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1、沙门菌属和志贺菌属检验步骤和方法1 .形态观察(1)革兰染色：沙门菌属细菌为革兰阴性细长杆菌.志贺菌属细菌为革兰阴性杆菌,散在分布.(2)观察鞭毛染色标本片：镜下可见沙门菌属细菌具有周鞭毛.志贺菌属细菌无鞭毛.2 .菌落观察(1)沙门菌属：将本菌接种在 S& MA评板上经35c孵育1824h.由于本菌不分解乳糖并产碱,故 在SS和MA评板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落,产生H2s的菌落可在SS平板上形成中心带黑褐色的小菌落.(2)志贺菌属：将本菌接种在 SS和MA评板上经35 c孵育1824h.由于志贺菌不分解乳糖,宋内 志贺菌某些菌株可缓慢发酵乳糖,故其在SS平板和MA评板上形成
2、无色透明的、中等大小的菌落.除宋内 志贺菌菌落外均为光滑型菌落.3 .生化反响氧化酶试验：方法同大肠埃希菌.沙门菌属和志贺菌属细菌氧化酶试验均为阴性.初步试验鉴定：挑取志贺菌和沙门菌的单个菌落分别接种在KIA、MIU和硝酸盐培养基上,经35c孵育1824h,同时做触酶试验其结果见表2 4.表2-4志贺菌属和沙门菌属的根本生化反响KIAMIU氧化 酶触 酶硝酸盐还 原斜面底层产 气H2S、动 ,力咪月尿 酶志贺苗KA-/+-+/-+伤寒沙门菌KA-+/-+-+乙型副伤寒 菌KA+-+最终鉴定：须做全面生化反响和血清学试验.4 .血清学试验(1)志贺菌属的分型鉴定：凡生化反响符合志贺菌属者均需做血
3、清学鉴定.取1环志贺菌四种多价血清于载玻片一端,再取少许待测菌与之混合,同时在玻片另一端取待测菌与生理盐水混合对照.结果：对 照呈均匀混浊,待检菌与志贺菌四种多价血清混合后,数分钟内出现肉眼可见的颗粒状凝集物即为阳性.继之用A、B、C、D群最常见的单价血清凝集定种.结果判断、解释和报告：别离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合志贺菌属鉴定依据者可报告“未别离到志贺菌属细困 .经别离鉴定后符合鉴定依据者,可报告“别离出XX志贺菌,假设进一步做多种生化反响及因 子血清分型后,可报告：“别离出X X志贺菌X型.(2)沙门菌属的分型鉴定：如果生化反响及形态学检查疑为沙门菌,可选用沙门菌的多价诊断血清进行玻片
4、凝集.首先选用 AF组多价O诊断血清做玻片凝集试验.在试验时应以生理盐水作对照.血清 凝集试验在510min内不出现凝集者可确定为阴性.但假设生化反响比拟典型,应考虑选用Vi凝集试验假设凝集,那么用无菌生理盐水将菌洗下,制成浓厚的悬液,加热 100C、30min,再与AF组多价O诊断血清做凝集试验.假设与 AF组多价O血清发生凝集,应再与沙 门菌单价因子血清分别做玻片凝集试验,以确定该菌株属于哪一组.一般先选用本地区检出率最高菌型的 相应血清做玻片凝集反响.假设已确定哪一沙门菌种后,再分别先用H因子血清检查第I相抗原,然后检查第口相抗原,最后确定该菌种属于哪一型沙门菌.结果判断、解释和报告：别
5、离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌属细菌鉴定依据者,可报告“未别离出沙门 困 .生化反响符合沙门菌、 玻片凝集试验结果阳性, 可初步报告为：“别离到XX沙门菌, 或“X 群沙门菌.5 .肥达试验(1)原理：用的伤寒沙门菌 Q H抗原,甲、乙型副伤寒沙门菌的H抗原(PA、PB)与肠热症患者血清做定量试管凝集试验,以出现“ 2+凝集的最高血清稀释度为效价,测定相应抗体含量,用以辅助诊 断肠热症.(2)试验方法：为单管稀释法.准备 4排小试管,每排3. 8ml及被检血清 O. 2ml,混匀,即为1： 20稀释,总量为 排小试管中的第1支试管中.再于上述中号试管内加生理盐水 此稀释度血清2ml,
6、按每管0.5m1分别加到各排小试管中的第7支并标记,另取中号试管4ml o然后取出2ml按每管2ml混匀,此种血清即为1支,加生理盐水0.5m1分别放人各1: 40稀释,吸取2支试管中.以此类推连续稀释到各排小试管第6支试管为止,第7支小试管只参加0.5ml生理盐水做阴性对照.然后按表 2-5操作.表2-5血清学试验(肥达试验)方法试验管(每管0.5ml稀释血清)对照管1: 201: 401: 801 : 1601 : 3201: 640生理盐 水O抗原0.50.50.50.50.50.50.5H抗原0.50.50.50.50.50.50.5PA抗原0.50.50.50.50.50.50.5P
7、B抗原0.50.50.50.50.50.50.5血涓取终稀 释1: 401 : 801 : 1601 : 3201 : 6401 : 1280-振荡片刻,置于45c水浴箱中2h或37c水浴箱4h,取出置室温或放冰箱中过夜,次日观察并记录 结果.(3)结果判断解释和报告：先观察对照管,正确结果应无凝集反响, 再分别与对照管比拟观察各试管 凝集情况.根据液体透明度和凝集块多少,以 4+、3+、2+、+、-符号记录4+:上清液完全澄清,细菌凝集块全部沉于管底.3+:上清液澄清度达75%,大局部细菌凝集成块沉于管底.2+:上清液澄清度达50%,约50 %细菌凝集成块沉于管底.25 %+ :上清液体混浊
8、,管底仅有少局部细菌凝集成块,上清液澄清度仅有-:液体均匀昆浊,无凝集块.以呈现2+凝集现象的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价.一般认为,伤寒沙门菌O抗体凝集价在1: 80以上,H抗体在1: 160以上,甲、乙、丙型副伤寒沙门菌凝集价在1: 80以上才有诊断意义.考前须知1 .参加诊断菌液时,由对照管开始往前,每管各加O. 5ml o2 .结果观察时不要振荡试管,先观察,必要时再轻摇试管使凝块从管底升起,最后按液体的清浊,凝 块的大小进行记录,对照管不凝集与试验管同时对着光线往暗处看液体透明度和凝集块.3 . “H凝集呈絮状,以疏松之大团铺于管底,轻摇试管即能荡起,而且极易散开.4 . “O凝集呈颗粒状,以坚实凝片沉于管底,轻摇试管不易荡起,且不易散开.注：专业文档是经验性极强的领域,无法思考和涵盖全面,素材和资料局部 来自网络,供参考.可复制、编制,期待你的好评与关注