromax-4荧光光谱仪试剂：罗丹明 B 、2-蔡酚、3, 3 -Diethyloxadicarbocyani
7、ne iodide （碘化-3, 3 一二 乙基氧杂二谈花青）浓度分别为40?g/mg、30?g/nig、20?g/nig、 10?g/mg以及未知浓度试样一份。实验步骤1、按照实验原理中的方法分别扫描得到罗丹明B、2- 蔡酚和碘化-3,3二乙基氧杂二谈化青（选取最高浓度的 标准样品）的分子荧光光谱，确定三者各自的激发波长？ex 和发射波长?em。扫描确定未知溶液的？ex和?em,根据图谱 形状和激发、发射最大波长等信息确定未知溶液的物质种类。2、在选定的激发波长?ex和发射波长?em下，测定不同 浓度碘化-3, 3 -二乙基氧杂二默化青标准溶液的相对荧光 强度。3、以相对荧光强度为纵坐标，以
8、标准溶液的浓度为横 坐标，绘制碘化-3, 3二乙基氧杂二谈化青的标准曲线。4、依据碘化-3, 3 -二乙基氧杂二城化青的标准曲线和 未知溶液在?ex和？em的相对荧光强度（由步骤1已确定为 默化青溶液）推算出其浓度。图一分子荧光分析仪基本部件示意图实验结果及分析图二1罗丹明B激发光谱 图二2罗丹明B荧光 光谱图三1 2-蔡酚激发光谱图三22-蔡酚荧光光谱图四罗丹明B分子结构图五2-蔡酚分子结构发射光谱与激发光谱没有直接关系，发射光谱波长一 般比激发光谱波长要长。从荧光光谱上可得出罗丹明B fij?em(max)?566nm, 2-蔡酚的？em(niax)?368nni。由于具有共枕体系的芳环或
9、杂环 化合物，？电子共规程度越大，越易产生荧光；环越多，共 朝程度越大，产生荧光波长越长，发射的荧光强度越强。分 析两种物质分子结构可知，罗丹明B共加程度更大，因此荧 光波长更长，与实验值相符合。表一标准曲线法实验数据图六标准曲线(注：从曲线可以看出数据点(40, 13440)严重偏离 曲线，故舍去)分析未知试样的激发光谱和荧光光谱可知其Em?610nm, Ex?579nm , 查阅相关文献可知为 3, 3, -Diethyloxadicarbocyanine iodide (碘化-3, 3 一二 乙基氧杂二霞花青)，根据标准曲线可知未知样品浓度C?36. 7?g/mgo实验小结1、从实验图上
10、可以看出有许多尖峰属于误差，最大值 应当选择平缓的位置，避免尖峰位置。2、在标准曲线上可以看到有一数据点严重偏离曲线， 舍去，可能原因为实验时短暂，操作上的误差，选择激发波 长位置的仓促性以及经验性等。3、通过这次实验，掌握了分子荧光光度计的应用方法 和工作原理，熟悉并掌握了利用分子荧光光度计进行定性分 析的实验方法和原理。篇三：荧光光谱实验报告近代物理实验报告实验4-1荧光光谱【摘要】激发态分子返回基态而产生光辐射的跃迁， 称为辐射跃迁，即荧光。本实验利用RF-5301PC荧光分光光 度计测量了不同浓度的维生素B2溶液的光谱特性。固定激 发光波长，扫描发射光波长，得到荧光发射光谱；固定发射
11、光波长，扫描激发光波长，得到荧光激发光谱。【关键词】荧光，光谱，激发，发射原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再 回到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原 子荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的 荧光指分子荧光。以物质发射的荧光强度与浓度之间的线性 关系为依据进行定量分析及以荧光光谱的形状和荧光峰对 应的波长进行定性分析的方法称为荧光分析法。在荧光分析 中，将荧光分为自然荧光和人工荧光，本实验所述荧光为自 然荧光，即无须经过处理，当受到激发光照射时就能产生荧 光的现象。一、实验目的?理解并掌握荧光产生的机理。?学会测定不同浓度物质溶液的荧光激发光谱和发荧 光射
