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1、钮酸盐氧化法测定血清胆红素的分析评判【摘要】目的：对测定胆红素的钢酸盐氧化法进行分析评判。方 式：用钢酸盐氧化法测定胆红素，并对其的周密度、稳固性、灵敏度 及干扰因素进行分析。结果：锐酸盐氧化法测定胆红素的批内、批间 CV<%,可信检测范围可达:钢酸盐总胆红素(TBil)684 Umol/L,直 接胆红素(DBil)342 Umol/L,回收率达至收。用1 ： 8肝素抗凝， 测定直接胆红素明显降低，P<； 1 ： 10肝素抗凝，测定直接胆红素, 有轻度的负干扰。维生素CW g/L时，无干扰，而溶血及脂质对钮酸 盐氧化法干扰小。结论：钮酸盐氧化法应用方便，重复性好，灵敏度 高，抗干扰
2、性强。【关键词】胆红素；钢酸盐氧化法；肝素抗凝1993年日本学者Tokuda发表了血清胆红素的钮酸盐氧化测 定法。随着商品化钮酸盐胆红素氧化法试剂的推行，目前国内用户众 多:1L本文对其周密度、稳固性、灵敏度及干扰因素进行评判和分 析。1材料和方式试剂和仪器试剂一酸盐总胆红素(TBil)试剂盒、直接胆红素(DBil) 试剂盒由东瓯生物工程提供，临床用20%英脱利匹特脂肪乳由华瑞制 药提供，维生素C由湖北中天爱白药业提供，12 500 U/2 ml肝素注 射液由天津市生物化学制药厂提供。血红蛋白液的制备:取1份约3 nli 肝素钠抗凝血，反复加入生理盐水洗涤，最后加入蒸储水离心取上清 液，用KX
3、 21N血细胞分析仪测Hb为100 g/L。仪器日立7060全自动生化分析仪，Sysmex KX 21N血细 胞分析仪。统计学处置 计量资料数据以土s表示，采纳配对t查验。 P<具有统计学意义，利用SPSS软件进行统计分析。测定原理在pH 3周围，表面活性剂和钢酸作用于血清 TBil,使之氧化成胆绿素，使胆红素所特有的黄色减少，由此测定钢 酸作用前后450 nm吸光度的转变求出血清中TBil的浓度。在pH 3 周围，当试剂中缺少表面活性剂时，钢酸只与血清中结合胆红素作用, 使之氧化成胆绿素，现在测定450 nm吸光度下降值求出血清中DBil 的浓度。要紧测定参数在日立7060型全自动生化
4、分析仪商用机酸 盐氧化法测定血清胆红素要紧参数如下:波长450/546 nm；温度37 ； 方式为二点终点法。试剂1 280 U1,样本10 H1,反映5 min,读取 第1点吸光度；然后加入试剂H 70 U1,再反映5 min,读取第2点 吸光度。2结果周密度用一中值质控物，持续测定20次，再天天测1次, 共20 d,结果见表lo表1钢酸盐法测定胆红素的周密度（略）从表1能够看出，钮酸盐测定胆红素，批内及批间都有良好 的重复性。线性范围 取TBil为Umol/L, DBil为Umol/L的低值血 清对TBil为684 口 mol/L.DBil为342 u mol/L的患者高值血清别离 按1
5、：五、2 ：五、3 ：五、4 ：五、5 ： 5的比例稀释，用钢酸盐法测定 每份标本的TBil及DBil含量，各浓度均重复测定4次，观看其线性, 结果说明TBil在684 umol/L内、DBil在342 Umol/L内仍维持良 好的直线关系。回收实验在ml TBil浓度为H mol/L, DBil浓度为U mol/L的血清标本中加入ml胆红素标准液。胆红素标准液浓度：高值 TBil 为 umol/L, DBil 为 u mol/L；中值 TBil 为 umol/L, DBil 为 limol/L；低值 TBil 为 Umol/L, DBil 为 umol/L。测定标本中 TBil、 DBil浓
6、度。钮酸盐氧化法测定TBil的回收率别离为、%,平均回 收率为； DBil回收率别离为%、%、%,平均回收率为。3干扰实验肝素干扰实验将新鲜血液别离加入预先备制好的无肝素 液、1 ： 8肝素抗凝液、1 ： 10肝素抗凝液、1 ： 12肝素抗凝液20 H 1 （每毫升血液加入量），使每毫升含肝素OU、U、U、U,测定TBil、DBilo结果用1 ： 8肝素抗凝，测定DBil明显降低，P<； 1 ： 10肝 素抗凝，测定DBil,有轻度的负干扰，见表2。表2肝素对胆红素测定的阻碍（略）注：*示比较不同有显著性，P<,平均误差：（2）、（3）、 （4）组测定结果与（1）组之差。溶血干扰实
