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1、二氧化氯(ClO_2)对扩展青霉致病力及其产毒能力的影响二氧化氯(ClO2)作为食品添加剂已经被广泛应用于果蔬和水产品的保鲜中。目前 , 关于二氧化氯的研究一般集中于二氧化氯对果蔬贮藏保鲜、对细菌的抑制效果及抑菌机理上, 但关于二氧化氯对果蔬采后致病真菌的抑制作用研究很少, 对扩展青霉的次级代谢产物棒曲霉毒素的研究也几乎没有。本文首先研究了不同品种苹果果实中棒曲霉毒素的分布规律, 这可以为消费者及企业安全使用苹果提供理论支撑。然后探究了二氧化氯对果蔬采后致病菌扩展青霉的体外及体内的抑制效果, 评估二氧化氯对棒曲霉毒素的降解能力。为深入研究二氧化氯降低棒曲霉毒素含量的机理, 采用核酸染色、罗丹明
2、123 染色、扫描电镜观察、刚果红染色等技术手段探讨了二氧化氯对果蔬采后致病真菌扩展青霉细胞膜形态、线粒体功能、细胞膜透性、孢子活性、代谢活性等产生的抑制效应；通过实时荧光定量PC敬术检测棒曲霉毒素合成相关基因的表达情况 , 分析二氧化氯在棒曲霉毒素合成途径中发挥的作用。实验结果表明:1.通过探究苹果中棒曲霉毒素分布规律发现, 棒曲霉毒素不止存在于苹果腐烂部位在未腐烂部位依然能检测到棒曲霉毒素；苹果组织pH值能够影响扩展青霉的致病力 , 苹果病斑直径、相同部位扩展青霉数量及棒曲霉毒素含量与苹果组织pH值呈正相关。实验结果为阐述果实组织环境pH值在防御真菌侵染中的作用提供一定的理论依据 , 为安
3、全食用苹果以及苹果制品生产企业腐烂苹果的处理操作工艺的建立提供指导。2. 采用含药培养基的方法研究二氧化氯对扩展青霉菌丝生长的影响发现二氧化氯能够抑制其生长,400 mgL-1 的二氧化氯能够完全抑制扩展青霉的生长; 采用损伤接种的方法将二氧化氯应用于果实活体防效研究, 发现二氧化氯也能够在一定程度上抑制苹果果实腐烂; 测定苹果相关的品质指标,发现二氧化氯能够有效延长苹果的贮藏期, 证明二氧化氯可以应用于苹果果实的防腐保鲜中。通过测定苹果果实及液体培养基中棒曲霉毒素的含量发现, 二氧化氯能够抑制苹果果实及液体培养方式下棒曲霉毒素的含量。3. 以扩展青霉为目标菌株, 探究二氧化氯对其菌丝表面形态
4、、细胞膜完整性、线粒体功能、代谢能力以及膜过氧化程度的影响。通过扫描电镜发现二氧化氯处理可以改变扩展青霉菌丝表面形态, 使其粗糙、干瘪 , 经过 350 mg L-1 二氧化氯理后的扩展青霉菌丝表面发现粘连,塌陷严重, 菌丝表面边界变得模糊不清;PI 染色后 , 流式细胞仪下观察到二氧化氯处理组中孢子死亡率约为98.21%,而对照组中孢子死亡率仅为10.35%;罗丹明123 染色后 , 对照组中荧光强度为141.72, 用二氧化氯处理后荧光强度为336.52,是对照组的2.37 倍 , 这表明二氧化氯处理处理降低了线粒体的膜电位, 导致扩展青霉孢子线粒体受损, 细胞发生凋亡; 扩展青霉菌丝中丙二醛的含量与二氧化氯浓度呈正相关, 这说明二氧化氯可使细胞膜发生膜脂过氧化, 损伤细胞; 通过刚果红染色实验发现二氧化氯抑制扩展青霉的代谢水平及产毒能力。4. 通过实时荧光定量PCR佥测棒曲霉毒素合成相关基因的表达情况，分析二氧化氯在棒曲霉毒素合成途径中发挥的作用。总体而言 , 二氧化氯能够影响这15 个基因的表达, 这说明二氧化氯可以通过控制扩展青霉中棒曲霉毒素合成途径降低棒曲霉毒素的产量。