12、光谱。? 了解影响荧光产生的几个主要因素。二、实验原理原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回 到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原子 荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧 光指分子荧光。1 .产生过程（如图1）?光吸收：荧光物质从基态跃迁到激发态。此时，荧光 分子处于激发态。?内转换：处于电子激发态的分子由于内部的作用，以 无辐射跃迁过渡到低的能级。？外转换：处于电子激发态 的分子由于和溶剂以及其他分子的作用，以及能量转移，过渡到低的能级?荧光发射：如果不以内转换的方式回到基态，处于第 一电子激发态最低振动能级的分子将以辐射的方式回到基 态，平均寿命约为
13、10ns左右。?系间转换：不同多重态,有重叠的转动能级间的非辐 射跃迁。?振动驰豫：高振动能级至低相邻振动能级间的跃迁。 发生振动弛豫的时间。图12 .光谱特性?激发谱：固定测量波长（选最大发射波长），化合物发 射的荧光强度与激发光波长的关系曲线。激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多， 荧光强度最大。?发射谱：固定激发波长，发射强度与发射波长的关系。1） Stokes位移：激发光谱与发射光谱之间的波长差 值。发射光谱的波长比激发光谱的长，振动弛豫消耗了能量。2）发射光谱的形状与激发波长无关：电子跃迁到不同 激发态能级，吸收不同波长的能量，产生不同吸收带，但均回到第一激发单重态的最低 振动
14、能级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光。3）镜像规则：通常荧光发射光谱与它的吸收光谱（与 激发光谱形状一样）成镜像对称关系。4）荧光寿命和荧光量子产率。去掉激发光以后，荧光强度并不是立即消失，而是以指 数形式衰减。定义荧光强度降低到激发状态最大荧光强度的 1/e所需要的时间称为荧光寿命。荧光寿命是个很重要的参 数，可以不再对荧光的绝对强度进行测量。荧光寿命方程：Q为量子产率，为荧光发射速率，k为非辐射转移速率, Tn为荧光自然寿命.通常量子效率和波长相关，但生化的荧 光通常和波长无关。3.影响荧光分析的几个主要因素：9 9999999 ?样品温度的影响：降低体系温度可以提高荧光量子产 额。样品
15、的光化反应：光化反应使荧光强度降低。杂散光 干扰：散射光来自激发光溶剂分子的散射（瑞利散射）或被 小颗粒或气泡的散射。通过在发射单色仪前和激发单色仪后 插入相应的短波截止滤光片来消除。溶剂的影响：增加溶 剂的极性，有利于荧光的产生。溶剂的拉曼散射光：当溶 剂具有拉曼活性时，在激发光长波边会出现（转载自：小草 范文网：分子荧光光谱实验报告）类似荧光的拉曼散射峰。 样品浓度效应：浓度高时荧光强度下降，需要校正。样品 污染的影响：轻微的污染都会影响测量的准确度。溶解氧 的影响：溶解氧对一定样品有明显的荧光消光效应（猝灭）。 PH值的影响：弱酸或弱碱分子和它们的离子在电子构型上不 同，是不同的型体，各
16、具有特殊的荧光量子产额和荧光光谱三、实验内容和装置实验装置如图2o图2图3激发单色仪将款灯输入的连续光谱分理出单色光输 出，作为激发光。激发光照射到样品上，样品发射的荧光则 由发射单色仪进一步分光并被光电倍增管PM2接收。PM1用 于监控低灯光源光强起伏。通过分束器获得激发光强起伏信 号，并反馈到PM2电路中，这被称为光源补偿系统。RF-5301PC 型分光光度计的光学系统示于图3o实验步骤：1 .制备样品：配置不同浓度维生素B2溶液：5ug/mL10 u g/ml, 15 u g/ml, 20 u g/ml,25 u g/ml 各 10ml；2.样品的激发光谱特性：选择400nm激发波长，对样 品照射，然后扫描荧光发射波长，检测荧光发射峰值波长。然后将单色仪固定于峰值波长上, 对激发波长进行扫描，得到激发光谱图像；3,样品的发射光谱特性：激发光波长设置在激发光谱 的峰值波长处，对被测样品照射，扫描荧光发射波长。四、数据处理和分析1 .维生素B2溶液浓度为5 Hg/ml2 .维生素B2溶液浓度为10 u g/ml3 .维生素B2溶液浓度为15 ug/ml4 .维生素B2溶液浓度为20 Hg/ml14格式已调整，word版本可编辑.