7、验将己知值的100 g/L血红蛋白样品，作0, 1/2, 1/4, 1/8, 1/16稀释后，别离按1 ： 9加入高低两个水平临床 新鲜血清中进行分析,检测TBil、DBilo结果HbWlO g/L时对TBil无阻碍，对DBil有轻度负干扰。HbW5 g/L时对DBil无阻碍，见表3。 表3溶血对胆红素测定的阻碍（略）脂血干扰实验别离取0%5%的脂肪乳ml加入ml混合血 清，在高低两个水平临床新鲜血清中测定TBil、DBilo结果5%以下 的脂质对TBil测定无阻碍，对DBil测定大体无阻碍，见表4。表4脂质对胆红素测定的阻碍（略）维生素C干扰实验将维生素C g/L作0, 1/2, 1/4,
8、1/8, 1/16倍比稀释后，再别离按1 ： 9加入高低两个水平临床新鲜血清中 测定TBil、DBilo结果在血清中维生素CW g/L时，对测定物无阻碍, 见表5O表5维生素C对胆红素测定的阻碍（略）4相关实验随机抽取60份患者标本别离用钢酸氧化法（Y）和重氮法（X） 测定其血清胆红素，用SPSS软件包进行相关性分析比较：TBil （ u mol/L) Y= X+, r=； DBil ( Umol/L) Y= X+, r=o5讨论胆红素测定应用最普遍的化学测定方式是依照Ehrlich在 1883年成立的重氮反映方式，但其阻碍因素多，尤其溶血、脂血对其 阻碍更大，且需在利历时临时配制试剂，比较麻
9、烦2。氧化酶法受 溶血阻碍较大，而钝酸盐法弥补了这些缺点，它具有抗溶血、抗黄疸、 抗脂血等优势，能够测定TBil和DBil；同时该试剂具有良好的稳固 性，试剂开瓶稳固性极佳，TBil试剂可室温寄存。咱们对此法进行了 系统评判。实验结果说明，此法具有较好的周密度，在批内、批间 CV<%,可信检测范围可达:TBil 684 u mol/L, DBil 342 Umol/L, 回收率达到抗Hb能力和脂血干扰能力强,即便当Hb达5 g/L 时，对钢酸盐法仍无干扰。该干扰因素是溶血引发的重氮法测定胆红 素误差的要紧缘故，另一缘故是血红蛋与重氮试剂反映形成的产物能 够破坏偶氮胆红素3L据报导称维生素
10、C对钮酸盐法无干扰4, 而咱们的实验结果是：当维生素CW g/L时，对此方式无干扰，当维 生素C> g/L时，致使结果偏低，缘故可能是维生素C的还原性所 至。实验结果还显示：1 ： 8肝素抗凝组即每毫升血含U肝素抗凝管与 血清比较，TBil结果稍低，经统计学处置无显著意，DBil明显降低 （P<）o 1 ： 10肝素抗凝组即含U/ml的肝素抗凝管与血清比较，DBil偏低，有轻度的负干扰。临床上应用肝素抗凝经常使用量为：1 mg （25 U）肝素抗凝5 ml10 ml全血。按最小用量U肝素抗凝1 ml 全血计算，此浓度对TBil和DBil都有轻度的负干扰，而高于此浓度, 那么对DBi
11、l有明显的负干扰。因此，在应用肝素抗凝血浆胆红素时, 应严格操纵肝素与全血的比例。综上所述，帆酸盐法在抗干扰方面强, 在准确、灵活、特异性方面明显优于其他法，且无需临时配制，减少 人为误差，适用作为实验室的常规方式。【参考文献】1叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床查验操作规程M.第3版.南京：东南大学出版社，2006： 456457.2王琏文，高恩锌.五种不同血清总胆红素测定方式挑选 和推荐改良J G法的实验报告J.中华查验医学查验杂志，2002, 5(1)： 25.3邱谷.溶血对重氮法血清胆红素测定的干扰分析J. 上海医学查验杂志，2003, 15： 350356.4马荣红，王晖，秦锦屏.锐酸盐氧化法测定血清总胆红素、直接胆红素的方式评判J.江西医学查验，2002, 20： 9394.